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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第2期28卷 98-102,138页

作者：曹利静冯宪敏魏超君王凤云张西臣卢思奇河北省儿童医院重症监护科石家庄050031 首都医科大学寄生虫学教研室北京100069 吉林医药学院病原学教研室吉林132013 吉林大学动物科学与畜牧兽医学院长春130062

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾... 详细信息

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫犬贾第虫病毒锤头状核酶丙酮酸激酶

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特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第4期28卷 257-260页

作者：冯宪敏曹利静王凤云张西臣卢思奇吉林医药学院病原生物教研室吉林132013 首都医科大学病原生物学系北京100069 河北省儿童医院重症监护科石家庄050031 吉林大学畜牧医学院长春130062

目的应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制。方法用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养... 详细信息

目的应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制。方法用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养体(B组)和正常培养滋养体(C组)为对照。转染后24、48、72和96h收集各组虫体,计算滋养体浓度,绘制虫体生长曲线。提取虫体总RNA,分别采用RT-PCR和实时PCR方法检测转染后各组各时间段(24、48、72和96h)核酶mRNA和丙酮酸激酶mRNA相对含量的变化,用紫外分光光度法检测丙酮酸激酶活性。结果虫体生长曲线显示,转染96h,A组虫体的生长受到明显抑制。RT-PCR检测结果表明,A组在转染后24h即可在贾第虫滋养体细胞内检测到核酶RNA,其水平可持续至转染后96h。A组在电击转染后24和48h,丙酮酸激酶mRNA的表达量分别下降至C组的5%(5.00±0.17)和8%(8.00±0.19),相应的酶活性下降至C组的32%(32.00±0.64)和38%(38.00±0.65)。结论特异性锤头状核酶显著抑制了蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达。

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶锤头状核酶

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野菊花提取物调节血脂作用的研究

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吉林医药学院学报 2010年第6期31卷 321-324页

作者：陈传千屈跃丹单广胜王春雨朱小芳沈艳平范红艳吉林医药学院药物制剂本科班吉林吉林132013 吉林医药学院基础医学院药理教研室吉林吉林132013

目的研究野菊花提取物(CIE)对高脂血症(HLP)大鼠血脂的影响及其作用机制。方法用13 mL/(kg.d)高脂乳剂灌胃,建立HLP模型,同时灌胃CIE 1.25、2.50、5.00 g/(kg.d),35 d后检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(H... 详细信息

目的研究野菊花提取物(CIE)对高脂血症(HLP)大鼠血脂的影响及其作用机制。方法用13 mL/(kg.d)高脂乳剂灌胃,建立HLP模型,同时灌胃CIE 1.25、2.50、5.00 g/(kg.d),35 d后检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;肝组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与正常组相比,模型组血清中TC、TG水平显著升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平下降,但无统计学意义,表明已成功建立HLP模型。与模型组相比,CIE可显著地降低HLP大鼠血清中TC的水平(P<0.01);CIE 1.25 g/(kg.d)剂量组血清中TG水平显著降低(P<0.05);CIE各剂量组有升高HDL-C水平趋势,但无统计学意义;CIE 1.25、2.50 g/(kg.d)剂量组能显著降低HLP大鼠肝组织MDA含量(P<0.01);CIE各剂量组有升高SOD活性的趋势(P<0.05)。结论 CEI具有明显的调血脂作用,这可能与CEI抗脂质过氧化作用有关。

关键词：野菊花提取物高脂血症调血脂抗脂质过氧化

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妇科止血灵片在药流后阴道出血中的应用及护理方法

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按摩与康复医学 2010年第19期1卷 77-78页

作者：姜新常影郑佳段大航吉林医药学院基础护理教研室 132013 吉林医药学院口腔专科班 132013 北华大学医学院 132013

人工流产是我国育龄妇女终止妊娠的主要方法，在临床实际操作中做好人工流产的心理护理，减少并发症有着十分重要的意义。近些年来，米非司酮伍用米索前列醇终止早孕已广泛应用于临床，但存在出血时间长及宫内残留的弊病。我院近几年内... 详细信息

人工流产是我国育龄妇女终止妊娠的主要方法，在临床实际操作中做好人工流产的心理护理，减少并发症有着十分重要的意义。近些年来，米非司酮伍用米索前列醇终止早孕已广泛应用于临床，但存在出血时间长及宫内残留的弊病。我院近几年内在药流术后使用妇科止血灵治疗阴道出血中，结合心理护理，取得了良好效果，现报道如下。

