检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2017年第20期26卷 2369-2375页

作者：陈思伊张彩黄小芬王鑫赵勤俭厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室厦门大学生命科学学院厦门大学公共卫生学院

疫苗储存运输要遵循冷链运输(cold chain,CC)的要求,这很大程度上限制了疫苗的接种和普及,尤其是在那些贫困偏远地区。为扩大疫苗可及性,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)于2012年首次提出了受控温度链(controlled temperat... 详细信息

疫苗储存运输要遵循冷链运输(cold chain,CC)的要求,这很大程度上限制了疫苗的接种和普及,尤其是在那些贫困偏远地区。为扩大疫苗可及性,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)于2012年首次提出了受控温度链(controlled temperature chain,CTC)法规,即在政府部门和WHO的监管下,在有充分热稳定性数据支持的前提下,若申报CTC的疫苗在不低于40℃下存放至少3 d后仍能保证效力,则该疫苗在免疫供应链后期无需冷链运输。CTC法规已成功应用在包括MenAfriVac在内的4个商品化疫苗上。本文介绍了CTC法规的内容和应用情况,通过科学监管提高疫苗可及性,减少不必要的浪费。

关键词：疫苗科学监管受控温度链可及性接种推广

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HIV-1糖蛋白gp120在昆虫细胞中的表达、纯化、性质鉴定以及免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第9期37卷 645-649页

作者：张振勇李婷婷乔佳明张玉云高双全姚巧缤李泽凯张芝晴顾颖夏宁邵李少伟厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院361102

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立高效分泌表达人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 Env gp120糖蛋白的方法,并对其理化性质及免疫原特性进行分析.方法选择B亚型HIV-1 NL4-3 gp120进行蛋白克隆设计,将目的蛋白基因序列克隆到杆状病毒转... 详细信息

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立高效分泌表达人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 Env gp120糖蛋白的方法,并对其理化性质及免疫原特性进行分析.方法选择B亚型HIV-1 NL4-3 gp120进行蛋白克隆设计,将目的蛋白基因序列克隆到杆状病毒转移载体pAcgp67B中pH启动子的下游,构建成重组转移载体pAc-gp120,利用同源重组的方式在宿主细胞内获得重组杆状病毒,并在High FiveTM昆虫细胞中表达gp120蛋白.之后使用酶联免疫吸附试验、分析超离和分子排阻色谱进行理化性质分析,并通过小鼠免疫实验分析其免疫原性.结果建立昆虫细胞表达系统制备和纯化重组HIV-1 gp120蛋白的方法,最终获得纯度约90％的gp120蛋白,多批次纯化后鉴定产量约为13 mg/L;酶联免疫吸附测定、分析超离和分子排阻色谱性质分析试验显示,重组HIV gp120蛋白在溶液有良好的抗原性并且在溶液中较为均一;通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,免疫血清对NL4-3病毒具有一定程度中和活性,表明gp120蛋白能有效刺激机体产生免疫应答.结论成功建立了简便、可放大的HIV gp120蛋白表达和纯化方法,获得较为均一的、免疫原性良好的gp120抗原,为进一步开展HIV疫苗研究工作奠定了基础.

关键词：人类免疫缺陷病毒1型昆虫细胞表达系统包膜糖蛋白 gp120 免疫应答

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硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在人乳头瘤病毒感染中的作用

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中国病毒病杂志 2018年第4期8卷 313-317页

作者：魏双萍柳欣林王大宁夏宁邵李少伟厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院福建厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院福建厦门361102

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA双链病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,高危型HPV的持续感染是诱发宫颈癌的主要原因。HPV吸附入胞伴随着由多种受体引起衣壳蛋白L1和L2的变构,其中衣壳... 详细信息

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA双链病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,高危型HPV的持续感染是诱发宫颈癌的主要原因。HPV吸附入胞伴随着由多种受体引起衣壳蛋白L1和L2的变构,其中衣壳蛋白L1与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)之间的多重相互作用是病毒入胞的关键。经与HSPG相互作用后,HPV衣壳蛋白L2暴露病毒与入胞受体结合位点,进而介导病毒内吞入胞。因此,阐述HPSG在HPV感染细胞中的作用有助于进一步阐明HPV感染机制及致病机制,为HPV治疗性疫苗的研究提供一定的理论基础。本文就HSPG在HPV感染细胞中的作用进行综述。

关键词：人乳头瘤病毒衣壳蛋白宫颈癌硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG) 构象变化受体

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人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定

