检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年第4期55卷 441-448页

作者：秦千策宋军澎 Mahdi Borhani 张藜潇丁静吉林大学人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 青岛普瑞森医药科技有限公司山东青岛266000 新疆医科大学省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆乌鲁木齐830000

探讨旋毛虫C型凝集素(TsCTL)对小鼠的免疫调节作用。将TsCTL基因(GenBank登录号KRY42391.1)克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-TsCTL,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将重组TsCTL(rTsCTL)纯化、复性,并通过Western-blot鉴定,同时测定内毒素水平。使用rTsCTL刺激小鼠脾细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,并采用qPCR检测脾细胞转录因子的表达水平。将10只C57BL/J小鼠随机分为对照组(n=5)和实验组(n=5)。实验组小鼠每只皮下注射50μg的rTsCTL(溶解在200μL PBS中),每周3次,持续4周。对照组则使用等量的PBS进行相同处理。收集实验组和对照组小鼠的脾细胞,并使用ELISA和qPCR检测细胞因子和转录因子的表达水平。最后,采用流式细胞术检测调节性T细胞的增殖情况。结果显示:rTsCTL对脾细胞无毒性。qPCR结果表明,rTsCTL能够提高小鼠脾细胞中Gata3和Foxp3的表达水平,同时降低T-bet的表达水平。动物实验的qPCR结果与细胞实验的结果一致。ELISA结果显示,rTsCTL促进了TGF-β和IL-4的表达,而抑制了IFN-γ的表达。流式细胞术检测结果表明,rTsCTL能够增加调节性T细胞的比例。这些结果表明,rTsCTL可以促进Th2型免疫反应,并抑制Th1型免疫反应。

关键词：旋毛虫 C型凝集素免疫调节

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梅花鹿源奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性

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微生物学通报 2025年第5期 2230-2243页

作者：曹润来王奇林孙春庆薛竹青刘子瑜胡盼王晓旭刘志杰中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室临沂市畜牧发展促进中心吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究所教育部重点实验室

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理... 详细信息

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理特征。【方法】收集腹泻病空肠内容物，通过细菌分离培养、革兰氏染色、显微镜镜检、16SrRNA基因及atpD基因测序和进化树分析等方法鉴定细菌种类。采集腹泻鹿的空肠、肺、肝、脾、肾和心等组织样品制作病理切片。通过检测毒力基因、生物膜形成能力、耐药性与耐药基因，以及部分菌株的小鼠致病性分析该菌的生物学特性。【结果】共鉴定出3株奇异变形杆菌，分别命名为SKPM1、SKPM2、SKPM3。3株菌均携带ureC、zapA、atfC、atfA、rsbA、ucaA和pmfA等7种毒力基因，具有生物膜形成能力；3株菌对青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、四环素、多黏菌素B等抗生素表现出多重耐药性，并检测出bla TEM、bla CTX-M、tetB、ant（3″）-I、sul2等耐药基因；致病性上菌株SKPM2的LD50为3.98×10～7 CFU/mL。【结论】本研究分离鉴定了3株梅花鹿源奇异变形杆菌，并研究了其生物学特性，为该菌引起的仔鹿腹泻病的防治和深入研究提供了实验基础。

关键词：梅花鹿仔鹿腹泻奇异变形杆菌生物学特性

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miR-142-5p过表达慢病毒载体的构建及对小鼠肠道上皮细胞的影响

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中国兽医学报 2025年第4期 678-684页

作者：孙奕成王静何雨殊董子健丁静吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGF... 详细信息

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGFP Puro,测序无误后命名该重组载体为plenti-miR-142-5p。将重组质粒和包装辅助质粒共转染293T细胞,包装产生miR-142-5p过表达慢病毒载体(LV-miR-142-5p)。收取重组慢病毒悬液,利用超速离心沉淀法浓缩,Real-time PCR测定病毒滴度。将病毒悬液尾静脉注射6～8周龄BALB/c小鼠,解剖取其结肠组织进行HE染色并在显微镜下观察。结果显示miR-142-5p同源重组入plenti载体,测序结果与预期序列一致。plenti-miR-142-5p与包装辅助质粒共转染293T细胞,根据绿色荧光表达情况确认转染成功,Real-time PCR结果显示慢病毒滴度为1.23×10～9 IU/mL。小鼠结肠组织切片显示感染组结肠完整性受损,出现明显炎症反应。证明miR-142-5 p可诱导小鼠肠上皮细胞损伤。

