检索结果-内蒙古大学图书馆

中华口腔医学杂志 2019年第12期54卷 841-846页

作者：张建鹏杨昊清严妍侯本祥首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科 100050 首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生与口腔组织功能重建北京市重点实验室 100050

目的研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9(PR domain zinc finger protein 9,PRDM9)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC)成骨向分化的影响.方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中... 详细信息

目的研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9(PR domain zinc finger protein 9,PRDM9)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC)成骨向分化的影响.方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中,利用重组慢病毒敲除PDLSC中的PRDM9基因,形成敲除组(简称PRDMsh组),转染空载体sh RNA作为对照组;应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测PRDM9基因的敲除效率;通过碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性测定、茜素红染色和钙离子定量分析检测敲除组PRDM9sh与对照组细胞成骨能力的差异;通过实时定量RT-PCR及蛋白免疫印迹实验检测敲除组PRDM9sh和对照组成骨分化指标骨钙蛋白在mRNA水平及蛋白水平的表达差异;通过裸鼠皮下移植物HE染色比较敲除组PRDM9sh及对照组体内成骨能力,计算新成骨组织面积百分比并进行统计学分析.结果实时定量RT-PCR结果显示,敲除组PRDM9sh中PRDM9基因的相对表达量(0.460±0.017)显著低于对照组(1.000±0.107)(P<0.05);成骨诱导5d后,敲除组PRDM9sh的ALP活性(0.762±0.063)显著低于对照组(1.225±0.058)(P<0.01);成骨诱导2、3周后,茜素红染色结果显示,与对照组相比敲除组PRDM9sh染色明显变浅;成骨诱导2、3周后,敲除组PRDM9sh钙离子含量[分别为(0.071±0.004)、(0.075±0.001)]较对照组[分别为(0.282±0.006)、(0.485±0.004)]显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示成骨2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白mRNA水平的相对表达量(1.059±0.148)显著低于对照组(2.542±0.190)(P<0.01);蛋白质印迹法结果显示成骨诱导1、2周时,敲除组PRDM9sh骨钙蛋白的蛋白水平表达明显弱于对照组;裸鼠皮下移植物HE染色及计算新成骨组织面积百分比结果显示敲除组PRDM9sh新成骨组织面积百分比[(3.8±2.41)%]较对照组[(24.54±7.06)%]显著降低(P<0.05).结论敲除PRDM9基因可以抑制牙周膜干细胞的体内外成骨分化功能.

关键词：甲基转移酶类牙周膜间充质干细胞 PR结构域锌指蛋白9 成骨分化

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脂多糖促进牙周膜间充质干细胞组蛋白去甲基化酶HR表达的研究

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口腔医学研究 2018年第6期34卷 648-652页

作者：张琛姚睿范志朋天津医科大学天津300070 天津市口腔医院儿童口腔科天津300041 首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050

目的:脂多糖是否对牙周膜间充质干细胞(periodontal ligment stem cells,PDLSCs)中组蛋白去甲基化酶相关基因表达存在调控功能。方法:利用不同剂量的脂多糖对牙周膜干细胞进行刺激处理;在mRNA水平利用实时定量RT-PCR(real time reverse ... 详细信息

目的:脂多糖是否对牙周膜间充质干细胞(periodontal ligment stem cells,PDLSCs)中组蛋白去甲基化酶相关基因表达存在调控功能。方法:利用不同剂量的脂多糖对牙周膜干细胞进行刺激处理;在mRNA水平利用实时定量RT-PCR(real time reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测组蛋白去甲基化酶相关基因的表达。qRT-PCR结果显示HR(hairless homolog)基因在脂多糖刺激后24h和48h结果显示,能促进HR的表达,其表达升高的水平与脂多糖刺激时间有相关性。1、5和10mg/L脂多糖在作用48h后都能促进HR的表达,其表达升高的水平与脂多糖刺激剂量有相关性。10μg/mL脂多糖抑制牙周膜干细胞体外矿化能力。结论:在牙周膜干细胞中脂多糖对牙周膜干细胞组蛋白去甲基化酶HR的表达有促进作用。

