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中国化学会第十届全国化学生物学学术会议

作者：章苗苗吴丽娜宋毅怡陈瑜颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室福建省厦门市思明区思明南路422号361005

细菌的抗药性危害日益严重,阐明致病菌中毒素－抗毒素系统(toxin-antitoxin system,简称TA 系统)的作用机理和生理功能对于研发防控致病菌的新策略和疾病诊断治疗等具有重要意义。

关键词：毒素-抗毒素系统应激条件单细菌水平超高灵敏流式技术

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单细菌水平蛋白质相互作用的高通量定量检测新方法

单细菌水平蛋白质相互作用的高通量定量检测新方法

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中国化学会第30届学术年会-第二十八分会：化学生物学

作者：吴丽娜汪旭张健强黄天逊颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系化学生物学福建省重点实验室谱学分析与仪器教育部重点实验室

蛋白一蛋白相互作用研究是理解生命活动的基础,细菌双杂交系统已被广泛应用于蛋白质相互作用研究。单个细菌水平的蛋白一蛋白相互作用研究有助于更准确地考察蛋白在活细胞中的相互作用状况,揭示传统生物化学检测手段中因集权平均而被掩... 详细信息

蛋白一蛋白相互作用研究是理解生命活动的基础,细菌双杂交系统已被广泛应用于蛋白质相互作用研究。单个细菌水平的蛋白一蛋白相互作用研究有助于更准确地考察蛋白在活细胞中的相互作用状况,揭示传统生物化学检测手段中因集权平均而被掩盖的个体差异。本研究通过流式检测技术与细菌双杂交系统的有机结合,发展灵敏、快速、高分辨、高通量的蛋白一蛋白相互作用定量研究新方法。利用流式分析技术,结合双色免疫荧光染色法,我们在单细菌水平对蛋白相互作用强弱(报告基因)和相互作用蛋白自身表达进行同时定量检测。提出相对报告基因表达量(单位相互作用蛋白所产生的报告基因表达量),并将其应用到不同相互作用强度蛋白对的检测和区分,建立了一种快速检测蛋白相互作用强度的新方法。

关键词：细菌双杂交单个细菌水平流式检测技术蛋白质相互作用

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单颗粒水平脂质纳米药物的多参数定量表征技术

单颗粒水平脂质纳米药物的多参数定量表征技术

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中国微米纳米技术学会纳米科学技术分会第四届年会暨2016国际纳米生物与医学学术会议

作者：陈超翔朱少彬马玲周颖星张文强王硕颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室福建厦门361005

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线粒体蛋白质组学研究进展

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分析化学 2015年第9期43卷 1257-1264页

作者：许静怡陈超翔韩锦艳杭纬颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室

线粒体是细胞能量代谢、生物合成和细胞死亡的调控中心,其功能异常会导致许多疾病的产生。线粒体蛋白质组学研究为解析线粒体的生理功能、探索线粒体相关疾病的发病机制及促进线粒体为靶向的药物研发提供重要理论依据。本文对线粒体蛋... 详细信息

线粒体是细胞能量代谢、生物合成和细胞死亡的调控中心,其功能异常会导致许多疾病的产生。线粒体蛋白质组学研究为解析线粒体的生理功能、探索线粒体相关疾病的发病机制及促进线粒体为靶向的药物研发提供重要理论依据。本文对线粒体蛋白质组学的研究方法,尤其是近年的技术发展以及线粒体蛋白质组学的性质及其应用进行总结,并对其未来的发展前景和挑战进行展望。

关键词：线粒体蛋白质组学质谱疾病评述

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线粒体凋亡通路膜电位降低与细胞色素C释放的相互关系研究

线粒体凋亡通路膜电位降低与细胞色素C释放的相互关系研究

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中国化学会第30届学术年会-第二十八分会：化学生物学

作者：许静怡韩锦艳陈超翔张翔张舒越颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室

在线粒体凋亡通路中,细胞色素C(Cyt C)释放与膜电位(△φ)降低的先后顺序一直存在争议。我们猜测在依赖Bax/Bak寡聚形成孔道(Channel Model)和通过基质肿胀(Swelling Model,肿胀导致△φ降低)释放Cyt C的两种模型中,CytC释放分别是△φ... 详细信息