关键词：药物流产术米非司酮米索前列醇片终止早孕

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急性低血压对清醒大鼠前庭内侧核区γ-氨基丁酸和甘氨酸含量的影响

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生理学报 2010年第1期62卷 30-34页

作者：李香兰安英金清华金元哲延边大学基础医学院生理学与病理生理学教研部长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室(延边大学) 吉林医药学院机能学实验中心

为了探讨急性低血压通过外周前庭器官影响前庭神经核活动的部分神经化学机制,本实验利用脑部微量透析法和高效液相色谱法,观察静脉注射硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)诱发急性低血压时,清醒大鼠前庭内侧核(medial vesti-bular nucleu... 详细信息

为了探讨急性低血压通过外周前庭器官影响前庭神经核活动的部分神经化学机制,本实验利用脑部微量透析法和高效液相色谱法,观察静脉注射硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)诱发急性低血压时,清醒大鼠前庭内侧核(medial vesti-bular nucleus,MVN)内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)和甘氨酸(glycine,Gly)含量的变化。实验选用Wistar雄性清洁级大鼠72只,体重在(250±50)g,随机分为对照组、前庭器官损伤同侧组和前庭器官损伤对侧组。实验观察到,静脉注射SNP使血压平均下降30%时,MVN内GABA和Gly含量明显减少(P<0.01)。用对氨基苯胂酸盐破坏单侧外周前庭器官两周后,静脉注射SNP使血压降低30%后,单侧前庭器官破坏同侧MVN内GABA和Gly含量无明显变化;而单侧前庭器官破坏对侧MVN内GABA和Gly含量明显减少(P<0.01)。上述结果提示,清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有GABA和Gly的参与。

关键词：低血压前庭内侧核 γ-氨基丁酸甘氨酸

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人参皂苷Rb_1对染铅小鼠骨铅含量及行为记忆的影响

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吉林大学学报（医学版） 2009年第5期35卷 848-851页

作者：刘微王艳春范红艳沈楠任旷吉林医药学院基础医学院药理教研室吉林吉林132013

目的:研究人参皂苷Rb1对染铅小鼠骨铅含量、学习记忆功能的影响及其对脑内超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法:以醋酸铅饮水制备染铅小鼠模型,分为空白对照组、模型组、人参皂苷Rb1(100、50和25 ***-1)组,采... 详细信息

目的:研究人参皂苷Rb1对染铅小鼠骨铅含量、学习记忆功能的影响及其对脑内超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法:以醋酸铅饮水制备染铅小鼠模型,分为空白对照组、模型组、人参皂苷Rb1(100、50和25 ***-1)组,采用避暗实验及Morris水迷宫实验评价人参皂苷Rb1对学习记忆的影响,并测定小鼠的骨铅含量、脑组织中SOD活性和NOS活性。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠避暗实验潜伏期缩短(P<0.01)、错误次数增加(P<0.05);水迷宫实验,与空白组比较,模型组搜索路程及潜伏期均延长(P<0.05);SOD活性降低,NOS活性升高,骨铅含量升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rb1组小鼠避暗实验潜伏期延长、错误次数减少;水迷宫实验与模型组比较搜索路程及潜伏期均缩短(P<0.05或P<0.01);SOD活性升高(P<0.05或P<0.01);NOS活性降低(P<0.05或P<0.01),骨铅含量降低(P<0.01),以上作用均呈现剂量依赖性。其中,25 ***-1剂量组与100和50 ***-1剂量组之间存在显著性差异(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1可减少铅在骨组织中的沉积,对染铅小鼠的学习记忆障碍有改善作用,可提高染铅小鼠体内的抗氧化系统活力。

关键词：铅人参皂苷Rb1 学习记忆骨铅

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柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C基因的克隆与表达

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中国生物制品学杂志 2009年第3期22卷 246-248,255页

作者：张宸豪任旷马爱新方芳吉林大学基础医学院免疫学教研室长春130021 吉林医药学院病原学教研室吉林132003

目的克隆并表达柯萨奇B4病毒(CVB4)非结构蛋白P2C基因。方法提取CVB4总RNA,RT-PCR扩增P2C基因,克隆入pUCm-T载体中,进行酶切和测序鉴定。双酶切重组质粒pUCm-T-P2C,将P2C基因片段定向亚克隆至原核表达载体pMAL-C2中,转化大肠杆菌JM109,I... 详细信息

