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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：于雪郭霞张馨元马红霞吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118

[目的]本实验旨在对猪肠外致病性大肠杆菌进行分离鉴定的基础上对其全基因组序列进行测定,并对其携带的耐药基因进行筛选,以期为猪肠外致病大肠杆菌耐药机制的进一步研究奠定基础。[方法]采用分子生物学鉴定方法对1株肠外致病性大肠杆... 详细信息

[目的]本实验旨在对猪肠外致病性大肠杆菌进行分离鉴定的基础上对其全基因组序列进行测定,并对其携带的耐药基因进行筛选,以期为猪肠外致病大肠杆菌耐药机制的进一步研究奠定基础。[方法]采用分子生物学鉴定方法对1株肠外致病性大肠杆菌进行分离鉴定,并采用平皿二倍稀释法测定4种临床常用抗菌药物(氟苯尼考、强力霉素、环丙沙星、阿米卡星)对其体外最小抑菌浓度(MIC);提取此菌株基因组构建PairedEnd测序文库,并运用Illumina公司Hiseq2000高通量测序系统进行测序,将测序结果与NCBI的nr库进行Blast比对筛选耐药基因。[结果]分离鉴定获得了1株猪源肠外致病性大肠杆菌,4种临床常用抗菌药物对该株菌的MIC值均较高。经全基因组测序获得了相当于基因组大小100倍覆盖度(按照基因组≤5Mb计算)的测序数据,对其耐药基因分析结果显示,测序筛选出外排调控基因MarC、SoxR,外排泵MATE和ABC基因,耐药基因移动原件IS,四环素耐药基因tet,氟苯尼考耐药基因FloR及氯霉素乙酰转移酶等。[结论]该株猪源肠外致病性大肠杆菌对临床常用抗菌药物(氟苯尼考、强力霉素、环丙沙星、阿米卡星)均耐药,其基因组中携带有介导外排和介导四环素类、氯霉素类耐药的基因。

关键词：猪肠外致病大肠杆菌基因组测序耐药基因

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牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌一步突变株的筛选及其对氟喹诺酮类抗生素耐药机制的初步研究

牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌一步突变株的筛选及其对氟喹诺酮...

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：孔令聪高铎王梓马红霞吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118

[目的]本实验旨在研究牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)一步突变耐药株对氟喹诺酮类抗生素的耐药机制，为氟喹诺酮类抗生素耐药性的进一步研究提供依据.[方法]对临床分离Pm一步突变株进行筛选，并对其氟喹诺酮类耐药决定区(QRDR)的氨... 详细信息

[目的]本实验旨在研究牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)一步突变耐药株对氟喹诺酮类抗生素的耐药机制，为氟喹诺酮类抗生素耐药性的进一步研究提供依据.[方法]对临床分离Pm一步突变株进行筛选，并对其氟喹诺酮类耐药决定区(QRDR)的氨基酸序列变化进行检测.进一步测定羰基-氰-间氯苯腙、利血平对临床分离株和一步突变株的耐药性逆转，并结合体内环丙沙星蓄积和外排试验对其药物转运系统的存在进行初步确证.同时，对质粒携带的耐药基因进行检测.[结果]一步突变株均存在gyrA基因Asp87Asn的氨基酸置换，此外，部分菌株还存在在gyrA基因Serr83Ile的氨基酸置换、parC基因Gly78Asp的氨基酸置换，以及gyrB基因Asp402Asn和parC基因Glu84Lys的氨基酸置换.CCCP对临床分离株和一步突变株都有不同程度的耐药性逆转，但一步突变株对环丙沙星的外排能力比临床分离株强，对环丙沙星的体内蓄积却明显弱于临床分离株.[结论]Pm在氟喹诺酮类抗生素突变选择窗(MSW)内富集可得到一步突变株，且其对氟喹诺酮类抗生素的耐药机制主要由QRDR靶位突变和依赖质子驱动力的次级药物转运系统共同介导.

关键词：牛源荚膜血清A型Pm 氟喹诺酮类抗生素一步突变株耐药机制

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猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库中无同源基因的原核表达与活性分析

猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库中无同源基因的原核表达...

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：万玲唐艳孙小宁傅小蒙马红霞吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118

[目的]从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中克隆到一个无同源差异基因(Musca dom-estica no homologous gene,Md-N),并在大肠杆菌中表达,以期从家蝇体内寻找具有抗猪肺炎支原体活性的抗菌蛋白.[方法]以猪肺炎支原体诱导家... 详细信息

[目的]从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中克隆到一个无同源差异基因(Musca dom-estica no homologous gene,Md-N),并在大肠杆菌中表达,以期从家蝇体内寻找具有抗猪肺炎支原体活性的抗菌蛋白.[方法]以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对Md-N进行扩增,根据拼接得到的全长序列设计特异性引物进行PCR扩增后进行序列同源性分析.选用pGEX4T-1表达载体构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Md-N,将其转化至大肠杆菌BI21(DE3)进行原核表达.表达产物用GST Sepharose Beads重力层析柱纯化融合蛋白并进行活性分析.[结果]Md-N基因全长495bp,序列分析结果表明,在GeneBank中未找到与其具有高度同源性的基因序列;成功构建了具有正确序列的重组表达质粒pGEX-4T-1-Md-N;重组蛋白在诱导温度37℃、0.6mmoL/L IPTG诱导7h的条件下,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,分子量约为43 kDa;体外活性检测结果表明,融合蛋白对猪肺炎支原体具有抑制作用.[结论]重组工程菌表达得到Md-N基因的融合蛋白,且具有抑制猪肺炎支原体生长的作用,其在兽医临床具有良好的应用前景.