在线粒体凋亡通路中,细胞色素C(Cyt C)释放与膜电位(△φ)降低的先后顺序一直存在争议。我们猜测在依赖Bax/Bak寡聚形成孔道(Channel Model)和通过基质肿胀(Swelling Model,肿胀导致△φ降低)释放Cyt C的两种模型中,CytC释放分别是△φ降低的上游和下游事件。为了证明第二个假设,我们将桦木酸(BetA)由低到高浓度作用于提纯线粒体(膜电位保持),用课题组自行研制的超高灵敏流式检测装置在单线粒体水平考察△φ(膜电位探针)、Cyt C及线粒体外膜Bcl-2和Bcl-xl含量(免疫荧光法)、以及内膜通透性(利用钴离子对于钙黄绿素的荧光猝灭),并用酶标仪考察线粒体肿胀。实验发现△φ在10μM Bet A作用下显著降低,同时观测到线粒体肿胀,Cyt C在大于50μM Bet A作用下显著释放,且△φ降低抑制剂(CsA)能阻碍Cyt C释放。由此我们推测Bet A通过Swelling Model释放Cyt C,△φ降低早于Cyt C释放,故Cyt C释放是△φ降低的下游事件。此外,我们对线粒体表面Bcl-2和Bcl-xl(抑制PT孔开放)蛋白进行测定,发现在50μM Bet A作用下这两种蛋白含量下降,同时线粒体内膜通透性显著增强,进一步表明Bet A的作用极可能是通过Swelling Model发生。由于Swelling Model的发生不依赖胞浆蛋白Bax等,故通过该模型使线粒体释放Cyt C的药物可直接靶向线粒体,在临床上可能具有更好的应用前景。

关键词：超高灵敏流式检测装置单线粒体分析膜电位细胞色素C 基质肿胀

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单颗粒水平脂质体表面配体密度快速定量表征方法

单颗粒水平脂质体表面配体密度快速定量表征方法

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中国化学会第30届学术年会-第三十八分会：纳米生物效应与纳米药物化学

作者：陈超翔陈晨周颖星朱少彬张文强颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室

纳米靶向给药系统不仅可以增加药物在病变组织的浓度和疗效,而且能最大限度地降低药物的毒副作用,是当今纳米药物研发的重点发展方向。靶向纳米药物表面配体的数量、密度及其分布是研究纳米颗粒与细胞相互作用的重要参数,也是衡量靶向... 详细信息

纳米靶向给药系统不仅可以增加药物在病变组织的浓度和疗效,而且能最大限度地降低药物的毒副作用,是当今纳米药物研发的重点发展方向。靶向纳米药物表面配体的数量、密度及其分布是研究纳米颗粒与细胞相互作用的重要参数,也是衡量靶向纳米药物质量的一个重要指标,因此需要发展单颗粒水平的配体密度定量表征方法。利用实验室研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM),我们发展了一种脂质体表面配体定量表征的快速方法。以叶酸脂质体为模型,我们采用荧光标记的叶酸受体对样本进行染色,使用粒径和荧光当量已知的二氧化硅纳米颗粒作为标准品,通过对单个叶酸脂质体的散射光和荧光信号的同时检测,建立了靶向纳米药物表面配体密度及其分布的单颗粒水平表征方法。该方法将为靶向纳米药物的合成优化、质量控制及细胞摄入研究等提供快速、高效的定量表征技术。

关键词：靶向纳米药物叶酸脂质体超高灵敏流式单颗粒定量表征

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单线粒体水平多参数高通量检测的信号转导研究应用

单线粒体水平多参数高通量检测的信号转导研究应用

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中国化学会第30届学术年会-第二十八分会：化学生物学

作者：颜晓梅韩锦艳许静怡陈超翔张翔张舒越厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室

线粒体是高度动态的细胞器,在真核细胞能量代谢和信号转导中发挥重要的调控作用。相对于传统的细胞分析或者免疫印迹测定,高通量的单线粒体检测技术可揭示因集权平均而被掩盖的个体差异,简化样品的复杂性,使实验数据的解析更加明确。结... 详细信息

线粒体是高度动态的细胞器,在真核细胞能量代谢和信号转导中发挥重要的调控作用。相对于传统的细胞分析或者免疫印迹测定,高通量的单线粒体检测技术可揭示因集权平均而被掩盖的个体差异,简化样品的复杂性,使实验数据的解析更加明确。结合瑞利散射和鞘流单分子荧光检测技术,我们课题组研发了超高灵敏流式检测技术(high sensitivity flow cytometry,HSFCM),实现了单个线粒体的散射和多色荧光信号的同时检测,检测速率高达每分钟上万个颗粒。本文将侧重介绍如何通过HSFCM对线粒体的单颗粒水平多参数、高通量检测,考察线粒体融合与膜电位、氧化还原平衡的相互关系以及线粒体介导的凋亡通路中膜电位降低与细胞色素C释放的相互关系,藉此发展先进的细胞信号转导研究方法。