目的克隆并表达柯萨奇B4病毒(CVB4)非结构蛋白P2C基因。方法提取CVB4总RNA,RT-PCR扩增P2C基因,克隆入pUCm-T载体中,进行酶切和测序鉴定。双酶切重组质粒pUCm-T-P2C,将P2C基因片段定向亚克隆至原核表达载体pMAL-C2中,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果RT-PCR扩增得到987bp的基因片段,测序结果与GenBank公布的P2C基因序列一致。pMAL-C2-P2C经双酶切鉴定,证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约78000,表达量约占菌体总蛋白的25%,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了CVB4P2C基因,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。

关键词：柯萨奇B4病毒非结构蛋白 P2C基因克隆表达

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越橘中原花青素抑制新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其作用机制

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中草药 2009年第8期40卷 1280-1284页

作者：王艳春任旷顾饶胜杨世杰吉林医药学院药理教研室吉林吉林132013 吉林大学基础医学院药理教研室吉林长春130021

目的研究越橘中原花青素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖的影响及其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,采用MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及... 详细信息

目的研究越橘中原花青素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖的影响及其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,采用MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的量,硝酸还原酶法、分光光度法检测NO、一氧化氮合酶(i NOS)活性,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学法测定p27蛋白的量。结果原花青素(25、50、100 mg/L)可抑制AngⅡ诱导的CFb增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白量增多,并明显提高CFb NO的量、i NOS的活性,同模型组比较差异有显著性(P<0.05、0.01),且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明G0/G1期细胞比例随原花青素质量浓度增加而增加,S期细胞比例随原花青素质量浓度增加而减少,与模型组相比差异有显著性(P<0.05、0.01),免疫细胞化学染色结果也表明原花青素可增加p27的蛋白表达,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01)。结论原花青素通过促进p27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而抑制CFb增殖和胶原分泌量的增加。

关键词：原花青素心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) p27

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真核表达hCAP-18／LL-37成熟肽对树突状细胞表面分子表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2009年第3期35卷 482-486页

作者：袁红艳王凤丽许娜常雅萍吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林医药学院吉林吉林132013

目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清... 详细信息

目的:研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法:通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清,与体外以rh-GM-CSF、rh-IL-4联合培养定向诱导分化的不成熟DCs共培养48 h,收获DCs;流式细胞仪检测DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达。结果:成功构建成熟肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,并实现在其真核细胞HEK293中的表达;流式细胞仪结果显示,pcDNA4/Myc-His-LL-37基因转染HEK293细胞培养上清刺激组DCs中CD40及HLA-DR的表达阳性率与对照组比较均明显升高(P<0.05)。结论:构建了真核表达的hCAP-18成熟肽LL-37,其可上调DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达,促进DCs功能的成熟。

关键词： hCAP-18/LL-37 成熟肽树突状细胞表面分子

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越桔原花青素对大鼠心肌纤维化作用的影响

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中国药理学通报 2009年第5期25卷 626-630页

作者：范红艳王艳春任旷顾饶胜沈楠刘微钟越吉林医药学院基础医学院药理学教研室吉林省吉林市132013 吉林医药学院实验中心机能实验室吉林省吉林市132013 吉林医药学院科研学术处吉林省吉林市132013

目的探讨越桔原花青素(procyanidin from Vaccini-um,PC)对大鼠心肌纤维化作用的影响及其机制。方法体内实验以异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)5 ***-1.d-1背部皮下注射,构建大鼠心肌纤维化模型,同时以灌胃方式给予PC 100、200、400 ***... 详细信息

目的探讨越桔原花青素(procyanidin from Vaccini-um,PC)对大鼠心肌纤维化作用的影响及其机制。方法体内实验以异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)5 ***-1.d-1背部皮下注射,构建大鼠心肌纤维化模型,同时以灌胃方式给予PC 100、200、400 ***-1.d-1,分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)、丙二醛(ma-londialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)活性;电镜观察心肌超微结构变化。体外实验采用细胞培养技术以血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)建立新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖模型,给予25、50和100 mmol.L-1的PC干预。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖;ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的含量。结果PC可剂量依赖性地降低心肌组织中Hyp、MDA含量、增强SOD活性,同Iso组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),电镜结果显示:PC可缓解Iso所导致的心肌损伤。体外实验部分PC(25、50和100 mg.L-1)可抑制AngⅡ诱导的CFb增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白含量增多,与AngⅡ组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论PC可通过抗氧化作用,抑制CFb的增殖及胶原的合成,进而抑制大鼠心肌纤维化,对心肌具有一定的保护作用。

关键词：原花青素心肌纤维化心肌成纤维细胞

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