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中国食品学报 2019年第11期19卷 38-45页

作者：吴丽云朱艳冰银小倩李鹤宾倪辉肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门医学院福建厦门361008

目的:将丁香假单孢菌的褐藻胶裂解酶进行克隆表达和纯化,研究重组酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为进一步研究该酶的结构与功能奠定良好的基础。方法:利用PCR扩增褐藻胶裂解酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析... 详细信息

目的:将丁香假单孢菌的褐藻胶裂解酶进行克隆表达和纯化,研究重组酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为进一步研究该酶的结构与功能奠定良好的基础。方法:利用PCR扩增褐藻胶裂解酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除ABTS·+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。结果:来自丁香假单孢菌的重组褐藻胶裂解酶的分子质量为40.8 ku。该重组酶专一性降解聚甘露糖醛酸,酶的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,温度低于50℃时稳定。除了SDS和DTT,重组酶对其它抑制剂和去垢剂具有较好的抗性。酶解产物对ABTS·+和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.56 mg/mL和0.56 mg/mL,还原能力较强。结论:该重组褐藻胶裂解酶的酶解产物有一定的抗氧化活性,具有应用潜力。

关键词：丁香假单孢菌褐藻胶裂解酶酶学性质抗氧化活性

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微泡菌属ALW5褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

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中国食品学报 2016年第6期16卷 79-87页

作者：吴丽云倪辉李鹤宾肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门医学高等专科学校福建厦门361008

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基... 详细信息

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基和还原能力来评价其抗氧化活性。结果表明:获得1株产褐藻胶裂解酶菌株ALW5,16S rRNA基因序列分析显示该菌株归属于微泡菌属。菌株ALW5产胞外褐藻胶裂解酶,酶的最适反应温度45℃,最适pH 7.0;在50℃下处理30 min,可保留63%的酶活性,在55℃时酶的稳定性差;在pH 4.0~11.0条件下处理30 min,可保留60%以上的酶活性,pH稳定性范围宽;10 mmol/L的K^+、Na^+和Mg^(2+)对酶有明显的激活作用,而Ca^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)、Ba^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe3+和Al3+均对酶有不同程度的抑制作用;除了EDTA和SDS,酶对其余抑制剂和去污剂具有好的抗性。褐藻胶裂解酶酶解产物对DPPH自由基和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为10.3 mg/m L和2.9 mg/m L,还原能力较强,具有良好的抗氧化能力。

关键词：微泡菌属褐藻胶裂解酶酶学性质酶解产物抗氧化活性

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固定化脂肪酶转酯化合成维生素A棕榈酸酯的分离纯化

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中国食品学报 2017年第12期17卷 116-121页

作者：董丛丛黄高凌杨远帆李利君陈昭华杜希萍集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

利用冷冻结晶和萃取的方法对由固定化脂肪酶催化维生素A醋酸酯和棕榈酸合成的维生素A棕榈酸酯进行分离纯化,获得纯度高的维生素A棕榈酸酯。分离纯化维生素A棕榈酸酯的工艺流程为:将反应液先在4℃放置20 h,然后在-20℃放置8 h,除去过量... 详细信息

利用冷冻结晶和萃取的方法对由固定化脂肪酶催化维生素A醋酸酯和棕榈酸合成的维生素A棕榈酸酯进行分离纯化,获得纯度高的维生素A棕榈酸酯。分离纯化维生素A棕榈酸酯的工艺流程为:将反应液先在4℃放置20 h,然后在-20℃放置8 h,除去过量的棕榈酸。液-液萃取,纯化。以84%乙醇-水∶石油醚=3∶1(v/v)为萃取溶剂,萃取温度4℃,萃取级数4次,此时维生素A棕榈酸酯纯度达到98.3%,本工艺为维生素A棕榈酸酯的生产提供了技术支持。