关键词：线粒体超高灵敏流式检测信号转导线粒体融合膜电位

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超高灵敏流式检测仪的研制、应用及展望

超高灵敏流式检测仪的研制、应用及展望

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中国化学会第30届学术年会

作者：颜晓梅朱少彬王硕李力宏马玲陈超翔田野厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室

基础生命科学研究的不断深入和纳米科技的迅速发展对发展单颗粒水平的高通量、多参数定量表征技术提出了迫切的需求。我们课题组首创性地将瑞利散射与鞘流单分子荧光检测技术相结合,通过减小探测区体积、延长颗粒穿越激光探测区的时间... 详细信息

基础生命科学研究的不断深入和纳米科技的迅速发展对发展单颗粒水平的高通量、多参数定量表征技术提出了迫切的需求。我们课题组首创性地将瑞利散射与鞘流单分子荧光检测技术相结合,通过减小探测区体积、延长颗粒穿越激光探测区的时间、增加激光功率密度、使用高信噪比的单光子计数器等策略,研制成功具有自主知识产权的超高灵敏流式检测仪（high sensitivity flow cytometer,HSFCM）,将单个低折射率纳米颗粒和纳米金的散射检测下限分别推进至24 nm和7 nm,荧光检测下限为3个有机染料分子。HSFCM较传统流式细胞仪的散射和荧光检测灵敏度分别提升4-5个数量级和1-2个数量级,检测速率高达每分钟10,000颗粒。近期,我们尝试从增大物镜的收集效率、调控激光光斑的形状、改进流通池的结构等方面进一步提升仪器的检测性能。本文将汇报HSFCM在病毒、纳米药物、外泌体等粒径小于100 nm的生物纳米颗粒的多参数定量表征方面的应用并对仪器的发展趋势进行展望。

关键词：超高灵敏流式检测单分子荧光病毒纳米药物外泌体

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单颗粒水平脂质体表面配体密度快速定量表征方法

单颗粒水平脂质体表面配体密度快速定量表征方法

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中国化学会第30届学术年会

作者：陈超翔陈晨周颖星朱少彬张文强颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室福建厦门361005

纳米靶向给药系统不仅可以增加药物在病变组织的浓度和疗效，而且能最大限度地降低药物的毒副作用，是当今纳米药物研发的重点发展方向。靶向纳米药物表面配体的数量、密度及其分布是研究纳米颗粒与细胞相互作用的重要参数，也是衡量靶... 详细信息

纳米靶向给药系统不仅可以增加药物在病变组织的浓度和疗效，而且能最大限度地降低药物的毒副作用，是当今纳米药物研发的重点发展方向。靶向纳米药物表面配体的数量、密度及其分布是研究纳米颗粒与细胞相互作用的重要参数，也是衡量靶向纳米药物质量的一个重要指标，因此需要发展单颗粒水平的配体密度定量表征方法。

关键词：靶向纳米药物叶酸脂质体超高灵敏流式单颗粒定量表征

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线粒体凋亡通路膜电位降低与细胞色素C释放的相互关系研究

线粒体凋亡通路膜电位降低与细胞色素C释放的相互关系研究

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中国化学会第30届学术年会

作者：许静怡韩锦艳陈超翔张翔张舒越颜晓梅厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室福建厦门361005

在线粒体凋亡通路中,细胞色素C(Cyt C)释放与膜电位(△φ)降低的先后顺序一直存在争议。我们猜测在依赖Bax/Bak寡聚形成孔道(Channel Model)和通过基质肿胀(Swelling Model,肿胀导致△φ降低)释放Cyt C的两种模型中,Cyt C释放分别是△... 详细信息

在线粒体凋亡通路中,细胞色素C(Cyt C)释放与膜电位(△φ)降低的先后顺序一直存在争议。我们猜测在依赖Bax/Bak寡聚形成孔道(Channel Model)和通过基质肿胀(Swelling Model,肿胀导致△φ降低)释放Cyt C的两种模型中,Cyt C释放分别是△φ降低的上游和下游事件。

关键词：超高灵敏流式检测装置单线粒体分析膜电位细胞色素C 基质肿胀

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