检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2004年第2期20卷 104-109页

作者：张军顾颖欧山海王颖彬叶祥忠林鉴葛胜祥夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,... 详细信息

重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在。

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位构象单克隆抗体

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抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 556-559页

作者：李利峰罗文新顾颖朱子恒王颖彬张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆... 详细信息

目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆菌中进行表达。用ELISA、Westernblot检测scFv的活性。结果 :SDS PAGE表明 ,13D8的scFv在E .coli中得到高效表达 ,表达量达菌体总蛋白的 2 6 .8%左右 ,表达产物主要以包涵体的形式存在。间接ELISA和Westernblot检测表明 ,表达的 13D8的scFv能与HEVOFR2区中一段重组蛋白(NE2 )特异结合。竞争ELISA表明 ,scFv与原鼠mAb识别的为同一表位。结论 :成功地表达出具有免疫学活性的 13D8的scFv。

关键词：高效表达 HEV 单链抗体中和抗体 ELISA 表位 NE 克隆片段免疫学活性

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鲎血淋巴中的先天性免疫系统

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海洋科学 2004年第9期28卷 66-69页

作者：欧阳高亮鲍仕登厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

鲎(horseshoe crab)是一种生活在海洋中的大型底栖节肢动物,从早古生代的奥陶纪出现至今已有4亿多年的历史,是动物界具有独特进化地位的“活化石”之一。鲎隶属于节肢动物门(Arthropoda)、有螯肢亚门(Chelicerata)、肢口纲(Merostemata... 详细信息

鲎(horseshoe crab)是一种生活在海洋中的大型底栖节肢动物,从早古生代的奥陶纪出现至今已有4亿多年的历史,是动物界具有独特进化地位的“活化石”之一。鲎隶属于节肢动物门(Arthropoda)、有螯肢亚门(Chelicerata)、肢口纲(Merostemata)、剑尾目(Xiphosurida)、鲎科(Limuroidea)。现存的鲎种类很少

关键词：鲎节肢动物门有螯肢亚门肢口纲血淋巴免疫应答细胞免疫系统

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乙型肝炎病毒pre-S1区中和抗体可变区的原核表达

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生物工程学报 2004年第6期20卷 901-905页

作者：管宝全张军罗文新陈敏吴婷程通夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

鼠源单克隆抗体MA18 7是特异识别乙型肝炎病毒 (HBV)pre S1抗原的中和抗体。为表达MA18 7的小分子抗体 ,将MA18 7的重链可变区基因 (VH)和轻链可变区 (VL)基因分别克隆到原核表达载体pTO T7进行原核表达。结果VH 和VL 均以包涵体的形式... 详细信息

鼠源单克隆抗体MA18 7是特异识别乙型肝炎病毒 (HBV)pre S1抗原的中和抗体。为表达MA18 7的小分子抗体 ,将MA18 7的重链可变区基因 (VH)和轻链可变区 (VL)基因分别克隆到原核表达载体pTO T7进行原核表达。结果VH 和VL 均以包涵体的形式高效表达 ,包涵体经过变性、复性及金属离子亲和纯化后获得纯度 >90 %的重组抗体片段。生物传感器、竞争ELISA和间接ELISA测定均显示 ,VH 或VL 均不能结合相应抗原 ,但二者体外混合后可迅速非共价结合形成具有良好活性的可变区抗体Fv,表明MA18

关键词：乙型肝炎病毒中和抗体可变区表达

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被子植物离体受精系统的遗传操作

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植物生理学通讯 2004年第1期40卷 127-131页

作者：陈林姣李爱贞田惠桥厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

介绍被子植物离体受精系统分子生物学研究取得的重要成果及最新进展。

关键词：精细胞卵细胞合子特异基因表达转化被子植物离体受精系统遗传操作

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二种多管水母光蛋白基因的分离、表达及生物活性初步研究

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海洋学报 2004年第4期26卷 110-117页

作者：罗文新张军李少伟程通陈敏李少菁夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

分别从厦门东海域的大型多管水母和细小多管水母中分离到了新的光蛋白基因aeqxm和aeqxxm,并在大肠杆菌中进行了表达.aeqxm和aeqxxmDNA序列的编码区总长均为585bp,无内含子序列,推导的氨基酸序列总长均为195个氨基酸.aeqxm,aeqxxmDNA和AE... 详细信息

分别从厦门东海域的大型多管水母和细小多管水母中分离到了新的光蛋白基因aeqxm和aeqxxm,并在大肠杆菌中进行了表达.aeqxm和aeqxxmDNA序列的编码区总长均为585bp,无内含子序列,推导的氨基酸序列总长均为195个氨基酸.aeqxm,aeqxxmDNA和AEVAQ440XcDNA之间的核苷酸序列同源性分别为80 7%,85 1%,aeqxm和aeqxxmDNA的核苷酸序列同源性为87 2%.原光蛋白apoaeqxm,apoaeqxxm与AEVAQ440X编码的氨基酸序列之间的同源性分别为84 7%,84 2%,apoaeqxm和apoaeqxxm的氨基酸序列之间的同源性为94 4%.分别将aeqxm和aeqxxm基因克隆至pTO-T7表达载体,apoaeqxm,apoaeqxxm在大肠杆菌中的表达量都达到40%左右.取菌体超声上清与腔肠动物荧光素f、巯基乙醇混合再生后,加入CaCl2,用荧光全谱仪检测到470nm处的瞬时发光,表明表达的apoaeqxm,apoaeqxxm具有正常的生物学功能.