关键词：冷冻结晶萃取维生素A棕榈酸酯分离纯化

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一株产卡拉胶酶细菌的分离鉴定及其酶学性质

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微生物学报 2015年第2期55卷 140-148页

作者：许彩云朱艳冰倪辉蔡慧农李利君肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶... 详细信息

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶酶进行纯化并采用DNS测酶活的方法测定酶学性质。【结果】从红树林土壤腐叶中分离出1株高产κ-卡拉胶酶的菌株ASY5,经鉴定该菌株为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas ***5)。纯化得到的κ-卡拉胶酶的分子量约为30 k Da;酶学性质试验表明,其最适反应温度和p H分别为60℃和7.5,在50℃以下酶的稳定性较好,在p H 7.0-9.0范围内酶活力较稳定,对κ-卡拉胶具有良好的底物特异性,以κ-卡拉胶为底物时Km值和Vmax值分别为2.28 mg/m L和147.06μmol/(min·mg),Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Al3+等对酶活有显著的促进作用,而Ag+、Zn2+、Cd2+及SDS对酶活有强烈的抑制作用。【结论】分离到的细菌假交替单胞菌Pseudoalteromonas ***5产生的κ-卡拉胶酶在较高的温度和碱性条件下均具有较高的酶活性,为利用卡拉胶水解酶产生卡拉寡糖的研究和应用奠定了基础。

关键词： κ-卡拉胶酶分离鉴定酶学性质

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海洋细菌JMUAZ5琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

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中国食品学报 2016年第1期16卷 61-68页

作者：赵蕊倪辉洪清林肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 绿麒(厦门)海洋生物科技有限公司福建厦门361021

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RN... 详细信息

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RNA基因序列分析确定菌株的分类地位;研究菌株所产琼胶酶粗酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除自由基ABTS·+的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。【结果】分离到一株产胞外琼胶酶的菌株JMUAZ5,根据16S r RNA基因序列分析,该菌株归属于弧菌属(Vibrio sp.);菌株JMUAZ5琼胶酶粗酶具有良好的底物专一性;最适反应温度为40°C,在20°C和25°C条件下稳定;最适反应p H值为8.0,在p H 6.0~10.0范围内稳定;Ca^(2+)和Al^(3+)对酶活性具有强烈促进作用,而Zn^(2+)和Fe^(3+)对酶具有强烈抑制作用;琼胶酶粗酶对测试的抑制剂、去垢剂和变性剂均具有好的抗性;酶解产物琼胶低聚糖具有还原能力和清除ABTS·+的能力。【结论】海洋细菌弧菌属JMUAZ5可产胞外琼胶酶,酶解产物有一定的抗氧化活性,具有潜在应用价值。

关键词：弧菌属琼胶酶酶学性质抗氧化活性

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红毛藻多糖对H;O;诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

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食品科学 2021年

作者：何萍萍郑雅君郑明静姜泽东杜希萍朱艳冰倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门市食品生物工程技术研究中心

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide，BFP）对H;O;诱导的人结肠腺癌细胞（Caco-2）氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢(Hydrogen peroxide，H;O;)诱导的Caco-2氧化损伤模型，通过形态学观察和测定细... 详细信息

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide，BFP）对H;O;诱导的人结肠腺癌细胞（Caco-2）氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢(Hydrogen peroxide，H;O;)诱导的Caco-2氧化损伤模型，通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物等相关物质及酶活，评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：多糖BFP显著提高H;O;诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力，降低细胞内活性氧生成水平，提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性以及还原型谷胱甘肽的水平，减少丙二醛生成，并通过抑制Caspase-3和Caspase-9的酶活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：红毛藻多糖BFP对H;O;诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用，可通过增强细胞内源性抗氧化酶的活力、提高非酶类抗氧化物的水平和抑制细胞凋亡显著缓解H;O;诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。

关键词：红毛藻多糖人结肠腺癌细胞氧化应激损伤细胞凋亡保护作用

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泡叶藻聚糖低分子质量降解片段组成特征及其体外免疫诱导活性

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食品科学 2019年第11期40卷 139-145页

作者：何萍萍韦敬柳乙姜泽东朱艳冰倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通... 详细信息

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通过酸水解法和双氧水氧化降解法制备泡叶藻聚糖低分子质量降解片段,利用超滤法和Sephadex G-50凝胶柱层析分离纯化得到4个泡叶藻聚糖低分子质量片段:HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2;采用对氨基苯甲酸乙酯柱前衍生样品后进行高效液相色谱及化学方法分析其单糖组成和化学组成;采用高效分子排阻色谱法测定其重均分子质量;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型分析HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2的体外免疫诱导活性。结果:泡叶藻聚糖低分子质量片段的组成特征表明HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2均为杂多糖,且单糖组成存在较大差异,其重均分子质量分别为4.80、4.20、5.30、2.30 kDa。免疫活性分析细胞模型结果表明,HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F2在所测定质量浓度范围(0~200μg/mL)内能明显诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),而H2O2-F1诱导RAW264.7细胞释放NO和TNF-α的活性明显低于HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2。结论:泡叶藻聚糖低分子质量降解片段(HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2)具有明显的免疫诱导活性,其中HCl-F1和H2O2-F2的免疫诱导活性明显高于泡叶藻聚糖。结合其化学组成分析的结果,提示泡叶藻聚糖低分子质量降解片段的免疫诱导活性是由单糖组成和硫酸根质量分数共同决定的。

