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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第5期36卷 396-400页

作者：张彩黄小芬王鑫赵勤俭厦门大学生命科学学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心361102

JC病毒（John Cunningham virus, JCV）属于乳多空病毒科（Papovaviridae）多瘤病毒属（Orthopolyomavirus），1971年从进行性多灶性白质脑病（progressive multifocal leukoencephalopathy, PML）患者的脑中分离并以该患者名字命名，普通人群血清阳性检测率为40%～60%，因AIDS并发PML的患者致死率约为50%，对于免疫力缺陷和免疫力低下的既往感染者，还会引起多瘤病毒相关性肾病（polyomavirus-associated nephropathy, PVAN）、病毒血症等相关疾病，并与胃癌、肺癌、食管癌等癌症的发生密切相关，但其致病机理尚未阐明。由于目前无特异的预防和治疗方法，因此在病毒感染早期的准确检测对疾病的诊断和治疗十分关键，尤其在免疫低下的人群中实现高效、精准、及时的检测至关重要。本文对现有JC病毒的检测技术进行了分析与总结，一些新兴技术的涌现将为实现临床上快速、高效的检测提供参考。

关键词： JC病毒进行性多灶性白质脑病多瘤病毒肾病病毒检测方法

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人免疫缺陷病毒包膜蛋白V3多肽与白喉毒素无毒突变体CRM197结构域A融合蛋白的免疫原性分析及单克隆抗体筛选

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中国生化药物杂志 2017年第4期37卷 1-4页

作者：邵佳张芝晴齐家龙未祥乔佳明李少伟夏宁邵顾颖厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102

目的评估CRM197-HIV-V3作为HIV表位疫苗的潜力,以此筛选HIV单克隆中和抗体,为后续疫苗和治疗性抗体的研究奠定基础。方法将HIV-1 NL4-3 V3肽（299~328 aa）展示在白喉毒素无毒突变体A结构域（CRM197-A）上,利用大肠杆菌原核表达系统... 详细信息

目的评估CRM197-HIV-V3作为HIV表位疫苗的潜力,以此筛选HIV单克隆中和抗体,为后续疫苗和治疗性抗体的研究奠定基础。方法将HIV-1 NL4-3 V3肽（299~328 aa）展示在白喉毒素无毒突变体A结构域（CRM197-A）上,利用大肠杆菌原核表达系统进行表达。纯化后的融合蛋白免疫6~8周龄的雌性Balb/c小鼠,免疫3针后,进行脾脏免疫加强,后将小鼠的脾细胞与小鼠杂交瘤细胞进行融合实验。利用基于免疫斑点印迹法（ELISPOT）的HIV中和筛选平台筛选单克隆抗体,对获得的单抗进行抗原性的分析。结果构建克隆后,成功表达了NL4-3 HIV V3肽融合蛋白（CRM197-A-V3）,免疫小鼠的多抗血清对NL4-3株HIV病毒的中和效价约为103,ELISA检测多抗血清结合CRM197-A-V3抗原效价达到105。通过融合筛选和单细胞克隆化获得8株单克隆抗体。ELISA结果显示与NL4-3-gp120蛋白有较好的结合活性。中和实验结果显示抗体对NL4-3株HIV病毒有很好的中和能力,NC50为0.02μg/m L。结论本研究将HIV V3表位展示在CRM197-A上,成功刺激小鼠产生免疫反应,筛选获得特异性针对NL4-3株HIV的中和单抗。

关键词：人免疫缺陷病毒包膜蛋白V3多肽白喉毒素无毒突变体A结构域表位展示中和单抗

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霍乱毒素B亚基展示HIV-1 gp41 MPER表位的研究

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中国生化药物杂志 2017年第6期37卷 1-5页

作者：未祥张芝晴邵佳黄芳齐家龙高双全李少勇李少伟夏宁邵顾颖厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

目的评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法利用霍乱毒素的B亚基（CTB）作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综... 详细信息

