检索结果-内蒙古大学图书馆

动物学报 2007年第3期53卷 545-551页

作者：高雅君杨玉荣细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门大学生命科学学院福建厦门361005

秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种重要的模式生物,目前在***中发现的许多基因在序列和功能上与哺乳动物的基因有很高的同源性,对其基因功能的研究有助于阐明哺乳动物的基因功能。为检测细菌介导的通过发夹结构表达双链RNA(ds... 详细信息

秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种重要的模式生物,目前在***中发现的许多基因在序列和功能上与哺乳动物的基因有很高的同源性,对其基因功能的研究有助于阐明哺乳动物的基因功能。为检测细菌介导的通过发夹结构表达双链RNA(dsRNA)的RNA干扰(RNAi)在***中的作用效果,我们设计并构建了可以转录表达母源极性基因par-1的发夹dsRNA的RNAi载体,并转入*** HT115中,经过IPTG诱导后浓缩。浓缩菌液在25℃下喂食***48h后,观察***胚胎发育情况,同时以含有空载体的菌液作为对照,并与par-1突变体及野生型比较。结果显示:发夹结构表达的dsRNA对par-1基因进行RNAi后,虫体内par-1 mRNA几乎消失,***早期胚胎分裂不对称性丧失,par-1(RNAi)干扰率在95%以上。

关键词：秀丽小杆线虫 par-1 发夹结构 RNAi 克隆构建

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电泳/质谱技术研究鲨鱼肝铁蛋白及亚基多聚体特性

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分析化学 2007年第5期35卷 667-671页

作者：陈平黄河清林庆梅陈旭黄慧英厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室近海海洋环境科学国家重点实验室

改良鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofsphyrna zygaena,SZLF)分离技术,并结合非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(NGPAGE)制备质谱纯SZLF,以维系铁蛋白分子和它的亚基之间的作用类型,供研究铁蛋白结构与功能。实验结果表明,SZLF由分子量约为20... 详细信息

改良鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofsphyrna zygaena,SZLF)分离技术,并结合非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(NGPAGE)制备质谱纯SZLF,以维系铁蛋白分子和它的亚基之间的作用类型,供研究铁蛋白结构与功能。实验结果表明,SZLF由分子量约为20kDa的单类型亚基组成。SZLF和它的亚基均组成不同的聚合体。聚合体类型和聚合数目与铁蛋白亚基和分离介质有关。MALDI-TO F质谱仪的激光和基质协同能有效解吸SZLF中的亚基成为准分子离子,并供质量分析,其亚基特征质谱峰m/z值分别为10889.35和22030.45,确定为带双电荷[M+2H]2+和单电荷[M+H]+的SZLF亚基分子量。SDS-PAGE和变性IEF技术研究指出,形成不同聚合态的SZLF,其分子之间的相互作用强度高于SZLF亚基自身,难以通过MALDI-TOF质谱技术测定其亚基的结构信息。尽管SZLF由单类型亚基组成,但它能通过聚合体和自身亚基之间的相互作用差异性发挥极其重要的生理功能。

关键词：铁蛋白多聚体质谱亚基

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酪氨酸酶抑制剂的研究进展

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厦门大学学报（自然科学版） 2007年第2期46卷 274-282页

作者：陈清西林建峰宋康康厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1,PPO),是一种含铜糖蛋白,广泛存在于自然界中.它是生物体合成黑色素的关键酶,而且与果蔬褐化、昆虫表皮鞣化、人的色素障碍性疾病及恶性黑色素肿瘤的发生与治疗有重要关系.目前,酪氨酸酶抑制剂已被用于果蔬保鲜、... 详细信息

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1,PPO),是一种含铜糖蛋白,广泛存在于自然界中.它是生物体合成黑色素的关键酶,而且与果蔬褐化、昆虫表皮鞣化、人的色素障碍性疾病及恶性黑色素肿瘤的发生与治疗有重要关系.目前,酪氨酸酶抑制剂已被用于果蔬保鲜、化妆品中的增白剂、生物农药的杀虫剂添加物.对酪氨酸酶抑制剂的研究已引起国内外的广泛重视,现已研究出许多具有新型结构的酪氨酸酶抑制剂.为了得到高效的酪氨酸酶抑制剂,对各种类型的化合物构效关系及抑制机理的研究是非常必要的.

关键词：酪氨酸酶抑制剂构效关系抑制机理应用

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利用P因子不精确剪切获得Tis11基因敲除果蝇

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厦门大学学报（自然科学版） 2007年第6期46卷 857-862页

作者：谢昌传汪雪坤李立胜田丽丽吴秀榕洪丽欣周化民厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

Tis11是哺乳动物基因TTP在果蝇中的同源物,其基因位于果蝇X染色体11B9区.它含有两个保守的顺式Cys-X8-Cys-X5-Cys-X3-His(CCCH)锌指结构.它与mRNA的稳定性有关.为了进一步从动物水平研究Tis11的生物学功能,作者利用P因子不精确剪切的特... 详细信息

Tis11是哺乳动物基因TTP在果蝇中的同源物,其基因位于果蝇X染色体11B9区.它含有两个保守的顺式Cys-X8-Cys-X5-Cys-X3-His(CCCH)锌指结构.它与mRNA的稳定性有关.为了进一步从动物水平研究Tis11的生物学功能,作者利用P因子不精确剪切的特性来获得Tis11基因敲除果蝇.以P因子插入果蝇19949为起始材料,经过一系列杂交后,挑取了700株P因子被切除的果蝇.通过PCR筛选和鉴定,从这700株果蝇中获得一株果蝇279,它的Tis11基因的第2个外显子中包括翻译起始位点的区域被删除.

