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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：周化民李琳洁厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

Ago(Argonaute)蛋白家族是含有PIWI和PAZ基本结构域的一类成员数目较多的蛋白家族,近年来研究发现Ago蛋白家族的很多成员在RNA干扰现象中有重要的作用。在果蝇和人体细胞中,Ago2(Argonaute 2)为RNA干扰机器RSIC(RNA-induoed silencing c... 详细信息

Ago(Argonaute)蛋白家族是含有PIWI和PAZ基本结构域的一类成员数目较多的蛋白家族,近年来研究发现Ago蛋白家族的很多成员在RNA干扰现象中有重要的作用。在果蝇和人体细胞中,Ago2(Argonaute 2)为RNA干扰机器RSIC(RNA-induoed silencing complex)的核心部分,在RNA干扰中发挥关键的作用。P-Body(Cytoplasmic Processing Body)最初在酵母中发现。在它细胞中与RNA降解有关。目前已经发现很多和RNA转录调控、RNA降解以及相关的蛋白在P-Body内聚集。现在,已有充分证据证明RNAi体系和P-body的形成有关联。例如RNA干扰机器RSIC上的核心蛋白Ago2也在P-body内聚集;Ago2与mRNA的结合会影响P-Body在细胞的存在状态等等。因为Ago2及P-Body和RNAi现象紧密联系,所以研究Ago2在P-Body内的定位对于了解P-Body和RNAi的关系有重要的意义。我们通过构建一系列的Ago2突变子使用荧光免疫染色方法来寻找影响Ago2定位于P-Body的关键氨基酸。我们随机得到一个有六个氨基酸发生突变的Ago2突变子,为Ago2-G32W-F128L-R196Q-P458S-T741A-S752G,它完全不在P-Body内定位。这六个氨基酸单点突变子都不能使Ago2完全定位于P-Body之外。相对于其他的五个氨基酸我们发现Ago2上第752位的Ser对于Ago2在P-Body的定位尤为重要。当Ago2第752位Ser突变为Gly时,Ago2在P-body的定位率大大降低。但是单独的第752位Ser的突变还不足以使Ago2完全不定位于P-Body之外,实验发现它还需要第32位Gly、128位Phe、458位Pro突变的协助,Ago2四点突变子Ago2-G32W-F128L-P458S-S752G完全不在P-Body中定位。说明四个氨基酸突变的协同作用决定了Ago2不在P-Body内聚集。

关键词： Ago2 P-Body 荧光免疫染色

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mTOR蛋白FRB结构域的纯化与结晶

mTOR蛋白FRB结构域的纯化与结晶

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：赵鸿周化民厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

The target of rapamycin（TOR）是一个在外界信号刺激下调节细胞生长和代谢的丝氨酸/苏氨酸激酶。TOR存在于所有真核生物中。在酵母、果蝇和哺乳动物中对TOR的研究表明,TOR通过调节转录、翻译、蛋白降解和核糖体合成等过程来控制细胞... 详细信息

The target of rapamycin（TOR）是一个在外界信号刺激下调节细胞生长和代谢的丝氨酸/苏氨酸激酶。TOR存在于所有真核生物中。在酵母、果蝇和哺乳动物中对TOR的研究表明,TOR通过调节转录、翻译、蛋白降解和核糖体合成等过程来控制细胞的生长（大小和数量的增长）。雷帕霉素（Rapamycin）是一种来源于Streptomyces hygroscopicus菌株的抗真菌物质,它可以和异构酶FKBP12（FK506 binding protein）形成复合体。该复合体与mTOR（The mammalian target of rapamycin）的FKBP12-rapamycin结合结构域发生特异性结合后可抑制mTOR的活性。然而,FKBP12-rapamycin复合体抑制mTOR活性的机理依然未知。我们用BL21（DE3）菌株表达蛋白,建立起一套用于制备高纯度高浓度高稳定性的FRB结构域的表达和纯化方法。得到了高纯度的FRB结构域多肽,并且得到了四个可以生长晶体的条件:1.0.1 mol/LHEPES pH7.5,70%（v/v）MPD 2.0.2 mol/LMgCl,0.1 mol/L HEPES sodium pH 7.5,30%（v/v）PEG400 3.0.2 mol/L（NH）PO,0.1 mol/L Tris-HCl pH 8.5,50%（v/v）MPD 4.0.02mol/L CaCl,0.1 mol/L NaAc pH4.6,30%（v/v）MPD其中第2组是效果最好的结晶条件,在此条件下得到了若干个可以进行X射线衍射分析的晶体。但是晶体在这些条件中生长还不够稳定,在试验中不能保证每次都能得到足够大小的高质量晶体,因此结晶条件仍需优化。我们下一阶段得工作是用X射线衍射法测定FRB结构域的晶体结构,这项工作可以为解释FKBP12-rapamycin复合体如何抑制mTOR的活性做出贡献。

关键词： mTOR 肿纯化结晶

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海洋真菌H-3代谢产物偏苯三酚细胞毒活性研究

海洋真菌H-3代谢产物偏苯三酚细胞毒活性研究

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国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛

