检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2005年第4期19卷 314-317页

作者：董蕊金岩刘源聂鑫王新文赵宇第四军医大学口腔医学院口腔组织病理学教研室西安710032 第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心西安710032

目的　筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状。　方法　按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD... 详细信息

目的　筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状。　方法　按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD3等组,以及角质化细胞专用无血清培养基(keratinocyte- SFM,K- SFM) ,同时应用同一个体的成纤维细胞经丝裂霉素处理后作滋养层,培养人表皮干细胞。通过细胞生长曲线及MTT检测,观察细胞的生长状态。在体外培养扩增表皮干细胞后,利用透射电镜、流式细胞仪分析、Brd U检测,观察细胞的生长状态;结合流式细胞仪分析,观察细胞周期的变化。　结果　人表皮干细胞在FAD组中生长良好,加入b FGF可进一步改善细胞的生长状态。扩增后细胞检测提示,人表皮干细胞在体外培养过程中呈典型的克隆性生长,生长周期长。流式细胞仪检测表明,人表皮干细胞80 .2 %处于G0 /G1 期;透射电镜观察见其细胞器少,细胞核浆比大。　结论　加入b FGF的FAD培养基并同时利用滋养层,更适合人表皮干细胞的生长,在稳定状态下是一种处于静止期的幼稚细胞。

关键词：人表皮干细胞生物学性状生长状态初步探讨碱性成纤维细胞生长因子流式细胞仪分析流式细胞仪检测 factor 无血清培养基细胞生长曲线体外培养扩增透射电镜观察 bFGF FAD 角质化细胞 MTT检测细胞特性不同浓度丝裂霉素

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大张皮片法与小皮条法培养表皮细胞的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2004年第6期18卷 505-507页

作者：卢涛金岩高天文刘源张勇杰雷娟第四军医大学西京医院全军皮肤性病中心西安710032 口腔医学院口腔组织病理学教研室组织工程实验中心

目的　比较研究用大张皮片和小皮条培养表皮细胞的方法。　方法　将皮肤组织切成大张皮片 ,用锐刀网状切割真皮面 ,Dispase酶消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后消化表皮进行表皮细胞培养 (大张皮片法 )。将同样大小的皮肤组织切割成... 详细信息

目的　比较研究用大张皮片和小皮条培养表皮细胞的方法。　方法　将皮肤组织切成大张皮片 ,用锐刀网状切割真皮面 ,Dispase酶消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后消化表皮进行表皮细胞培养 (大张皮片法 )。将同样大小的皮肤组织切割成小皮条 ,消化充分后用镊子分离真、表皮 ,然后进行表皮细胞培养 (小皮条法 )。记录两种方法切割皮肤和分离真、表皮所需时间 ,比较培养出表皮细胞的数量和纯度。　结果　将 5 cm2 大小的皮肤切割成小皮条需要 8～10分钟 ,而将同样大小皮肤切割成大张皮片仅需 1～ 2分钟 ;从小皮条上分离真、表皮耗时 10～ 15分钟 ,大张皮片法仅需2分钟。通过对比培养发现 ,大张皮片法获得的表皮细胞较多 ,活力较强 ,发生成纤维细胞污染的机会少。　结论　大张皮片法较小皮条法操作更简便、快捷 ,培养获得的表皮细胞活性高。

关键词：细胞培养表皮细胞成纤维细胞方法学

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组织工程角膜生物材料载体制备的比较性研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第2期20卷 185-188页

作者：张超金岩聂鑫刘源雷娟胡丹武警陕西总队医院西安710054 第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室组织工程实验中心第四军医大学西京医院

目的比较用不同的方法脱细胞处理异种(猪)角膜基质制备组织工程角膜支架材料,并对其生物相容性进行研究。方法成年York猪角膜基质材料,以Triton联合0.25%胰酶,处理30min～3h为材料1;Triton联合DNA-RNA酶,处理8～14h为材料2;Triton联合0.... 详细信息

