检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2009年第7期25卷 1082-1087页

作者：谢明辉李少伟沈文通李仲艺庄玉娣莫小兵顾颖吴婷张军夏宁邵厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361005

利用大肠杆菌表达系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,经过纯化和重组装过程获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),研究其免疫原性和诱发中和抗体生成的水平。首先,提取HPV18的基因组DNA,通过PCR扩增获得HPV18 L1基因片段,将其插入pTrx... 详细信息

利用大肠杆菌表达系统可溶性表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,经过纯化和重组装过程获得HPV18病毒样颗粒(VLPs),研究其免疫原性和诱发中和抗体生成的水平。首先,提取HPV18的基因组DNA,通过PCR扩增获得HPV18 L1基因片段,将其插入pTrxFus表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达HPV18 L1蛋白;其次,通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析获得高纯度的HPV18 L1蛋白,而后透析去除预先加入的还原剂DTT,使HPV18 L1蛋白自发组装成VLPs;最后,通过动态光散射技术和透射电子显微镜鉴定HPV18 VLPs的大小和形态,利用假病毒细胞中和实验评价HPV18 VLPs在实验动物体内的免疫原性和中和抗体生成水平。结果表明,HPV18L1蛋白可以在大肠杆菌表达系统中以可溶形式表达,经过纯化的HPV18 L1蛋白可以自发组装成为半径约为29.34nm、与HPV病毒外观相似的VLP。该VLPs在小鼠体内的中和抗体半数有效剂量为0.006μg,在兔及山羊体内诱导中和抗体滴度高达107。总之,本研究利用原核表达系统可简便高效地获得具有高度免疫原性的HPV18 VLPs,为HPV18预防性疫苗的开发奠定了基础,具有重要的应用意义。

关键词：大肠杆菌表达系统人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒免疫原性中和抗体

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人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究

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病毒学报 2009年第4期25卷 245-250页

作者：魏旻希李少伟黄博沈文通苏永在张春华顾颖杜海莲张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

利用PCR技术从HPV16阳性阴道分泌物标本中获得HPV16 L1基因片段,并将其插入表达载体pTO-T7中,构建重组表达质粒pTO-T7-HPV16-L1;以该重组质粒转化大肠杆菌ER2566并表达HPV16 L1蛋白;所表达的HPV16 L1蛋白经过硫酸铵沉淀、离子交换层析... 详细信息

利用PCR技术从HPV16阳性阴道分泌物标本中获得HPV16 L1基因片段,并将其插入表达载体pTO-T7中,构建重组表达质粒pTO-T7-HPV16-L1;以该重组质粒转化大肠杆菌ER2566并表达HPV16 L1蛋白;所表达的HPV16 L1蛋白经过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析等纯化步骤后,HPV16 L1纯度达到98%以上,并可在体外装配为直径50nm的病毒样颗粒;动物免疫原性研究结果显示,该病毒样颗粒可诱导高滴度的针对HPV16的中和抗体。上述研究结果表明通过大肠杆菌表达系统制备的HPV16病毒样颗粒具有纯度高,与天然病毒颗粒形态高度相似的特点,并具有高度免疫原性,可以应用于HPV16病毒样颗粒的结构功能研究及HPV16疫苗研发等领域。

关键词：人乳头瘤病毒16型大肠杆菌表达系统纯化病毒样颗粒免疫原性

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抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析

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病毒学报 2011年第3期27卷 202-206页

作者：何芳萍林庆山李少伟魏旻希陈振钦罗文新陈毅歆张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研... 详细信息

在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化。经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位。H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。

关键词：高致病性禽流感病毒单链抗体血凝抑制毕赤酵母

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抗HBV preS1嵌合抗体的真核表达及活性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第2期27卷 167-171页

作者：陈瑛炜罗文新王晋王明桥顾颖林亦伟张军夏宁邵国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门大学生命科学学院361005