作者：陈融黄耀坚郑忠辉宋思扬厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

本文对从真菌Aschersoniasp.次级代谢产物中分离到的化合物偏苯三酚的细胞毒活性进行了试验,并应用新兴的蛋白质组技术分析了其对人骨肉瘤细胞系MG-63抑制作用的机理,经蛋白质2-D电泳,以MALDI-TOF对差异蛋白点进行肽指纹图谱测定,经网... 详细信息

本文对从真菌Aschersoniasp.次级代谢产物中分离到的化合物偏苯三酚的细胞毒活性进行了试验,并应用新兴的蛋白质组技术分析了其对人骨肉瘤细胞系MG-63抑制作用的机理,经蛋白质2-D电泳,以MALDI-TOF对差异蛋白点进行肽指纹图谱测定,经网上数据库检索,查知3个点差异蛋白点.它们分别为β-肌动蛋白、RASp21蛋白激活因子和细胞黏附调控因子.已有文献报道该化合物具有抑制细胞微管蛋白聚合的活性,综合本实验的结果说明该化合物可能通过抑制细胞黏附因子,从而影响了细胞内的肌动蛋白相关的微管结构.同时,该化合物还可能具有抑制GTP酶,使ras蛋白处于非激活状态,最终抑制细胞的增殖的作用.

关键词：海洋真菌偏苯三酚人骨肉瘤细胞系肽指纹图谱代谢产物

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红树林植物无瓣海桑盐胁迫相关蛋白分离与质谱鉴定

红树林植物无瓣海桑盐胁迫相关蛋白分离与质谱鉴定

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中国植物学会七十周年年会

作者：林涛郭小玲陈亮厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门大学海洋与环境科学学院厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

红树林是一种生长在热带或亚热带海岸的特有的植被类型。它由红树科及一些其他不同科属的种类构成,具有防浪固堤、保护海岸生态环境的重要作用。由于生长在河口、港湾、海岔尾部潮沟以及泥质潮滩上,受到潮水或河流淡水的周期性浸淹,能... 详细信息

红树林是一种生长在热带或亚热带海岸的特有的植被类型。它由红树科及一些其他不同科属的种类构成,具有防浪固堤、保护海岸生态环境的重要作用。由于生长在河口、港湾、海岔尾部潮沟以及泥质潮滩上,受到潮水或河流淡水的周期性浸淹,能适应海水的高盐环境,也能适应河流淡水的低盐环境。因此,对红树林植物抗盐机理的研究成为近年来的研究热点。无瓣海桑是一种优良的红树林植物,它生长迅速,适应性强,能在短时间内成林,保护海堤,稳定

关键词：无瓣海桑盐胁迫红树林植物相关蛋白

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海洋放线菌的分离及其抗菌、抗肿瘤活性的筛选

海洋放线菌的分离及其抗菌、抗肿瘤活性的筛选

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2006全国海洋生物技术与海洋药物学术会议暨全国第九届海洋药物学术研讨会

作者：李健郑忠辉黄耀坚宋思扬徐庆妍沈月毛厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

从西太平洋近赤道区采集到的19个深海沉积物样品中分离到90株放线菌,采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗肿瘤活性进行筛选.结果显示,有35株放线菌菌对至少一种细菌或者真菌有抑制作用,占总供测菌株的38.8％... 详细信息

从西太平洋近赤道区采集到的19个深海沉积物样品中分离到90株放线菌,采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗肿瘤活性进行筛选.结果显示,有35株放线菌菌对至少一种细菌或者真菌有抑制作用,占总供测菌株的38.8％.有32株放线菌具有抗肿瘤活性,占供测菌株的35.6％,其中只对KB细胞有抑制作用的菌株有16株,只对Raji细胞有抑制作用的菌株有9株,对两种肿瘤细胞都有抑制作用的菌株有7株分别占供测菌株的17.8％、10.0％和7.8％.研究结果表明海洋沉积物来源的放线菌中蕴藏着丰富的抗菌及抗肿瘤活性菌株,是开发抗菌和抗肿瘤药物的宝贵资源.

关键词：深海沉积物海洋放线菌抗菌活性抗肿瘤活性

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鳄鱼胆汁对胆管癌细胞MZ-cha-1凋亡的诱导作用

鳄鱼胆汁对胆管癌细胞MZ-cha-1凋亡的诱导作用

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中国生物化学与分子生物学会农业分会第二届全国代表大会暨第九次学术研讨会

作者：宋巍康劲翮李珊珊陈清西厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门 361005

以鳄鱼胆汁为材料，经过生理盐水萃取得到胆汁提取物，应用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪等技术研究鳄鱼胆汁提取物对人胆管癌细胞MZ-cha-1细胞凋亡的诱导作用。实验结果显示，胆汁提取物可明显诱导人胆管癌细胞MZ-cha-1细胞的凋亡，... 详细信息