关键词：家蝇无同源基因克隆表达活性

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牛支原体耐药性研究进展

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中国兽药杂志 2013年第9期47卷 63-66页

作者：孔令聪张春艳高云航马红霞吉林农业大学动物科技学院长春130118 文登市张家产畜牧兽医工作站山东文登264407 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118

在对国内外牛支原体的耐药性研究进展做以综述的基础上,对近年来支原体的耐药机制进行了概述,以期为养牛业生产中牛支原体病的防治和耐药机制的研究提供参考。

关键词：牛支原体耐药性防治

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家蝇抗菌肽防御素基因的克隆及原核表达

家蝇抗菌肽防御素基因的克隆及原核表达

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：王梅梅马红霞吉林农业大学生命科学学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118

[目的]大肠杆菌诱导家蝇幼虫SSH文库筛选得到家蝇防御素基因，通过BLASTn软件分析显示，其与家蝇防御素mRNA全序列(AY260152.1)相似性为91％，与家蝇防御素前体mRNA序列(EF175879.1)相似性为93％，进一步对该基因进行cDNA和全长基因的... 详细信息

[目的]大肠杆菌诱导家蝇幼虫SSH文库筛选得到家蝇防御素基因，通过BLASTn软件分析显示，其与家蝇防御素mRNA全序列(AY260152.1)相似性为91％，与家蝇防御素前体mRNA序列(EF175879.1)相似性为93％，进一步对该基因进行cDNA和全长基因的克隆，并在大肠杆菌中表达，为研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定基础.[方法]：利用RACE技术获取家蝇防御素基因的全长序列，设计特异性引物，通过PCR方法对该基因进行扩增，以pET-32a(+)为载体构建重组质粒，并转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21中，经异丙基-3-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对表达产物进行分析.[结果]：获得目的片段大小327bp的家蝇抗菌肽防御素基因，经双酶切鉴定及DNA测序结果显示，目的基因已成功连接到表达载体pET-32a(+)上，经SDS-PAGE分析，重组蛋白在大肠杆菌BL21中表达，蛋白大小约为30KDa.[结论]：扩增出了家蝇防御素全长基因，并成功构建重组蛋白表达系统.融合蛋白以包涵体形式在大肠杆菌BL21中表达.

关键词：家蝇抗菌肽防御素基因克隆原核表达

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黏质沙雷菌短尾噬菌体中国分离株的鉴定

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病毒学报 2012年第4期28卷 439-443页

作者：徐凤宇刘永杰马红霞张岩苏胜兵沈婵娟陆承平吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

以黏质沙雷菌jn01株为宿主菌,从环境污水中分离噬菌体,经反复挑取噬菌斑,获得1株纯化的噬菌体,定名为SmPjn。SmPjn在双层琼脂平板上可形成直径约2mm,圆形、透明的噬菌斑,边缘清晰。透射电镜观察,该噬菌体有一短尾,长(7±1.25)nm,头... 详细信息

以黏质沙雷菌jn01株为宿主菌,从环境污水中分离噬菌体,经反复挑取噬菌斑,获得1株纯化的噬菌体,定名为SmPjn。SmPjn在双层琼脂平板上可形成直径约2mm,圆形、透明的噬菌斑,边缘清晰。透射电镜观察,该噬菌体有一短尾,长(7±1.25)nm,头部长、宽分别为(58±2.16)nm×(55±0.47)nm,属短尾噬菌体科(Podoviridae)。可裂解jn01以外的2株黏质沙雷菌;与宿主菌共培养4h后的最佳感染复数为1;一步生长曲线表明该噬菌体的潜伏期约为50min,平均爆发量约为1125pfu/cell。基因组为大于27kb的DNA,可分别被HindⅢ、EcoRⅠ切成11和9个电泳片段。本报道为国内首次分离黏质沙雷菌短尾噬菌体。

关键词：黏质沙雷菌短尾噬菌体分离鉴定

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体外培养猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点的标记

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畜牧兽医学报 2012年第5期43卷 735-739页

作者：车东升穆成龙刘飞飞张海全孙泽威秦贵信动物生产及产品质量安全教育部重点实验室(吉林农业大学) 长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118

本研究旨在获得体外培养状态下的猪小肠上皮细胞,研究猪小肠上皮细胞与大豆凝集素的结合情况。选取新生未哺乳健康仔猪,取小肠组织对小肠上皮细胞进行分离培养,并进行纯化。纯化后的细胞以角蛋白抗体-8为一抗进行细胞免疫化学试验鉴定,... 详细信息

