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中国食品学报 2016年第6期16卷 79-87页

作者：吴丽云倪辉李鹤宾肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门医学高等专科学校福建厦门361008

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基... 详细信息

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基和还原能力来评价其抗氧化活性。结果表明:获得1株产褐藻胶裂解酶菌株ALW5,16S rRNA基因序列分析显示该菌株归属于微泡菌属。菌株ALW5产胞外褐藻胶裂解酶,酶的最适反应温度45℃,最适pH 7.0;在50℃下处理30 min,可保留63%的酶活性,在55℃时酶的稳定性差;在pH 4.0~11.0条件下处理30 min,可保留60%以上的酶活性,pH稳定性范围宽;10 mmol/L的K^+、Na^+和Mg^(2+)对酶有明显的激活作用,而Ca^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)、Ba^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe3+和Al3+均对酶有不同程度的抑制作用;除了EDTA和SDS,酶对其余抑制剂和去污剂具有好的抗性。褐藻胶裂解酶酶解产物对DPPH自由基和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为10.3 mg/m L和2.9 mg/m L,还原能力较强,具有良好的抗氧化能力。

关键词：微泡菌属褐藻胶裂解酶酶学性质酶解产物抗氧化活性

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一株产卡拉胶酶细菌的分离鉴定及其酶学性质

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微生物学报 2015年第2期55卷 140-148页

作者：许彩云朱艳冰倪辉蔡慧农李利君肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶... 详细信息

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶酶进行纯化并采用DNS测酶活的方法测定酶学性质。【结果】从红树林土壤腐叶中分离出1株高产κ-卡拉胶酶的菌株ASY5,经鉴定该菌株为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas ***5)。纯化得到的κ-卡拉胶酶的分子量约为30 k Da;酶学性质试验表明,其最适反应温度和p H分别为60℃和7.5,在50℃以下酶的稳定性较好,在p H 7.0-9.0范围内酶活力较稳定,对κ-卡拉胶具有良好的底物特异性,以κ-卡拉胶为底物时Km值和Vmax值分别为2.28 mg/m L和147.06μmol/(min·mg),Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Al3+等对酶活有显著的促进作用,而Ag+、Zn2+、Cd2+及SDS对酶活有强烈的抑制作用。【结论】分离到的细菌假交替单胞菌Pseudoalteromonas ***5产生的κ-卡拉胶酶在较高的温度和碱性条件下均具有较高的酶活性,为利用卡拉胶水解酶产生卡拉寡糖的研究和应用奠定了基础。

关键词： κ-卡拉胶酶分离鉴定酶学性质

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海洋细菌JMUAZ5琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

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中国食品学报 2016年第1期16卷 61-68页

作者：赵蕊倪辉洪清林肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 绿麒(厦门)海洋生物科技有限公司福建厦门361021

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RN... 详细信息

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RNA基因序列分析确定菌株的分类地位;研究菌株所产琼胶酶粗酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除自由基ABTS·+的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。【结果】分离到一株产胞外琼胶酶的菌株JMUAZ5,根据16S r RNA基因序列分析,该菌株归属于弧菌属(Vibrio sp.);菌株JMUAZ5琼胶酶粗酶具有良好的底物专一性;最适反应温度为40°C,在20°C和25°C条件下稳定;最适反应p H值为8.0,在p H 6.0~10.0范围内稳定;Ca^(2+)和Al^(3+)对酶活性具有强烈促进作用,而Zn^(2+)和Fe^(3+)对酶具有强烈抑制作用;琼胶酶粗酶对测试的抑制剂、去垢剂和变性剂均具有好的抗性;酶解产物琼胶低聚糖具有还原能力和清除ABTS·+的能力。【结论】海洋细菌弧菌属JMUAZ5可产胞外琼胶酶,酶解产物有一定的抗氧化活性,具有潜在应用价值。

关键词：弧菌属琼胶酶酶学性质抗氧化活性

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红毛藻多糖对H;O;诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

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食品科学 2021年

作者：何萍萍郑雅君郑明静姜泽东杜希萍朱艳冰倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门市食品生物工程技术研究中心

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide，BFP）对H;O;诱导的人结肠腺癌细胞（Caco-2）氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢(Hydrogen peroxide，H;O;)诱导的Caco-2氧化损伤模型，通过形态学观察和测定细... 详细信息

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide，BFP）对H;O;诱导的人结肠腺癌细胞（Caco-2）氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢(Hydrogen peroxide，H;O;)诱导的Caco-2氧化损伤模型，通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物等相关物质及酶活，评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：多糖BFP显著提高H;O;诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力，降低细胞内活性氧生成水平，提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性以及还原型谷胱甘肽的水平，减少丙二醛生成，并通过抑制Caspase-3和Caspase-9的酶活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：红毛藻多糖BFP对H;O;诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用，可通过增强细胞内源性抗氧化酶的活力、提高非酶类抗氧化物的水平和抑制细胞凋亡显著缓解H;O;诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。