关键词：泡叶藻聚糖低分子质量降解片段分离纯化化学组成体外免疫诱导活性

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虾青素和β-胡萝卜素的抗氧化活性及其协同作用研究

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食品与发酵工业 2021年第9期47卷 8-15页

作者：张涛邓思陈艳红杜希萍集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

基于1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基清除率、·OH清除率,铁离子还原能力、抗油脂过氧化能力和氧自由基吸收能力(oxygen-radical absorbance capacity,ORAC)法研究虾青素和β-胡萝卜素的抗氧化能力;进一步以DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、·OH清除率为指标评价两者联合作用的抗氧化能力。结果表明,虾青素和β-胡萝卜素在6种抗氧化实验中均具有抗氧化作用,且虾青素的抗氧化作用强于β-胡萝卜素。其中,虾青素对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和·OH的半最大效应浓度(EC 50)值分别为(29.95±3.01)、(61.21±4.17)、(26.12±5.14)μg/mL。虾青素与β-胡萝卜素组合对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和·OH清除率具有协同作用,高浓度的虾青素与β-胡萝卜素的组合不利于两者产生抗氧化协同作用。虾青素、β-胡萝卜素从法夫酵母提取物中鉴定得出但结构相似很难分离,探究两者之间的相互作用,为应用法夫酵母开发高效的抗氧化剂提供了理论依据。

关键词：虾青素 β-胡萝卜素抗氧化抗氧化剂协同作用

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响应面法优化纤维素酶辅助从泡叶藻中提取泡叶藻聚糖的工艺

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过程工程学报 2018年第3期18卷 632-638页

作者：鲍青云韦敬柳乙姜泽东余刚黄高凌朱艳冰肖安风倪辉李清彪集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021

通过单因素实验研究纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖时液料比、酶添加量、酶解温度、酶解时间等关键因素对泡叶藻聚糖提取率的影响,并进一步采用Box-Behnken实验设计和响应面分析法优化其工艺参数.结果表明,纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖的优... 详细信息

通过单因素实验研究纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖时液料比、酶添加量、酶解温度、酶解时间等关键因素对泡叶藻聚糖提取率的影响,并进一步采用Box-Behnken实验设计和响应面分析法优化其工艺参数.结果表明,纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖的优化工艺条件为液料比30 mL/g、酶浓度200 IU/mL、酶解时间2.0 h、酶解温度50℃,该条件下多糖提取率为14.65%±0.73%,与模型预测值14.75%非常接近,采用响应面法对泡叶藻聚糖提取条件进行优化合理可行.

关键词：纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖工艺优化响应面法

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江蓠琼胶寡糖抗氧化性及对罗非鱼肉的保鲜作用

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食品科技 2017年第2期42卷 149-154页

作者：宋香凝郑毅姜泽东倪辉蔡慧农肖安风集美大学食品与生物工程学院厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门361021

研究了江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性及其对罗非鱼肉的保鲜作用。首先,以酶法制备的江蓠琼胶寡糖为研究对象,通过测定江蓠琼胶寡糖对DPPH自由基、ABTS^+自由基、·OH自由基的清除能力,研究江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性。其次,以p H值、TVB-... 详细信息

研究了江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性及其对罗非鱼肉的保鲜作用。首先,以酶法制备的江蓠琼胶寡糖为研究对象,通过测定江蓠琼胶寡糖对DPPH自由基、ABTS^+自由基、·OH自由基的清除能力,研究江蓠琼胶寡糖的抗氧化活性。其次,以p H值、TVB-N值、TBA值及菌落总数为指标研究江蓠琼胶寡糖对罗非鱼肉的保鲜作用。研究表明,江蓠琼胶寡糖具有较强的抗氧化活性,且聚合度为3的寡糖的抗氧化活性最高。经寡糖溶液浸泡后的罗非鱼肉在保鲜过程中的p H值、TBA值、TVB-N值及细菌总数均低于空白对照组,因此,江篱琼胶寡糖能有效减缓罗非鱼肉中蛋白质腐败,降低脂肪氧化速率,减少细菌滋生,从而提高保鲜期限,延长罗非鱼的货架期。

关键词：琼胶寡糖抗氧化性罗非鱼肉保鲜作用

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