本研究旨在获得体外培养状态下的猪小肠上皮细胞,研究猪小肠上皮细胞与大豆凝集素的结合情况。选取新生未哺乳健康仔猪,取小肠组织对小肠上皮细胞进行分离培养,并进行纯化。纯化后的细胞以角蛋白抗体-8为一抗进行细胞免疫化学试验鉴定,鉴定后的猪小肠上皮细胞以FITC-SBA为探针进行细胞凝集素荧光标记化学试验,对猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点进行标记。结果表明:试验分离纯化的细胞经角蛋白抗体-8鉴定为阳性,所分离纯化的细胞为猪小肠上皮细胞,经检测其纯度达90%以上,猪小肠上皮细胞FITC-SBA标记结果为阳性。体外培养的猪小肠上皮细胞表面存在大量的大豆凝集素结合位点,进一步明确了猪小肠上皮细胞是大豆凝集素结合的主要细胞类型之一,为单胃动物大豆凝集素抗营养机制研究提供理论依据。

关键词：大豆凝集素猪小肠上皮细胞荧光标记

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蛋氨酸对仔猪脾脏指数及脾脏IL-2 mRNA表达量的影响

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饲料工业 2012年第21期33卷 26-29页

作者：程传锋孙会秦贵信许雪魁王晓宇苏月娟吉林农业大学动物科技学院动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118

试验为研究蛋氨酸水平对仔猪免疫功能以及脾脏IL-2 mRNA表达量的影响。选用体况良好,体重(23.26±0.48)kg的杜×长×大三元杂交仔猪36头,按试验要求随机分为6组,每组设3个重复,每个重复2头猪,分别饲喂不同蛋氨酸水平的日粮... 详细信息

试验为研究蛋氨酸水平对仔猪免疫功能以及脾脏IL-2 mRNA表达量的影响。选用体况良好,体重(23.26±0.48)kg的杜×长×大三元杂交仔猪36头,按试验要求随机分为6组,每组设3个重复,每个重复2头猪,分别饲喂不同蛋氨酸水平的日粮,饲养时间为28 d。结果表明,0.30%蛋氨酸处理组的脾脏指数显著高于对照组(P<0.05),0.42%和0.48%蛋氨酸处理组的脾脏指数极显著低于对照组(P<0.01);0.30%蛋氨酸处理组血清中IL-2的浓度极显著高于对照组(P<0.01),0.42%和0.48%蛋氨酸处理组血清中IL-2的浓度极显著低于对照组(P<0.01);0.30%蛋氨酸处理组IL-2 mRNA的表达量极显著高于对照组(P<0.01),0.18%和0.36%蛋氨酸处理组IL-2 mRNA的表达量与对照组相比无显著性差异(P>0.05);0.42%和0.48%蛋氨酸处理组IL-2 mRNA的表达量极显著低于对照组(P<0.01)。结果提示,蛋氨酸水平为0.30%时,能够提高机体的免疫力,从而增强仔猪的抗病能力。

关键词：蛋氨酸仔猪脾脏指数 IL-2 mRNA

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锦鲤疱疹病毒病的诊断病例

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中国兽医杂志 2012年第7期48卷 77-78页

作者：李新伟周井祥朱霞王好吉林农业大学动物科技学院动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118

锦鲤疱疹病毒病（koi herpesvirus disease，KHVD）是由锦鲤疱疹病毒（koi herpesvirus，KHV）感染锦鲤、鲤及其普通变种如框镜鲤等而导致的一种具有高度传染性和致死性的疾病。该病多发生在水温为18℃～28℃的春秋季节，具有高度传染... 详细信息

锦鲤疱疹病毒病（koi herpesvirus disease，KHVD）是由锦鲤疱疹病毒（koi herpesvirus，KHV）感染锦鲤、鲤及其普通变种如框镜鲤等而导致的一种具有高度传染性和致死性的疾病。该病多发生在水温为18℃～28℃的春秋季节，具有高度传染性，发病率和死亡率均可高达80％～100％。

关键词：疱疹病毒病锦鲤病例诊断春秋季节传染性致死性死亡率

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宰前短期添加镁对PIC育肥猪肉色和pH值的影响

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中国畜牧兽医文摘 2013年第6期29卷 152-152页

作者：谷琳琳吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室室吉林长春130118

试验研究了宰前短期添加不同剂量镁对PIC育肥猪肉质的影响。试验以PIC育肥猪为研究对象，共分4个处理，每个处理4头。分别在限饲基础13粮基础上每日补饲0、2、4、6g镁。结果表明：每头添加镁2g／d有提高色素含量趋势（P〉O．05），添加4... 详细信息

试验研究了宰前短期添加不同剂量镁对PIC育肥猪肉质的影响。试验以PIC育肥猪为研究对象，共分4个处理，每个处理4头。分别在限饲基础13粮基础上每日补饲0、2、4、6g镁。结果表明：每头添加镁2g／d有提高色素含量趋势（P〉O．05），添加4g/d可极显著提高肌肉色素含量7．41％（P〈0．01），

关键词：育肥猪 PIC 短期宰前 pH值镁肉色色素含量

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