关键词：红毛藻多糖人结肠腺癌细胞氧化应激损伤细胞凋亡保护作用

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泡叶藻聚糖低分子质量降解片段组成特征及其体外免疫诱导活性

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食品科学 2019年第11期40卷 139-145页

作者：何萍萍韦敬柳乙姜泽东朱艳冰倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通... 详细信息

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通过酸水解法和双氧水氧化降解法制备泡叶藻聚糖低分子质量降解片段,利用超滤法和Sephadex G-50凝胶柱层析分离纯化得到4个泡叶藻聚糖低分子质量片段:HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2;采用对氨基苯甲酸乙酯柱前衍生样品后进行高效液相色谱及化学方法分析其单糖组成和化学组成;采用高效分子排阻色谱法测定其重均分子质量;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型分析HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2的体外免疫诱导活性。结果:泡叶藻聚糖低分子质量片段的组成特征表明HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2均为杂多糖,且单糖组成存在较大差异,其重均分子质量分别为4.80、4.20、5.30、2.30 kDa。免疫活性分析细胞模型结果表明,HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F2在所测定质量浓度范围(0~200μg/mL)内能明显诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),而H2O2-F1诱导RAW264.7细胞释放NO和TNF-α的活性明显低于HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2。结论:泡叶藻聚糖低分子质量降解片段(HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2)具有明显的免疫诱导活性,其中HCl-F1和H2O2-F2的免疫诱导活性明显高于泡叶藻聚糖。结合其化学组成分析的结果,提示泡叶藻聚糖低分子质量降解片段的免疫诱导活性是由单糖组成和硫酸根质量分数共同决定的。

关键词：泡叶藻聚糖低分子质量降解片段分离纯化化学组成体外免疫诱导活性

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江蓠琼胶寡糖抗氧化性及对罗非鱼肉的保鲜作用

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食品科技 2017年第2期42卷 149-154页

作者：宋香凝郑毅姜泽东倪辉蔡慧农肖安风集美大学食品与生物工程学院厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门361021

研究了江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性及其对罗非鱼肉的保鲜作用。首先,以酶法制备的江蓠琼胶寡糖为研究对象,通过测定江蓠琼胶寡糖对DPPH自由基、ABTS^+自由基、·OH自由基的清除能力,研究江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性。其次,以p H值、TVB-... 详细信息

研究了江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性及其对罗非鱼肉的保鲜作用。首先,以酶法制备的江蓠琼胶寡糖为研究对象,通过测定江蓠琼胶寡糖对DPPH自由基、ABTS^+自由基、·OH自由基的清除能力,研究江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性。其次,以p H值、TVB-N值、TBA值及菌落总数为指标研究江蓠琼胶寡糖对罗非鱼肉的保鲜作用。研究表明,江蓠琼胶寡糖具有较强的抗氧化活性,且聚合度为3的寡糖的抗氧化活性最高。经寡糖溶液浸泡后的罗非鱼肉在保鲜过程中的p H值、TBA值、TVB-N值及细菌总数均低于空白对照组,因此,江篱琼胶寡糖能有效减缓罗非鱼肉中蛋白质腐败,降低脂肪氧化速率,减少细菌滋生,从而提高保鲜期限,延长罗非鱼的货架期。

关键词：琼胶寡糖抗氧化性罗非鱼肉保鲜作用

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突变芳香基硫酸酯酶改性琼脂的工艺优化及其性能表征

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食品工业科技 2021年第5期42卷 39-44页

作者：张成昊姜泽东李鹤宾倪辉朱艳冰李清彪集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门医学院福建厦门361023

目的:明确食鹿角菜交替假单胞菌突变芳香基硫酸酯酶K253Q改性琼脂的制备工艺,表征酶法改性琼脂的性能特征。方法:以硫酸根脱除率为评价指标,考察反应时间、加酶量、温度、pH对突变芳香基硫酸酯酶K253Q处理琼脂的影响,并对理化性质和结... 详细信息

目的:明确食鹿角菜交替假单胞菌突变芳香基硫酸酯酶K253Q改性琼脂的制备工艺,表征酶法改性琼脂的性能特征。方法:以硫酸根脱除率为评价指标,考察反应时间、加酶量、温度、pH对突变芳香基硫酸酯酶K253Q处理琼脂的影响,并对理化性质和结构进行表征。结果:以4 g琼脂为原料,确定最佳工艺条件为:反应时间6 h,加酶量80 U,反应温度50℃,初始pH7.0。另外,以100 g琼脂为原料进行放大实验,在最佳工艺条件下,硫酸根脱除率达到50.1%。在此条件下,K253Q处理后琼脂的凝胶强度、3,6-内醚半乳糖含量、白度和透明度均有显著提高,而灰分和粘度值显著降低(P<0.05)。扫描电镜分析显示,K253Q处理琼脂的微观结构表面突起之间连接更加紧密,表面更光滑。结论:K253Q处理琼脂后提高了琼脂的品质,琼脂硫酸根含量降低,凝胶强度、3,6-内醚半乳糖含量、白度和透明度提高,灰分降低。