关键词：果蝇 P因子不精确剪切 Tis11

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含口蹄疫病毒IRES RNA病毒样颗粒表达载体的构建

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中国生物工程杂志 2007年第9期27卷 31-35页

作者：窦敏张国广于广福张红心沈明山陈亮厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP。将口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体结合位点(IRES)保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES。将重组质粒p... 详细信息

利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP。将口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体结合位点(IRES)保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES。将重组质粒pCPES转化宿主菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导表达。蔗糖密度梯度离心纯化表达产物。透射电镜观察到直径大约26 nm的圆形病毒样颗粒。检测病毒样颗粒的稳定性并进行RT-PCR鉴定。结果表明该病毒样颗粒含口蹄疫病毒IRES RNA序列,并且稳定性良好,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。

关键词： MS2噬菌体外壳蛋白 RNA病毒病毒样颗粒

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蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备

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中国免疫学杂志 2007年第12期23卷 1117-1121页

作者：黄小花章军厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构... 详细信息

目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。

关键词：抗病毒蓝藻蛋白-N 克隆表达酶联免疫吸附反应 Western blot

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雌激素受体α亚细胞定位及其与细胞生长的相关性

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厦门大学学报（自然科学版） 2007年第4期46卷 569-573页

作者：杨超毅张晓燕吴乔厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)是核受体(Nucleus Receptor,NR)超家族成员,能够被其配体雌二醇(Steroidhormone 17-β-estradiol,E2)激活.ER有两种亚型,ERα和ERβ,由4个不同的功能域组成.通过构建ERα的不同缺失突变体(ERΔLBD、ERΔDBD和ERΔHinge)来研究不同功能域对细胞增殖及在E2刺激下对ERα亚细胞定位的影响.结果表明,ERα呈核多浆少的分布,ERΔLBD为核定位,ERΔDBD为核多浆少分布,ERΔHinge则主要分布在胞浆.进一步分析表明,E2诱导的ERα入核是核定位序列(Nuclear Location Signal,NLS)依赖性.此外,我们还发现,ERα能够增强293T细胞增殖,且这种促增殖效应可能依赖于ERα在细胞核与胞浆的正常转运.

关键词：雌激素受体雌激素细胞增殖核浆定位

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文蛤多肽对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

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厦门大学学报（自然科学版） 2007年第5期46卷 593-597页

作者：冷波康劲翮贺量范成成王勤陈清西厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

研究了文蛤多肽对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,结果表明,经5.0μg/mL文蛤多肽处理的体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721)生长缓慢,倍增时间延长,细胞生长抑制率达89.4%;处理后的癌细胞形态发生明显改变,处于G0/G1期的细胞明... 详细信息

研究了文蛤多肽对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,结果表明,经5.0μg/mL文蛤多肽处理的体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721)生长缓慢,倍增时间延长,细胞生长抑制率达89.4%;处理后的癌细胞形态发生明显改变,处于G0/G1期的细胞明显增多,而S期和M期细胞减少,出现明显的凋亡峰,凋亡率为22.3%.实验结果表明,文蛤多肽能有效地抑制体外培养肝癌细胞的增殖活动,可通过改变肝癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖.

关键词：文蛤多肽肝癌细胞增殖抑制

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Eptifibatide的固相合成及分离纯化

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厦门大学学报（自然科学版） 2007年第1期46卷 100-103页

作者：熊瑛王宇陈亮厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

Eptifibatide是一种血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂,临床研究结果显示其医用上的产业前景良好.采用Rink-Am-Resin树脂作为固相载体,Fmoc为保护策略固相合成了Eptifibatide.以DMF为反应溶剂,Piperidine-DMF脱去Fmoc保护基团,以TBTU/HOB... 详细信息

Eptifibatide是一种血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂,临床研究结果显示其医用上的产业前景良好.采用Rink-Am-Resin树脂作为固相载体,Fmoc为保护策略固相合成了Eptifibatide.以DMF为反应溶剂,Piperidine-DMF脱去Fmoc保护基团,以TBTU/HOBt/DIEA作为肽键缩合试剂进行接肽反应,用TFA/EDT/TIS/H2O定量地从树脂上切除,制备型高效液相色谱分离纯化粗肽.同时对产品进行色谱分析和质谱鉴定.实验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在95%以上,多数在99%以上.粗肽纯度为86.8%,产率为55%.分离纯化后的产物纯度达到98.5%,MOLDI-TOF质谱测得的m/z与理论值相符.为化学合成Eptifibatide及其分离纯化提供了一条切实可行的路线.

关键词： Eptifibatide 固相合成 Fmoc法

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NBS1在DNA断裂损伤反应和维持端粒稳定中的作用

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细胞生物学杂志 2007年第3期29卷 351-355页

作者：罗浩虹陈瑞川李程厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

NBS1作为MRE11/RAD50/NBS1复合物的组分之一,是细胞应答DNA损伤的一个关键蛋白质,在DNA双链断裂修复和维持基因组稳定中发挥重要的作用。端粒是染色体末端由DNA重复序列和蛋白质构成的复合体,其独特结构与DNA双链断裂非常相似。最近几... 详细信息

NBS1作为MRE11/RAD50/NBS1复合物的组分之一,是细胞应答DNA损伤的一个关键蛋白质,在DNA双链断裂修复和维持基因组稳定中发挥重要的作用。端粒是染色体末端由DNA重复序列和蛋白质构成的复合体,其独特结构与DNA双链断裂非常相似。最近几年的研究发现NBS1与端粒也有着十分密切的联系。综述了NBS1在DNA损伤反应中的作用,并探讨NBS1参与维持端粒稳定中的分子机制。

关键词： NBS1 端粒 DNA损伤

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