关键词：脂多糖组蛋白去甲基化酶牙周膜干细胞 Hairless 骨向分化

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NFκB信号通路在炎症根尖牙乳头干细胞中的作用

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北京口腔医学 2013年第1期21卷 9-12页

作者：杜鹃杜娟范志朋首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050

目的研究NFκB信号通路在炎症条件下对根尖牙乳头干细胞的作用。方法利用TNFα和***刺激人根尖牙乳头干细胞。Western Blot检测IκBα的磷酸化及蛋白降解,采用Real-time PCR在mRNA水平检测IL6及IL8的表达。结果 10 ng/ml TNFα或500ng/m... 详细信息

目的研究NFκB信号通路在炎症条件下对根尖牙乳头干细胞的作用。方法利用TNFα和***刺激人根尖牙乳头干细胞。Western Blot检测IκBα的磷酸化及蛋白降解,采用Real-time PCR在mRNA水平检测IL6及IL8的表达。结果 10 ng/ml TNFα或500ng/ml ***能诱导IκBα磷酸化及蛋白降解,并且促进NFκB的下游基因IL6及IL8的表达。结论在炎症根尖牙乳头干细胞,TNFα或LPS可以通过IκK复合体激活NFκB信号通路。NFκB信号通路的活化可能是导致炎症状态下根尖牙乳头干细胞功能损害的重要因素。

关键词：核因子κB 信号通路根尖牙乳头干细胞炎症

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组蛋白甲基化促进AP2a基因表达及骨髓间充质干细胞成骨分化

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北京口腔医学 2013年第6期21卷 301-304页

作者：马平杜娟范志朋首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050

目的研究转录因子AP2a的组蛋白甲基化状态对骨髓间充质干细胞成骨分化功能的影响。方法利用染色质免疫沉淀技术检测AP2a启动子甲基化状态。利用慢病毒载体的AP2a shRNA基因敲除AP2a进行丧失性功能研究。通过ALP活性、茜素红染色及钙离... 详细信息

目的研究转录因子AP2a的组蛋白甲基化状态对骨髓间充质干细胞成骨分化功能的影响。方法利用染色质免疫沉淀技术检测AP2a启动子甲基化状态。利用慢病毒载体的AP2a shRNA基因敲除AP2a进行丧失性功能研究。通过ALP活性、茜素红染色及钙离子定量分析研究骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力。结果与牙源性间充质干细胞相比,AP2a在骨髓间充质干细胞中表达明显升高,AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2明显增强。基因敲除AP2a能抑制骨髓间充质干细胞ALP活性及体外矿化能力。结论 AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2升高可以促进AP2a的表达和骨髓间充质干细胞成骨分化能力。

关键词：组蛋白甲基化 AP2a 骨髓间充质干细胞成骨分化

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BCOR基因敲除促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

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北京口腔医学 2013年第2期21卷 61-64页

作者：曹钰杜娟范志朋首都医科大学口腔医学院综合科北京100050 口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室

目的研究BCL6共抑制因子-BCOR对骨髓间充质干细胞成骨定向分化能力的影响。方法利用慢病毒载体的BCOR shRNA基因敲除BCOR,进行丧失性功能研究。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨分化相关基因的表达,观察骨髓间充质干... 详细信息

目的研究BCL6共抑制因子-BCOR对骨髓间充质干细胞成骨定向分化能力的影响。方法利用慢病毒载体的BCOR shRNA基因敲除BCOR,进行丧失性功能研究。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨分化相关基因的表达,观察骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力。结果 BCOR在牙源性间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的表达无明显差异。基因敲除BCOR促进了骨髓间充质干细胞ALP活性、体外矿化能力及成骨分化相关基因骨涎蛋白、骨钙素的表达。结论 BCOR基因表达降低能促进骨髓间充质干细胞成骨分化,证实BCOR是骨髓间充质干细胞成骨分化的抑制基因。