目的评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法利用霍乱毒素的B亚基（CTB）作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综合评价.ELISA法评价融合蛋白的免疫原性;检测免疫血清中IgA类抗体分析小鼠黏膜免疫应答;对小鼠血清中的不同类型的抗体量进行分析,通过流式细胞仪检测PBMC细胞因子IFN-γ和IL-4用以分析小鼠免疫激活途径;病毒中和实验检测免疫血清对病毒感染细胞的抑制能力.结果 CTB作为载体蛋白具有很好的免疫原性,能够诱导免疫系统产生针对MPER表位的抗体,刺激小鼠产生黏膜免疫应答,诱导针对MPER表位的IgA抗体.同时,融合蛋白可以刺激机体的IgG1,IgG2a和IgG2b类抗体的产生和刺激小鼠体内的Th2类免疫途径.中和实验结果显示,CTB-4E10免疫后的血清可以抑制NL4-3病毒对细胞的感染.结论 CTB融合蛋白具有强免疫原性,可以刺激体液免疫反应,黏膜免疫反应和Th2类免疫途径,并且CTB-4E10蛋白免疫血清能够抑制NL4-3病毒感染细胞.本研究为HIV-1 gp41 MPER作为候选疫苗的探索奠定基础.

关键词：霍乱毒素B亚基免疫应答

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杆状病毒-昆虫细胞系统表达的戊型肝炎病毒衣壳蛋白p495的纯化、结构解析以及免疫原性分析

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病毒学报 2016年第3期32卷 342-348页

作者：林庆山蒋婕李婷婷张玉云张振勇郑明华王凯航郑清炳俞海顾颖夏宁邵李少伟厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院福建厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院福建厦门361102

本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放读码框... 详细信息

本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放读码框2(ORF2)的aa112-606片段构建杆状病毒,感染昆虫细胞进行重组蛋白的表达,经过PEG沉淀和阴离子交换层析的纯化,获得纯度为95%以上的p495蛋白,每升细胞培养液最终获得15mg的目的蛋白。经ELISA、分析超离、分子排阻色谱和电镜负染等分析显示p495蛋白具有良好的抗原性且呈现为均一的病毒样颗粒(VLP),沉降系数为51.3S,颗粒直径约20nm。冷冻电镜三维结构解析获得分辨率为3.8的三维结构,揭示p495形成了T=1的等二十面体结构,与已报道的晶体结构相一致。小鼠免疫实验表明p495蛋白与益可宁中p239抗原的免疫原性相当。本研究为进一步开展HEV的受体鉴定、表位结构研究以及疫苗改进等奠定良好的基础。

关键词：戊型肝炎病毒病毒样颗粒真核表达系统 HEVP495蛋白冷冻电镜三维重构免疫应答

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呼吸道合胞病毒在不同龄期BALB/c小鼠上的感染差异

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病毒学报 2016年第4期32卷 411-416页

作者：詹炉停赵敏依含张伟曹健力孙永鹏张璐婧司竣宇夏宁邵郑子峥厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是全世界范围内引起下呼吸道感染的主要病原体,主要高危人群为六个月以下新生儿及65岁以上人群。目前BALB/c小鼠是RSV感染的有效动物模型,但不同周龄BALB/c小鼠感染RSV后的差异性尚未... 详细信息

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是全世界范围内引起下呼吸道感染的主要病原体,主要高危人群为六个月以下新生儿及65岁以上人群。目前BALB/c小鼠是RSV感染的有效动物模型,但不同周龄BALB/c小鼠感染RSV后的差异性尚未有报道。本研究分别选择10、30、60周龄BALB/c小鼠,在鼻腔接种106及107PFU RSV后,对不同龄期小鼠临床一般症状、体重、鼻/肺部病毒滴度及肺组织炎症病理变化进行检测及比较。结果显示感染106PFU RSV后小鼠未出现明显的体重下降,而107PFU RSV感染后能有效引发小鼠在感染后6-11天出现明显的体重下降。检测结果显示,在107PFU感染的小鼠的鼻、肺组织能够检测到明显的病毒复制,肺部免疫组化显示病毒主要定位于肺泡周围,炎症观察结果显示出明显的肺部炎症细胞浸润及组织病理损伤。同时本研究还观察到随着小鼠周龄的增大,感染后体重下降越明显,并能检测到更为明显的肺部病毒及验证损伤。这些结果显示出本研究成功建立了不同周龄BALB/c小鼠RSV感染差异模型,为不同年龄人群RSV感染免疫机制的深入探讨及RSV相关抗体和疫苗药物的选择、评估提供依据。