关键词： miR-142-5p 慢病毒肠道上皮细胞

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泛素特异性蛋白酶47调控狂犬病病毒感染的功能研究

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中国兽医学报 2025年第2期45卷 266-273页

作者：张艳楠武梦阳王重阳董浩淼果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染... 详细信息

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染对USP47表达水平的影响,然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示,RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平均上升,上清中病毒滴度也随之升高,同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低;敲低USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平降低,上清中病毒滴度也相应降低,IL-6基因水平升高。结果表明,USP47可促进RABV感染,抑制IL-6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

关键词：狂犬病病毒泛素特异性蛋白酶47 白细胞介素6

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羊肠道病毒胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2025年第4期 662-667页

作者：郑学博崔续媛闫乃天王倩颖李宏伟陈丽慧龚文杰王新平吉林大学动物医学学院吉林省公主岭市动物疫病预防控制中心吉林大学人兽共患病研究所教育部人兽共患病重点实验室

为建立一种快速检测羊肠道病毒（CEV）的免疫层析方法,以鼠源抗CEV VP1单克隆抗体作为金标抗体,以兔源抗CEV VP1多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别作为检测线和质控线,应用双抗体夹心原理制备CEV胶体金免疫层析试纸条,并对该方法的性能及临床... 详细信息

为建立一种快速检测羊肠道病毒（CEV）的免疫层析方法,以鼠源抗CEV VP1单克隆抗体作为金标抗体,以兔源抗CEV VP1多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别作为检测线和质控线,应用双抗体夹心原理制备CEV胶体金免疫层析试纸条,并对该方法的性能及临床应用等方面进行评估。结果显示,该方法能够特异性的检测出CEV,与牛肠道病毒、牛病毒性腹泻病毒无交叉反应;该方法最低检测限为102.49TCID50/mL,且具有良好的重复性;制备的试纸条于4℃条件下,有效期为3个月;应用该方法与RT-PCR方法检测部分临床样品,两者的符合率为100%。综上所述,本研究建立了检测新发CEV的胶体金免疫层析试纸条方法,组装的试剂条具有良好的特异性与敏感性,且操作简便,为CEV感染的现场快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

关键词：羊肠道病毒双抗体夹心胶体金免疫层析试纸条 VP1蛋白

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自噬与蛋白酶体途径在布鲁菌感染巨噬细胞过程中的相互作用

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 507-513页

作者：董炳梅梁萌萌许文雅王君宋立立任洪林沧州师范学院生命科学学院河北沧州061001 吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为了探明巨噬细胞(macrophage,M_(φ))感染布鲁菌(Brucella)后泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)在对抗Brucella过程中的相互作用关系,一方面将猪种布鲁菌(Brucella suis,***)分别体外感染M_(φ)和腹腔接种BALB/c小鼠,并对细胞上清液和腹腔液中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行了测定,结果显示***感染过程中UPS首先被激活,随后ALP途径发挥作用;另一方面,应用3-MA、乳胞素分别制备ALP抑制态M_(φ)与UPS抑制态M_(φ)并接种***,随后对细胞上清中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行测定,结果显示当M_(φ)UPS功能被抑制时,ALP作用被显著提高;而ALP功能被抑制时,UPS活性未有显著变化。最后,将不同状态M_(φ)接种***后,对***的胞内增殖能力进行测定,结果显示当UPS与ALP功能被同时抑制时,***的胞内增殖能力显著降低,且UPS对***胞内增殖的促进作用强于ALP。结果表明,Brucella感染M_(φ)过程中UPS与ALP存在相互作用关系,在理论上可为Brucella与宿主细胞相互作用机制的研究提供新思路。

关键词：自体吞噬泛素蛋白酶体途径布鲁菌巨噬细胞

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A型流感病毒PB1-F2蛋白与MOAP-1的相互作用

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微生物学报 2012年第9期52卷 1122-1128页

作者：崔雨明侯佩莉张茂林段铭关振宏吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所长春130062

【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull... 详细信息

【目的】探讨A型流感病毒PB1-F2蛋白和人类凋亡调节因子1(MOAP-1)之间的相互作用。【方法】构建pACT2-MOAP-1重组质粒,与pGBKT7-PB1-F2质粒共转化酵母AH109,检测转化菌在四缺培养基的生长情况及β半乳糖苷酶报告基因的活性;利用GST pull-down和免疫共沉淀(Co-IP)技术进一步验证PB1-F2与宿主细胞蛋白MOAP-1的相互作用;通过过表达PB1-F2和MOAP-1,检测PB1-F2对MOAP-1蛋白表达水平的影响。【结果】酵母双杂交结果表明,PB1-F2和MOAP-1可以在酵母细胞内特异性结合。GST pull-down和Co-IP实验也进一步证实了这两种蛋白的相互作用,而且PB1-F2可上调外源MOAP-1的蛋白水平。【结论】流感病毒PB1-F2与MOAP-1存在相互作用,PB1-F2可能通过与MOAP-1的相互作用参与调控细胞生长及凋亡过程。