目的比较用不同的方法脱细胞处理异种(猪)角膜基质制备组织工程角膜支架材料,并对其生物相容性进行研究。方法成年York猪角膜基质材料,以Triton联合0.25%胰酶,处理30min～3h为材料1;Triton联合DNA-RNA酶,处理8～14h为材料2;Triton联合0.25%胰酶、DNA-RNA酶,处理3～5h为材料3。3种材料用无水氯化钙脱水干燥保存。在材料上接种兔角膜基质成纤维细胞,观察细胞生长情况。新西兰大白兔24只,随机分为3组,每组8只。右眼为实验眼,左眼为空白对照眼。将材料植入兔眼角膜基质层中,术后每日裂隙灯检查术眼;1、4、8和12周分别随机取2只兔眼角膜作HE染色,观察材料的生物相容性。结果材料1、2细胞脱出不完全,处理最佳时间分别是2h和10～12h,角膜基质网状间隙无明显增大;接种兔角膜基质成纤维细胞后,3～4d细胞死亡;植入兔角膜基质中有明显的免疫排斥反应。材料3脱出细胞完全,其脱细胞处理的最佳时间为4h,角膜基质纤维结构无破坏,呈三维网状结构,网状间隙明显增大;接种兔角膜基质成纤维细胞后,细胞在材料上贴附生长良好;将其植入兔角膜基质中无炎性及排斥反应,可逐渐降解吸收,有良好的生物相容性。结论Triton联合0.25%胰酶、DNA-RNA酶法处理的异种(猪)角膜基质具有良好的生物相容性,可作为一种组织工程角膜的支架材料。

关键词：组织工程角膜支架材料制备比较

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转化生长因子β及重组人骨形成蛋白2对雪旺细胞生物学行为影响的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第11期19卷 871-874页

作者：张勇杰金岩聂鑫孙慧生刘源赵宇刘鹏第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心西安710032

目的研究转化生长因子β(transformin ggrowth factorβ,TGF-β)、重组人骨形成蛋白2(recom binant humanbonemor phogenetic protein2,rhBMP-2)对雪旺细胞生物学行为的影响。方法体外培养SD乳鼠雪旺细胞,按5×103/孔接种96孔板,分为3组。A组:加入50ng/mlTGF-β;B组:加入50ng/mlrhBMP-2;C组不作任何处理,作为空白对照组。采用MTT法每天取4孔连测9d细胞数,并绘制生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期以观察雪旺细胞增殖情况;ELISA双夹心法测定培养液中神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)含量。结果MTT法检测显示A、B组细胞生长曲线远离C组,逐渐上升到第8、9天差异明显,A组较B组上升趋势更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪测定显示A组和B组细胞增殖指数较C组高(P<0.05)。ELISA法检测A组上清NGF含量最高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性TGF-β、rhBMP-2均能促进雪旺细胞增殖和分泌NGF的功能,而TGF-β更优于rhBMP-2。

关键词：转化生长因子β 重组人骨形成蛋白2 雪旺细胞周围神经

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组织工程皮肤修复皮肤缺损成功率与手术方法的相关性(英文)

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中国临床康复 2006年第1期10卷 185-187页

作者：何黎升金岩邓天政宋绍华刘鹏黄沙解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科陕西省西安市710032 解放军第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室组织工程实验中心陕西省西安市710032

背景:皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植,需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床,标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的:通过组织工程皮肤修复皮肤缺损,分析手术方法与愈合率的关系,为... 详细信息

背景:皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植,需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床,标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的:通过组织工程皮肤修复皮肤缺损,分析手术方法与愈合率的关系,为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。设计:随机对照观察。单位:解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科,组织病理学教研室,组织工程实验中心。材料:实验于2003-10/2004-03在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织工程实验中心完成。选用2.5～3月龄健康清洁级约克猪6只,随机分为3组:组织工程全层组、组织工程真皮+自体表皮组、自体移植组,2只/。每只猪制作8个直径50mm的圆形皮肤缺损创面,16个创组面/组,共48个创面。方法:①制备组织工程全层皮肤和组织工程真皮。②组织工程全层组:沿画线自脂肪层切除全厚皮肤,彻底止血,以湿生理盐水纱布覆盖创面备用,此时取出组织工程全层皮肤并于组织工程皮肤上均匀打引流孔以利引流,用生理盐水冲去组织工程皮肤表面的培养液,使表皮层向上平铺于创面上,注意与创面间不能产生气泡。其上分别覆盖单层油纱布,生理盐水纱布、无菌干纱布、弹性海绵垫,每层厚度约为3～5mm,常规打包包扎,最后再以弹性绷带加压包扎。③组织工程真皮+自体表皮组:以同样方法切除全厚皮肤,将取下的皮肤用取皮鼓反取厚约0.1～0.2mm的刃厚表皮泡于生理盐水中备用。以同样方法取出处理组织工程真皮后覆盖于创面上,即刻覆盖自体刃厚表皮。其余处理同组织工程全层组。④自体移植组:切除全厚皮肤并去除脂肪组织后,回植于自体创面,覆盖各层敷料,加压包扎。⑤每次换药打开创面时,移植皮肤无感染、坏死、脱落且直径不小于3mm即为成活,否则即为失败。于术后4周统计各组创面成活率。主要观察指标:术后4周各组移植皮肤成活情况。结果:术后4周时,组织工程全层组移植皮肤成活率75%,组织工程真皮+自体表皮组移植皮肤成活率87%,自体移植组移植皮肤成活率94%,3组比较基本相似(χ2=2.34,P>0.05)。结论:组织工程皮肤移植修复皮肤缺损的效果与自体表皮移植接近,证明组织工程皮肤修复皮肤缺损是可行的。