关键词：琼脂突变芳香基硫酸酯酶改性琼脂制备性能表征

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Fe3O4磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶Alg L17的研究

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食品工业科技 2020年第6期41卷 23-27页

作者：张曦文宋昕祺李鹤宾姜泽东倪辉朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 厦门医学院药学系福建厦门361023 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

本论文旨在优化微泡菌褐藻胶裂解酶AlgL17固定化条件,以期探索出高效的固定化条件。以单宁酸功能化的四氧化三铁磁性纳米粒子作为载体,对褐藻胶裂解酶AlgL17进行固定化条件优化。测定固定化酶的最适反应温度和最适反应pH,并对固定化酶... 详细信息

本论文旨在优化微泡菌褐藻胶裂解酶AlgL17固定化条件,以期探索出高效的固定化条件。以单宁酸功能化的四氧化三铁磁性纳米粒子作为载体,对褐藻胶裂解酶AlgL17进行固定化条件优化。测定固定化酶的最适反应温度和最适反应pH,并对固定化酶进行傅里叶变换红外光谱(FTIR)和扫描电镜(SEM)检测。结果表明,褐藻胶裂解酶AlgL17最佳固定化条件为:加酶量2.7 U、载体量25 mg、固定时间5 h,固定化酶的最适反应条件为:温度35℃、pH8.5。FTIR和SEM结果显示,褐藻胶裂解酶AlgL17固定在载体表面。四氧化三铁磁性纳米粒子可以成功固定褐藻胶裂解酶AlgL17,固定化后的褐藻胶裂解酶具有工业应用的前景。

关键词：磁性纳米粒子褐藻胶裂解酶固定化酶条件优化

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响应面优化微泡菌ALW1产褐藻胶裂解酶的发酵条件

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发酵科技通讯 2016年第2期45卷 75-80页

作者：李永幸杨帆姜泽东倪辉杨秋明肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

采用单因素和响应面法对产褐藻胶裂解酶菌种Microbulbifer ***1发酵产酶的培养条件进行优化。通过单因素实验,得到发酵条件如下:培养基初始pH 7.5,接种量5%,装液量50 m L,温度25℃,最大酶活力达到117.1 U/m L。在单因素实验的基础上,通... 详细信息

采用单因素和响应面法对产褐藻胶裂解酶菌种Microbulbifer ***1发酵产酶的培养条件进行优化。通过单因素实验,得到发酵条件如下:培养基初始pH 7.5,接种量5%,装液量50 m L,温度25℃,最大酶活力达到117.1 U/m L。在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken设计和响应面分析,得到最佳的发酵培养条件:培养基初始pH 8.0,接种量6.5%,装液量50m L,温度23℃,褐藻胶裂解酶活力达到130 U/m L,比基础培养条件下提高16.5%。

关键词：微泡菌ALW1 褐藻胶裂解酶响应面分析条件优化

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κ-卡拉胶酶的中试放大、分离纯化及生物信息学分析

κ-卡拉胶酶的中试放大、分离纯化及生物信息学分析

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中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛

作者：许彩云肖安风吴昌正倪辉蔡慧农集美大学食品与生物工程学院福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室

【目的】对菌株Pseudoalteromonas ***5产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行中试放大实验;κ-卡拉胶酶经纯化后对其进行生物信息学分析。【方法】对产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行了7 L、20L、200 L的中试放大实验;通过硫酸铵沉淀、离子交换层析... 详细信息

【目的】对菌株Pseudoalteromonas ***5产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行中试放大实验;κ-卡拉胶酶经纯化后对其进行生物信息学分析。【方法】对产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行了7 L、20L、200 L的中试放大实验;通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析、SDS-PAGE对κ-卡拉胶酶进行分离纯化并对得到的纯酶进行质谱分析;采用NCBI、Expasy、Motif scan等多种在线生物软件对κ-卡拉胶酶蛋白基因进行生物信息学分析。【结果】发酵放大后,7 L、20 L和200 L罐上发酵产酶规律与摇瓶发酵基本一致,其酶活力最高分别为4428 U/mL、2700 U/mL、918 U/mL;κ-卡拉胶酶纯化后在SDS-PAGE凝胶上得到单一的条带;基于蛋白质的氨基酸序列从蛋白质的理化性质、亲(疏)水性、跨膜区、信号肽、细胞定位、二级结构、结构域和功能域等方面进行生物信息学分析。【结论】随发酵工艺放大κ-卡拉胶酶活呈下降趋势,但依然保持较高的酶活力;生物信息学分析为阐明κ-卡拉胶酶的蛋白结构及作用机理提供了理论基础。

关键词： κ-卡拉胶酶中试放大分离纯化生物信息学分析

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