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病毒学报 2017年第4期33卷 541-549页

作者：杨超张芝晴沈鸿霖高双全李少勇李少伟夏宁邵顾颖厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门361102 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102

本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构... 详细信息

本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) 包膜糖蛋白gp140 真核表达密码子优化

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新城疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的初步建立

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中国人兽共患病学报 2017年第6期33卷 481-485,512页

作者：王明睿钟建平李睿王国松陈毅歆厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院厦门361102

目的制备新城疫病毒(NDV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并用于建立一种可定量检测NDV病毒含量的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测方法(NDV NP ELISA)。方法基于NDV病毒株F48E9获得NP基因,经原核表达方式制备出重组抗原rNP;免疫小鼠制备N... 详细信息

目的制备新城疫病毒(NDV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并用于建立一种可定量检测NDV病毒含量的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测方法(NDV NP ELISA)。方法基于NDV病毒株F48E9获得NP基因,经原核表达方式制备出重组抗原rNP;免疫小鼠制备NDV NP特异性单抗;单抗经HRP标记和配对筛选,建立NDV NP ELISA,分析其特异性、灵敏度、精密度、准确度和检测线性,并分析本方法定量检测的NP含量与PFU病毒滴度的定量相关性。结果建立基于单抗3C10和4E7的NDV NP ELISA,其定量检测NDV rNP的最佳线性范围为0.015~0.250μg/ml(R2=0.9974),回收率在88.4%~106.01%,变异系数小于3.4%;该方法具有良好特异性;该方法定量检测NDV抗原含量与PFU病毒感染滴度有较好的相关性(R2=0.9209)。结论建立NDV NP ELISA,可准确定量检测NDV病毒中的NP抗原含量,为NDV病毒含量的测定提供一种可靠简便的分析方法。

关键词：新城疫病毒核蛋白单克隆抗体定量检测酶联免疫吸附测定

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一种通用的基于NSP5基因的A组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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病毒学报 2017年第2期33卷 258-264页

作者：曾渊君李廷栋鄢小琼许红梅杨晗贾连智李毅坚罗国兴葛胜祥夏宁邵厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心公共卫生学院厦门361102 重庆医科大学附属儿童医院感染科重庆404110

建立一种通用的检测不同物种来源A组轮状病毒的逆转录实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)。根据轮状病毒保守的NSP5基因的保守序列设计引物和探针,建立并优化RT-qPCR检测体系;同时通过9份轮状病毒毒株和96份临床标本的检测对该方法和目前常... 详细信息

建立一种通用的检测不同物种来源A组轮状病毒的逆转录实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)。根据轮状病毒保守的NSP5基因的保守序列设计引物和探针,建立并优化RT-qPCR检测体系;同时通过9份轮状病毒毒株和96份临床标本的检测对该方法和目前常用的基于NSP3基因的2种RT-qPCR方法进行灵敏度和检出率的比较。新建立的RT-qPCR方法特异性高,重复性好;与基于NSP3基因的方法相比:(1)在临床标本检测中,检出率无差异;(2)9株培养病毒检测中,NSP5体系可全部检出,两个NSP3对照体系NSP3-1和NSP3-2的检出率分别为78.78%(7/9)和88.89%(8/9);(3)NSP5体系与对照NSP3-1体系灵敏度相当,检测下限比NSP3-2体系低100倍。本研究建立的基于NSP5的荧光定量PCR体系灵敏度高,可检测毒株范围广,为检测不同物种来源的A组轮状病毒提供一种新的选择。

关键词：轮状病毒实时荧光定量PCR Taqman NSP5

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基于酶联免疫斑点技术的丙型肝炎病毒中和抗体检测平台的建立

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厦门大学学报（自然科学版） 2017年第1期56卷 79-84页

作者：熊丽霞刘永亮刘洋葛胜祥厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学生命科学学院厦门大学公共卫生学院福建厦门361102

为建立血清中丙型肝炎病毒(HCV)中和抗体检测及评价手段,运用HCV核心区特异性抗体17H11及链霉亲和素-生物素放大系统,建立了基于酶联免疫斑点(ELISPOT)技术的HCV中和抗体检测平台.结果显示,该平台计数点清晰,可实现阴阳性分开,并能有效... 详细信息

为建立血清中丙型肝炎病毒(HCV)中和抗体检测及评价手段,运用HCV核心区特异性抗体17H11及链霉亲和素-生物素放大系统,建立了基于酶联免疫斑点(ELISPOT)技术的HCV中和抗体检测平台.结果显示,该平台计数点清晰,可实现阴阳性分开,并能有效地检测并评价HCV抗体阳性病人血清的中和作用,表明该平台可实现HCV中和抗体的检测,将有利于HCV疫苗研制中的免疫效果评价.