关键词：多管水母光蛋白基因表达生物活性分离

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嗜水气单胞菌耐四环素的蛋白质组学初步研究

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微生物学报 2004年第3期44卷 396-398页

作者：陈川王三英彭宣宪厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

采用四环素次抑菌浓度对嗜水气单胞菌进行选择 ,筛选得到耐四环素的嗜水气单胞菌菌株 ,其MIC(最低抑菌浓度 )为出发菌株的 8倍。通过比较对照菌与耐药菌总蛋白质的双向电泳图谱 ,获得 3个差异显著的蛋白点。对这 3个差异蛋白质进行肽质... 详细信息

采用四环素次抑菌浓度对嗜水气单胞菌进行选择 ,筛选得到耐四环素的嗜水气单胞菌菌株 ,其MIC(最低抑菌浓度 )为出发菌株的 8倍。通过比较对照菌与耐药菌总蛋白质的双向电泳图谱 ,获得 3个差异显著的蛋白点。对这 3个差异蛋白质进行肽质量指纹及其生物信息分析 ,分别鉴定为核糖体小亚基蛋白、药物排出系统蛋白和乙酸乙酰辅酶A转移酶亚基。文中对嗜水气单胞菌耐四环素的机理进行了初步探讨。

关键词：双向电泳 MALDI-TOF 四环素耐药性嗜水气单胞菌

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重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养

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生物工程学报 2004年第3期20卷 450-455页

作者：刘如石何志强李少伟杨坤宇鲜阳凌逄淑强张军李益民夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 北京万泰生物药物有限公司北京102200

在 10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究 ,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg2 + 浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体... 详细信息

在 10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究 ,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg2 + 浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ,同时对重组菌诱导时期、诱导持续时间以及不同诱导温度表达包含体在尿素溶液中的溶解性进行了研究。结果表明 ,在优化后的培养基中 ,磷酸盐浓度、Mg2 + 浓度分别为 80mmol L与 2 0mmol L时菌体生长与表达效果较好 ;分批补料培养中 ,37℃培养 9h菌体达到对数期中期 (约 4 5OD6 0 0 )为适宜诱导时期 ,加入终浓度为 1 0mmol LIPTG后诱导 5h ,OD6 0 0 达到 80以上 ,重组蛋白表达量达到2 9 74 % ,为最适收获菌体时间 ;37℃表达的包含体 80 %以上溶解在 4mol L的尿素溶液中 ,最终浓度达到 14mg mL ;10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在 30L发酵罐中进行了放大培养 ,10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在 30L发酵罐上具有可放大性与重复性 ,可以应用于工业生产。

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白重组大肠杆菌高密度培养

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星形孢菌素诱导TR3由细胞核向线粒体转运

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癌症 2004年第12期23卷 1593-1598页

作者：占艳艳吴乔厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

背景和目的:星形孢菌素(staurosporine,STS)是一种非特异性蛋白激酶抑制剂,能够诱导多种类型细胞凋亡。孤生受体(orphanreceptor)TR3是一种立早基因(immediate-earlygene)产物,属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。当细胞受到凋亡因... 详细信息

背景和目的:星形孢菌素(staurosporine,STS)是一种非特异性蛋白激酶抑制剂,能够诱导多种类型细胞凋亡。孤生受体(orphanreceptor)TR3是一种立早基因(immediate-earlygene)产物,属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。当细胞受到凋亡因子刺激时,TR3表达并从细胞核转运至线粒体,从而诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨STS诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其与TR3转运的相关性。方法:荧光显微术观察经STS处理3h和24h后BGC-823细胞凋亡的形态变化并测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术和Westernblot对STS处理后BGC-823细胞中TR3蛋白和细胞色素c蛋白进行定位;流式细胞术和激光共聚焦显微术检测细胞线粒体的膜电位。结果:STS处理BGC-823细胞3h和24h后,细胞凋亡率分别从对照组的4.0%和4.7%提高到15.7%和39.4%;STS处理24h后,细胞出现核膜消失、染色体聚集成发亮的小体等典型的细胞凋亡形态变化。BGC-823细胞中TR3蛋白定位于细胞核,STS处理3h后TR3蛋白由细胞核转运至线粒体上,导致线粒体膜电位下降,并伴随着细胞色素c释放至胞浆。结论:孤生受体TR3参与STS诱导的细胞凋亡事件。在STS诱导下,TR3从细胞核移位至线粒体膜,引起线粒体膜电位下降,细胞色素c的释放,进而诱导细胞凋亡。

关键词：胃癌细胞星形孢菌素孤生受体TR3 线粒体 JC-1 线粒体标记和提取

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颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性

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生物工程学报 2004年第2期20卷 262-268页

作者：何志强张军李少伟林鉴刘如石陈毅歆王颖彬夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋... 详细信息

过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15～3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8～ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白疫苗颗粒性抗原原核表达抗原性免疫原性

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