关键词： BCOR 骨髓间充质干细胞成骨分化

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组蛋白去甲基化酶KDM4B促进根尖牙乳头干细胞中成骨和成牙本质分化

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北京口腔医学 2013年第4期21卷 181-184页

作者：姚睿范志朋首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050 天津市口腔医院

目的研究组蛋白去甲基化酶KDM4B对根尖牙乳头干细胞定向分化能力的影响。方法人重组骨形成蛋白4(BMP4)刺激根尖牙乳头干细胞后检测KDM4B的表达;利用慢病毒转染过表达或者基因敲除KDM4B进行获得性或丧失性功能研究。通过检测碱性磷酸酶(A... 详细信息

目的研究组蛋白去甲基化酶KDM4B对根尖牙乳头干细胞定向分化能力的影响。方法人重组骨形成蛋白4(BMP4)刺激根尖牙乳头干细胞后检测KDM4B的表达;利用慢病毒转染过表达或者基因敲除KDM4B进行获得性或丧失性功能研究。通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色、钙离子定量分析研究根尖牙乳头干细胞体外成骨和成牙本质分化能力。结果 BMP4促进根尖牙乳头干细胞KDM4B的表达。基因敲除KDM4B抑制根尖牙乳头干细胞ALP活性及体外矿化能力、促进转录因子PPAR-gamma的表达。过表达KDM4B增强根尖牙乳头干细胞ALP活性和体外矿化能力。结论组蛋白去甲基化酶KDM4B具有促进根尖牙乳头干细胞成骨和成牙本质分化的潜能。

关键词：组蛋白去甲基化酶根尖牙乳头干细胞成骨和成牙本质分化 KDM4B

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丹参促进人脱落乳牙牙髓干细胞神经分化的研究

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北京口腔医学 2015年第2期23卷 65-68页

作者：姚睿王立平天津市口腔医院天津300075 首都医科大学口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室

目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHED)神经分化功能的影响。方法利用不同浓度的丹参注射液和神经诱导培养基诱导SHED分化为神经元样细胞。通过观察SHED经诱导后细胞的形态变化和采用Real-Time PCR方法检测神经元标记蛋白Nesti... 详细信息

目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHED)神经分化功能的影响。方法利用不同浓度的丹参注射液和神经诱导培养基诱导SHED分化为神经元样细胞。通过观察SHED经诱导后细胞的形态变化和采用Real-Time PCR方法检测神经元标记蛋白Nestin、早期神经元标记蛋白Ⅲ-Tubulin、神经细胞粘附因子NCAM、神经分化因子Neuro D、辅助T淋巴细胞因子TH、NEF等的表达,来鉴定神经元样细胞。结果丹参注射液诱导后SHED胞体收缩,突起伸出,形似神经元;Real-Time PCR结果显示丹参注射液促进神经元标记蛋白Nestin、早期神经元标记蛋白Ⅲ-Tubulin、神经细胞粘附因子NCAM、神经分化因子Neuro D、NEF的表达。丹参注射液联合神经培养基诱导SHED神经分化的最佳丹参注射液浓度为50mg/ml。结论中药丹参在一定浓度范围内可促进SHED向神经元样细胞分化。

关键词：脱落乳牙牙髓干细胞丹参神经分化

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DLX2基因促进脐带干细胞成骨分化

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北京口腔医学 2014年第5期22卷 241-245页

作者：付晓茹范志朋曹钰首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050 北京市丰台区铁营医院口腔科首都医科大学口腔医学院综合科全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京100050

目的研究Distal-less homeobox 2(DLX2)对脐带干细胞成骨定向分化能力的影响。方法成骨分化诱导培养基诱导脐带干细胞体外成骨分化;逆转录病毒转染构建过表达DLX2的脐带干细胞,进行DLX2获得性功能研究;碱性磷酸酶活性实验检测成骨早期... 详细信息