关键词：丙型肝炎病毒酶联免疫斑点中和抗体

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利什曼病疫苗的研究现状

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第5期35卷 499-502,508页

作者：蔡雅霜张志刚王鑫赵勤俭分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门361105 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361105 厦门大学生命科学学院厦门361105 厦门大学公共卫生学院厦门361105

利什曼病是由利什曼原虫引起的一种人兽共患寄生虫病,分布于全球90多个国家,每年新发利什曼病患者130多万,有2万~3万例死亡,给全球尤其是发展中国家带来沉重的社会经济及医疗负担。目前针对利什曼病的防治措施主要为控制传染源和药物治... 详细信息

利什曼病是由利什曼原虫引起的一种人兽共患寄生虫病,分布于全球90多个国家,每年新发利什曼病患者130多万,有2万~3万例死亡,给全球尤其是发展中国家带来沉重的社会经济及医疗负担。目前针对利什曼病的防治措施主要为控制传染源和药物治疗,但均无法消除利什曼病。疫苗接种是行之有效的并具社会经济效益的控制利什曼病的防治手段。因此,利什曼病疫苗的研发具有十分重要的现实意义。本文重点就利什曼原虫致病机制及各类利什曼病疫苗的研究现状进行综述。

关键词：利什曼原虫利什曼病疫苗

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肠道病毒68型新型中和试验方法的建立及其初步应用

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病毒学报 2017年第5期33卷 661-667页

作者：万俊凯王玮侯汪衡李姝璇赵欢郑清炳何水珍程通夏宁邵国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学生命科学学院厦门361102 分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门大学公共卫生学院厦门361102 厦门市疾病预防与控制中心厦门361021

针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为... 详细信息

针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为检测抗体,基于酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立EV-D68高效中和试验方法;进一步比较该方法与传统中和试验方法 Nt-CPE的一致性,并使用该方法对临床血清样本进行检测。共获得10株分泌抗EV-D68单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取一株性能最优的15C5进行生产纯化,鉴定其为IgG3亚型;以15C5为检测抗体,建立了快速检测EV-D68中和抗体的Nt-ELISPOT方法;与Nt-CPE方法比较,Nt-ELISPOT方法将检测时间由5~7d缩短至1d以内,并且两种方法检测结果一致性良好;应用所建立的Nt-ELISPOT方法对厦门地区146份人群血清样本进行检测,显示血清样本EV-D68中和抗体阳性率为98.6%(144/146),提示厦门地区可能存在过EV-D68的流行。本研究基于ELISPOT建立的新型EV-D68中和试验方法快速可靠,适合通量检测,可以应用于EV-D68中和抗体水平的血清学调查,为EV-D68感染的防控工作提供帮助。

关键词：肠道病毒68型(EV-D68) 中和试验中和抗体血清检测

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计算机模拟预测治疗性抗体聚集倾向性的进展及应用

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中国医药工业杂志 2017年第6期48卷 795-801页

作者：毕行建洪奇阳俞海李少伟夏宁邵厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102

由于具有靶向性高、不良反应少等优势,治疗性抗体已成为生物技术产业的重要研究领域。诸多重大疾病如肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、糖尿病、老年性痴呆等都有望用抗体药物进行治疗,以抗体为基础的分子设计和靶向治疗也是近年生物... 详细信息

由于具有靶向性高、不良反应少等优势,治疗性抗体已成为生物技术产业的重要研究领域。诸多重大疾病如肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、糖尿病、老年性痴呆等都有望用抗体药物进行治疗,以抗体为基础的分子设计和靶向治疗也是近年生物医药产业的最大增长点。但目前在抗体药物的研发和生产过程中仍然存在一些问题亟待解决。其中,抗体分子聚集是影响药物成药性的关键因素之一,筛选和设计稳定高效的抗体药物是药物研发早期阶段的重要目标。相较于传统筛选方法,应用计算机模拟技术预测蛋白质的聚集倾向为抗体药物的稳定性和高度可溶性提供了重要参考信息,将有效地提高药物的研发效率。本文重点介绍了已成功应用于治疗性抗体领域的聚集预测方法,并对这些方法的原理与应用前景进行总结,为基于计算机模拟的抗体研究提供参考。

关键词：治疗性抗体聚集倾向性成药性计算机模拟药物研发 DNA重组技术生物信息学

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