目的通过真核系统表达抗HBVpreS1嵌合抗体4D11并分析其活性。方法通过RT-PCR方法从分泌抗乙型肝炎病毒preS1的鼠源单克隆抗体4D11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区（VH）、轻链可变区（Vk）序列，并分别克隆到含有人71重链和... 详细信息

目的通过真核系统表达抗HBVpreS1嵌合抗体4D11并分析其活性。方法通过RT-PCR方法从分泌抗乙型肝炎病毒preS1的鼠源单克隆抗体4D11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区（VH）、轻链可变区（Vk）序列，并分别克隆到含有人71重链和X轻链恒定区序列的pcDNA3．1-AH和pcDNA3．1-Ak质粒中，共转染人胚肾细胞变种（293FT）细胞。通过Western blot、竞争ELISA、阳性血清阻断及血清中preS1的检测实验来分析其活性。结果轻重链基因在细胞内正确组装成嵌合抗体分子并分泌至细胞外，具有结合活性。嵌合抗体可以很好的与病毒preSl结合，对阳性血清的检测效果与鼠单抗一致。结论成功的利用293FT细胞表达了4D11嵌合抗体，抗体保留了原鼠单抗的特异性和活性，为探讨乙肝抗体的治疗提供了试验资料。

关键词：乙型肝炎病毒嵌合抗体真核表达

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分子对接预测H5亚型禽流感病毒的广谱中和表位

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科学通报 2008年第2期53卷 210-219页

作者：颜渊清李少伟杨春燕罗文新王明桥陈毅歆罗海峰吴婷张军夏宁邵国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心(厦门大学) 厦门大学生命科学院厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、... 详细信息

H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8H5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8H5Fab的三维空间结构.8H5Fab与3种HA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8H5抗体与HA蛋白的作用模式与HA宿主来源无关,但与HA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8H5抗体识别的广谱中和表位是由HA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为H5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据。

关键词： H5N1禽流感病毒分子对接血凝素蛋白中和表位

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毕赤酵母分泌表达嵌合HEV表位的HBcAg颗粒

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厦门大学学报（自然科学版） 2009年第1期48卷 107-112页

作者：章建楠李少伟杨坤宇何芳萍唐明顾颖王颖彬杜海莲张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均... 详细信息

在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均一的直径30 nm左右的空心颗粒.小鼠免疫实验表明,纯化颗粒免疫8周后鼠血清中的特异性12A10抗体滴度可达到1.6×105,并且重组颗粒较好地呈递了HEV受体相关的非免疫优势表位.本文的结果为毕赤酵母胞外分泌表达其它大尺度的重组蛋白颗粒提供了参考,为研究携带表位多肽的疫苗载体提供了范例.

关键词：乙肝病毒核心抗原融合蛋白毕赤酵母分泌表达

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适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

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中国人兽共患病学报 2007年第6期23卷 527-531页

作者：郭永利陈毅歆黄德党罗海峰葛胜祥程通张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双... 详细信息

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。

关键词： HIV-1 p24蛋白单克隆抗体夹心ELISA

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高致病性禽流感病毒H5N1中和抗体的单链抗体构建与活性鉴定

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生物工程学报 2007年第2期23卷 292-296页

作者：方钟罗文新王明桥陈瑛炜张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室生命科学学院厦门361005 汕头大学医学院汕港联合流感中心

在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实... 详细信息

在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中,10F7scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性,而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中,10F7scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。

关键词：高致病毒性禽流感病毒单链抗体血凝抑制中和实验

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一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立

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病毒学报 2006年第6期22卷 445-449页

作者：葛胜祥徐飞海罗海峰陈毅歆郭永利陈自敏王嘉罗文新吴婷张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒... 详细信息

利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景。

关键词：禽流感病毒 H5N1 抗原快速检测血凝素单克隆抗体

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一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性

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病毒学报 2007年第2期23卷 85-90页

作者：罗海峰陈毅歆陈自敏郭永利王嘉张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传... 详细信息

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株，对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析，结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应，而对非H5亚型标准病毒株均不反应，说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗，并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位。并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景。

关键词：禽流感病毒 H5N1 单克隆抗体血凝素中和

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