目的研究Distal-less homeobox 2(DLX2)对脐带干细胞成骨定向分化能力的影响。方法成骨分化诱导培养基诱导脐带干细胞体外成骨分化;逆转录病毒转染构建过表达DLX2的脐带干细胞,进行DLX2获得性功能研究;碱性磷酸酶活性实验检测成骨早期分化指标—碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析检测干细胞体外矿化能力;实时荧光定量反转录PCR(real time reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DLX2及成骨分化相关基因-Sp7转录因子、骨涎蛋白和骨钙素的表达。结果 qRT-PCR结果显示,DLX2在牙周膜干细胞的表达明显高于非牙源性干细胞—脐带干细胞、骨髓干细胞、脂肪干细胞。碱性磷酸酶活性结果显示过表达DLX2明显增强脐带干细胞的碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示过表达DLX2明显增强脐带干细胞体外矿化能力;qRT-PCR结果显示过表达DLX2明显促进Sp7转录因子、骨涎蛋白和骨钙素的表达。结论 DLX2具有促进脐带干细胞体外成骨分化的潜能。

关键词： DLX2 干细胞脐带成骨分化

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Sonic hedgehog信号对口腔鳞癌中组蛋白甲基化转移酶的研究

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北京口腔医学 2013年第1期21卷 17-20页

作者：尹小楠马玉实杜娟范志朋青岛市立医疗集团口腔科 266005 首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室

目的检测Sonic hedgehog信号在口腔鳞癌致病过程中是否具有调节组蛋白甲基化转移酶表达的功能。方法利用人重组SHH-N蛋白及过表达M2-SMO在舌鳞状细胞癌细胞系SCC6激活Shh信号,利用Cyclopamine阻断Shh信号,采用Real-time PCR在mRNA水平... 详细信息

目的检测Sonic hedgehog信号在口腔鳞癌致病过程中是否具有调节组蛋白甲基化转移酶表达的功能。方法利用人重组SHH-N蛋白及过表达M2-SMO在舌鳞状细胞癌细胞系SCC6激活Shh信号,利用Cyclopamine阻断Shh信号,采用Real-time PCR在mRNA水平检测组蛋白甲基化转移酶相关基因的表达。结果发现激活Shh信号通路,组蛋白甲基化转移酶DOT1、MLL2和MLL4在mRNA水平表达明显升高。抑制Shh信号通路,DOT1、MLL2和MLL4表达明显降低。结论在口腔鳞癌中组蛋白甲基化转移酶DOT1、MLL2和MLL4是Shh信号通路的下游基因,其表达受Shh信号分子的正向调控。

关键词： Sonic hedgehog信号口腔鳞癌组蛋白甲基化转移酶

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基于细胞重组技术的小型猪颌骨内全牙再生研究

基于细胞重组技术的小型猪颌骨内全牙再生研究

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：吴志芳王福王松灵首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重建北京市重点实验室北京 100050

目的：基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生. 方法：本实验以小型猪为动物模型,以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,... 详细信息

目的：基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生. 方法：本实验以小型猪为动物模型,以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,无需生物支架材料,回植于成年小型猪颌骨内,期间以骨髓间充质干细胞和阿司匹林为免疫调节介质;从影像学和组织学方面观察牙齿再生情况. 结果：回植150天后,影像学资料显示,回植区可见一高密度影,中心有一低密度影像,类似于牙体组织;用工程软件三维重建后,发现为该再生牙呈水平向生长,一端较大,类似牙冠,一端较尖细,类似于单根牙牙根.获取该回植区牙槽骨进行HE染色,发现再生牙具有非常类似于自然牙的牙体及牙周组织结构,包括牙釉质、牙本质、牙髓、牙骨质、牙周膜及牙槽骨等. 结论：基于发育学原理,利用细胞重组技术,无需支架材料,可在大型动物颌骨内再生出具有类似于天然牙解剖结构的全牙,为将来开展人类全牙再生转化研究提供了有意义的参考依据.

关键词：牙齿缺失颌骨内全牙再生细胞重组

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