以鳄鱼胆汁为材料，经过生理盐水萃取得到胆汁提取物，应用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪等技术研究鳄鱼胆汁提取物对人胆管癌细胞MZ-cha-1细胞凋亡的诱导作用。实验结果显示，胆汁提取物可明显诱导人胆管癌细胞MZ-cha-1细胞的凋亡，经1.75mg／ml鳄鱼胆汁提取物诱导处理36h后，人胆管癌细胞MZ-cha-1细胞的增殖活动受到显著的抑制，细胞生长抑制率达86.7％;细胞周期检测，MZ-cha-1细胞在细胞周期各个阶段的分布发生了明显变化。研究结果表明，鳄鱼胆汁提取物对人胆管癌细胞MZ-cha-1凋亡的诱导具有显著作用，从而为进一步研究细胞凋亡机制提供重要基础和研究依据。

关键词：鳄鱼胆汁胆管癌细胞凋亡诱导作用

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离体筛选小麦耐盐系及稳定性分析

离体筛选小麦耐盐系及稳定性分析

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中国植物学会七十周年年会

作者：王鸣刚贾敬芬厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室西北大学生物技术研究室

进行农作物耐盐品种的选育具有重要的实践意义。研究证实,植物细胞离体培养中存在自发的基因突变和染色体变异,可作为丰富的遗传变异来源,而且在采用或不采用诱变剂的情况下,通过胁迫影响,有可能定向地选择出所希望的农业性状。我们以... 详细信息

进行农作物耐盐品种的选育具有重要的实践意义。研究证实,植物细胞离体培养中存在自发的基因突变和染色体变异,可作为丰富的遗传变异来源,而且在采用或不采用诱变剂的情况下,通过胁迫影响,有可能定向地选择出所希望的农业性状。我们以小麦幼穗、幼胚为原始材料,进行耐盐突变体的筛选,通过组织培养方法,筛选出几个小麦耐盐系。本实验就已筛选出的小麦耐盐系宝丰7228,进行愈伤组织和再生植株后代的生理生化分析,以鉴定其耐盐性的稳定。结果如下:

关键词：耐盐系再生植株离体筛选愈伤组织稳定性分析

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姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和凋亡相关基因表达的影响

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现代生物医学进展 2009年第12期9卷 2201-2205页

作者：赵振利郑燕彬陈兰英刘用金武福云李祺福厦门大学教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室福建厦门361005 河南城建学院河南平顶山467044

目的:探讨姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制及凋亡相关基因表达的影响。方法:用姜黄素处理MG-63细胞,细胞计数法检测细胞增殖抑制的效果;荧光染色观察细胞的凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期时相分析;免疫细胞化学法和Western blot... 详细信息

目的:探讨姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制及凋亡相关基因表达的影响。方法:用姜黄素处理MG-63细胞,细胞计数法检测细胞增殖抑制的效果;荧光染色观察细胞的凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期时相分析;免疫细胞化学法和Western blotting免疫法检测细胞凋亡相关基因的表达水平。结果:随着姜黄素浓度的增加及其作用时间延长,对细胞的增殖抑制作用增强,最高抑制率可达89.07%;光镜下可观察到细胞发生染色质浓缩,细胞核凝聚和碎裂等典型的凋亡形态学改变;FCM检测结果显示细胞经姜黄素处理后出现明显的凋亡峰;免疫反应结果显示,凋亡相关基因bcl-2和P53表达水平降低,而bax和Fas表达水平升高。结论:姜黄素能显著抑制MG-63细胞增殖并可有效诱导其凋亡,其作用机制可能与bcl-2和bax二者的比值发生变化从而接受了凋亡刺激信号有关。

关键词：姜黄素人成骨肉瘤MG-63细胞细胞凋亡 bcl-2 bax

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戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定

戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定

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2004年肝病实验室诊断与临床研究专题学术会议

作者：顾颖夏宁邵葛胜祥黄果勇李少伟朱子恒何志强陈毅歆王颖彬张军 361005 厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室广西壮族自治区痰病控制中心

戊型肝炎(戊肝)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的一种胃肠道传播的急性肝炎。本研究从E2蛋白制备出的多株mAb中成功鉴定出两株中和mAb,分别识别HEV ORF2上的两个不同表位区域,从而首次证实HEV ORF2上至少存在2个不同的中和表位区域,并为HEV... 详细信息

戊型肝炎(戊肝)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的一种胃肠道传播的急性肝炎。本研究从E2蛋白制备出的多株mAb中成功鉴定出两株中和mAb,分别识别HEV ORF2上的两个不同表位区域,从而首次证实HEV ORF2上至少存在2个不同的中和表位区域,并为HEV疫苗、诊断、病毒感染机制等相关研究提供了重要的工具.

关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体病毒感染中和性

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茶多酚抑制肿瘤的分子机制研究进展

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海峡药学 2008年第4期20卷 7-10页

作者：翁鹭娜黄河宁厦门市药品检验所厦门361012 厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

茶多酚对肿瘤形成的各个阶段都有预防和抑制作用,本文就茶多酚对抑制肿瘤的分子机制研究进展作一综述。

关键词：茶多酚分子机制肿瘤

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