关键词：呼吸道合胞病毒(RSV) 动物模型 BALB/c小鼠周龄支气管炎

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戊型肝炎病毒感染实验室诊断方法研究进展

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病毒学报 2016年第3期32卷 385-392页

作者：纪文芳温桂平唐自闽夏宁邵郑子峥厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室厦门361102 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102 厦门大学公共卫生学院厦门361102

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的急性病毒性肝炎,已经成为威胁人群健康的公共卫生问题。HEV主要通过消化道传播,但随着HEV输血传播病例的报道,HEV给输血安全带来的风险也受到人们的重视。通过分析戊型肝炎现有... 详细信息

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的急性病毒性肝炎,已经成为威胁人群健康的公共卫生问题。HEV主要通过消化道传播,但随着HEV输血传播病例的报道,HEV给输血安全带来的风险也受到人们的重视。通过分析戊型肝炎现有的诊断手段,以对献血员的HEV筛查提供借鉴作用,这对输血安全中戊型肝炎的预防和控制具有重大意义。目前常用的戊型肝炎检测指标主要包括:HEV RNA、HEV抗原、抗-HEV IgM、抗-HEV IgG。核酸检测是戊型肝炎诊断的"金标准",对于慢性戊型肝炎患者、免疫缺陷人群及无肝炎症状的HEV感染者都有着特别优势。HEV抗原作为HEV现症感染指标,对于血站HEV筛查和急性戊型肝炎诊断有很好的应用价值。抗-HEV IgM是HEV近期感染的标志,不能作为HEV现症感染的单一指标。而抗-HEV IgG只能指示HEV既往感染,不适用于急性戊型肝炎的诊断。目前,献血员HEV检测主要以核酸检测为基础,而HEV抗原检测可能弥补HEV RNA的检测不足。在未来,抗原检测和抗体检测对于献血员HEV筛查的价值还有待更多的研究评价。

关键词：戊型肝炎病毒诊断方法核酸检测抗原检测抗体检测

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戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其中和表位的结构研究进展

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中国人兽共患病学报 2016年第9期32卷 825-831页

作者：郑明华王凯航李琼张晓李少伟夏宁邵厦门大学生命科学学院/国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院/分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门361102

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,被证实为人兽共患病,该病症对免疫力低下人群和已有基础性肝病的患者的危害更为显著。戊肝病毒主要通过粪口途径传播,猪是其主要的天然宿主。近年来,关于戊肝病毒的... 详细信息

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,被证实为人兽共患病,该病症对免疫力低下人群和已有基础性肝病的患者的危害更为显著。戊肝病毒主要通过粪口途径传播,猪是其主要的天然宿主。近年来,关于戊肝病毒的衣壳蛋白及其表位结构的研究取得了重要的进展,对于戊肝病毒的病毒学研究和戊肝疫苗的机制探讨起着重要的指导意义。本文将综述HEV病毒衣壳蛋白的结构研究和中和表位的结构基础,着重说明戊肝病毒中和表位存在型特异性和型交叉两种特征,提示型交叉表位与人兽共患现象的关系。

关键词：戊型肝炎病毒人兽共患结构中和表位

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2016年拉斯克-德贝基临床医学研究奖：丙型肝炎病毒复制子模型推动新型治疗药物发展

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中国科学：生命科学 2016年第12期46卷 1437-1440页

作者：赵勤俭夏宁邵厦门大学公共卫生学院分子病毒学和分子诊断学国家重点实验室厦门361102 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102

2016年的拉斯克．德贝基临床医学研究奖授予了三位杰出的科学家CharlesRice，Ralf Bartenschlager和Michael Sofia，以表彰他们在不同阶段做出的突出贡献，使高效治疗丙型肝炎病毒（hepatitis Cvirus，HCV）感染变成了现实．2013年Sofi... 详细信息

2016年的拉斯克．德贝基临床医学研究奖授予了三位杰出的科学家CharlesRice，Ralf Bartenschlager和Michael Sofia，以表彰他们在不同阶段做出的突出贡献，使高效治疗丙型肝炎病毒（hepatitis Cvirus，HCV）感染变成了现实．2013年Sofia和他带领的研究团队研制的抗病毒药物PSI．7977（商品名Sofosbuvir，索非布韦）被证明可高效治疗慢性HCV感染，并被批准上市，此时距离HCV的发现不到28年．