关键词：生物医学工程移植皮肤损伤皮肤缺损组织工程皮肤成功率手术方法

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出生后大鼠牙胚组织中nfic基因多种选择性剪接体的克隆研究

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实用口腔医学杂志 2005年第3期21卷 307-309页

作者：邢向辉文玲英金岩组轩东英胡世颉西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科 710032 西安第四军医大学口腔医学院织病理学教研室 710032 西安第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心 710032

目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用。方法:提取出生后SD大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA。根据NCBIGeneBank中nficcDNA序列,分别设计2对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态... 详细信息

目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用。方法:提取出生后SD大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA。根据NCBIGeneBank中nficcDNA序列,分别设计2对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行酶切鉴定,并对扩增产物进行序列测定。结果:P1、P2为引物进行PCR扩增,可见大小约350bp的特异扩增产物;以P3、P4为引物进行PCR扩增,电泳可见大小不同的3条特异扩增产物,经克隆后的序列测定,为大鼠nfic基因的3种可变剪接体。结论:nfic基因在大鼠牙齿发育后期、牙根的发育前期有表达,并且存在至少3种大鼠nfic基因选择性剪接体。

关键词： nfic 牙齿发育选择性剪接体

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化学萃取异种组织工程化神经支架的方法及组织学研究

化学萃取异种组织工程化神经支架的方法及组织学研究

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中国组织工程、干细胞与神经再生学术会议

作者：国生辉金岩张勇杰刘鹏聂鑫董蕊第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室第四军医大学组织工程实验中心第四军医大学口腔医学院组织病理学教研室

目的研究新的化学萃取方法,清除成年兔坐骨神经中的细胞和髓鞘,建立成年兔坐骨神经的化学萃取方法,获得去细胞同种异神经体移植物。方法切取健康成年兔双侧坐骨神经,以triton X—100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃... 详细信息

目的研究新的化学萃取方法,清除成年兔坐骨神经中的细胞和髓鞘,建立成年兔坐骨神经的化学萃取方法,获得去细胞同种异神经体移植物。方法切取健康成年兔双侧坐骨神经,以triton X—100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE 染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜:免疫组织化学染色以显示雪旺细胞基底板层,并进行组织相容性的试验。结果去细胞神经的延展性及神经外膜的韧性和弹性良好,细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留,雪旺细胞基底板层保留完好,去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管,其植入的临近部位无急性炎症反应,有较好的生物相容性,无脓肿形成及组织坏死发生。结论Triton X—100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除周围神经中的细胞及髓鞘,萃取长段的去细胞神经,该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了雪旺细胞基底板层及板层素,可能是制备具有仿生结构的组织工程化神经支架较为理想的方法。

关键词：神经移植异种周围神经

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含黑素细胞表皮重建和对UVA照射的反应

含黑素细胞表皮重建和对UVA照射的反应

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中国科协第五届青年学术年会——陕西卫星会议

作者：卢涛刘源金岩高天文刘仲荣刘媛解放军第四军医大学西京医院口腔医学院口腔组织病理学教研室组织工程实验中心西安710032

体外重建不同颜色的含黑素细胞表皮,为研究色素形成和光防护提供新的方法.把角质形成细胞和黑素细胞混合培养,和胶原凝胶复合,2天后移王气液面培养,现察所制表皮的颜色.切片特染检查.用UVA照射所制表皮,现察颜色改变.含黑色素细胞的组... 详细信息

体外重建不同颜色的含黑素细胞表皮,为研究色素形成和光防护提供新的方法.把角质形成细胞和黑素细胞混合培养,和胶原凝胶复合,2天后移王气液面培养,现察所制表皮的颜色.切片特染检查.用UVA照射所制表皮,现察颜色改变.含黑色素细胞的组织工程表皮在气液面上培养到1周左右,明显呈棕黑或黄褐色,随细胞浓度高低颜色深浅有相应变化.重建的表皮特染呈类似正常表皮,在基底层处可见散在分布的黑色素细胞,多巴染色阳性,有的角质形成细胞核上方有黑素帽结构.重建的表皮经UVA照射后可出现色素沉着.重建含黑素细胞的表皮已经成功. 黑素细胞功能正常,可以观察到色素形成过程.重建的表皮可以用来研究色素形成和光防护.

关键词：组织工程黑素细胞紫外线表皮重建色素形成光防护

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