关键词：丙型肝炎病毒治疗药物临床医学病毒复制子模型 Michael 抗病毒药物批准上市

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抗PD-L1单抗的研制及其对乙型肝炎病毒的抑制效果初步研究

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中国免疫学杂志 2016年第7期32卷 1004-1008,1012页

作者：吴勇张天英宋浏伟夏宁邵袁权厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心公共卫生学院厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司厦门361000

目的:获得具有阻断PD-1/PD-L1结合活性的Anti-PD-L1单克隆抗体,并在体内和体外模型中初步探索其应用于慢性HBV感染治疗的潜力。方法:利用大肠杆菌原核表达系统和离子交换柱层析纯化手段,表达纯化获得具有体外结合活性的人源和鼠源的PD-1... 详细信息

目的:获得具有阻断PD-1/PD-L1结合活性的Anti-PD-L1单克隆抗体,并在体内和体外模型中初步探索其应用于慢性HBV感染治疗的潜力。方法:利用大肠杆菌原核表达系统和离子交换柱层析纯化手段,表达纯化获得具有体外结合活性的人源和鼠源的PD-1/PD-L1蛋白,采用纯化后的人PD-L1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗人PD-L1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,基于间接化学发光免疫法评估了这些抗体与人源和鼠源重组蛋白的结合活性,并定量评估它们对PD-L1体外相互作用的阻断活性。利用慢乙肝病人PBMC体外刺激方法评估其对T细胞功能的促进作用,在HBV转基因小鼠中评估其抑制HBV的效果。结果:本研究获得了8株稳定分泌Anti-PD-L1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中Anti-PD-L1Ab5和Ab6两株单抗与人和小鼠的PD-L1具有较强的交叉反应性,且均可阻断人和小鼠的PD-1/PD-L1结合活性。在慢乙肝病人PBMC刺激培养实验中,Ab5和Ab6可促进γ干扰素水平升高;在HBV转基因小鼠中单剂注射Ab6,48 h后血清HBV DNA水平降低20倍,血清HBs Ag水平降低至基线水平的30%。结论:获得了2株具有阻断人和小鼠PD-1/PD-L1结合活性的单克隆抗体,其在PBMC体外刺激培养系统中可促进慢乙肝病人的T细胞功能,在HBV转基因小鼠中具有显著的抗病毒效果,具备一定的治疗应用潜力。

关键词：程序性细胞死亡蛋白配体1 治疗性单克隆抗体乙型肝炎病毒免疫治疗

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复合前列腺特异性抗原的单克隆抗体制备及化学发光法免疫定量检测试剂研究

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中国免疫学杂志 2016年第8期32卷 1171-1174,1178页

作者：詹炉停温桂平赵敏依含刘江武郭小怡林海军黄刘女夏宁邵郑子峥厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心公共卫生学院厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司厦门361000

目的：获得特异性检测复合前列腺特异性抗原（c-PSA）的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA免疫定量试剂。方法：利用市购c-PSA抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,间接法ELISA差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、总前列腺... 详细信息

目的：获得特异性检测复合前列腺特异性抗原（c-PSA）的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA免疫定量试剂。方法：利用市购c-PSA抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,间接法ELISA差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、总前列腺特异型抗原（t-PSA）的抗体,抗体配对后化学发光定量检测血清中c-PSA蛋白。结果：获得抗体配对1A10/7D6-SAE,经c-PSA标准品及临床血清样本初步筛选,该抗体配对适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;血清阳性样本与阴性样本检测结果显示具有统计学意义（P〈0.000 1）;阳性样本定量结果与Siemens公司复合前列腺特异性抗原测定试剂盒（直接化学发光法）的相关系数为0.97;线性范围为0.1~100 ng/ml;检测灵敏度为0.005 ng/ml。结论：成功筛选获得特异性检测c-PSA的抗体配对,并开发c-PSA化学发光免疫定量试剂,其检测能力与国际主流试剂相当。

关键词：复合前列腺特异性抗原单克隆抗体化学发光定量试剂

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