关键词： A型流感病毒 PB1-F2 MOAP-1 蛋白相互作用

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低浓度甲醛对多肽和蛋白化学修饰的质谱研究

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分析化学 2016年第8期44卷 1193-1199页

作者：王子健杨静波李光谱孙宁宁孙万春彭其胜刘宁吉林大学第二医院吉林亚泰生物药业股份有限公司吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室

采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱(Nano-ESI-QTOF MS)技术,以标准肽段和流感病毒基质蛋白酶切肽段为模型,研究了甲醛对蛋白质和多肽主链的修饰作用。采用与实际病毒灭活过程一致... 详细信息

采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱(Nano-ESI-QTOF MS)技术,以标准肽段和流感病毒基质蛋白酶切肽段为模型,研究了甲醛对蛋白质和多肽主链的修饰作用。采用与实际病毒灭活过程一致的实验条件(4℃,0.025%(V/V)福尔马林(37%(w/w)甲醛溶液)处理72 h),进行甲醛与多肽的化学反应。结果表明,在实验条件下,甲醛能与标准肽段N端的氨基反应生成羟甲基加合物,再发生缩合反应生成亚胺,形成+12 Da的产物。此外,甲醛还能与标准肽段中的精氨酸、赖氨酸的侧链发生反应,生成+12 Da的反应产物。对流感病毒基质蛋白的酶切肽段与甲醛的反应的质谱分析结果显示,多数的肽段都生成了+24 Da的产物,质量的增加来源于肽段N端氨基(+12 Da)和C端精氨酸或赖氨酸的侧链(+12 Da)的贡献。此外,还观察到有一个漏切位点的肽段生成了+36 Da的产物。本研究结果表明,在实验条件下,低浓度甲醛主要与肽段和蛋白的N端氨基,以及精氨酸和赖氨酸侧链发生反应。本研究为分析低浓度甲醛与蛋白质的反应产物提供了有效的质谱分析方法和解谱依据。

关键词：甲醛多肽基质蛋白化学修饰质谱

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阿奇霉素对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

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中国药科大学学报 2012年第6期43卷 553-559页

作者：邢明勋贾生美袁鹏史祺云程威金琨琪于录吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室长春130062

金黄色葡萄球菌(***)是感染性疾病常见病原体之一,具有较高的发病率和病死率。采用微量稀释法测定阿奇霉素对***悬浮菌和生物被膜的抗菌活性,并通过生物被膜形成实验、溶血素检测、Western blot分析和荧光定量PCR实验考察了阿奇霉素对**... 详细信息

金黄色葡萄球菌(***)是感染性疾病常见病原体之一,具有较高的发病率和病死率。采用微量稀释法测定阿奇霉素对***悬浮菌和生物被膜的抗菌活性,并通过生物被膜形成实验、溶血素检测、Western blot分析和荧光定量PCR实验考察了阿奇霉素对***生物被膜形成和主要毒力因子分泌的影响。结果表明:阿奇霉素对***悬浮菌和生物被膜具有较好的抗菌活性,并可有效地抑制生物被膜的形成;亚抑菌浓度的阿奇霉素呈剂量依赖式抑制***α-溶血素和肠毒素A的分泌,1/2MIC时其分泌几乎完全受到抑制,这将有助于治疗由***导致的感染。

关键词：金黄色葡萄球菌阿奇霉素生物被膜毒力因子

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A型流感病毒血凝素蛋白S-棕榈酰化修饰的质谱分析

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分析化学 2016年第10期44卷 1521-1527页

作者：王子健高祥杨静波孙万春吴东林彭其胜刘宁吉林大学第二医院吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室吉林省疾病预防与控制中心

蛋白质S-棕榈酰化修饰是指棕榈酸分子通过硫酯键共价结合在蛋白质分子的半胱氨酸（S）的巯基侧链上,是蛋白质脂类修饰的重要形式之一,在细胞信号转导、代谢等过程中起着重要作用。本实验首先利用酰基-生物素置换反应,将A型流感病毒血凝... 详细信息

蛋白质S-棕榈酰化修饰是指棕榈酸分子通过硫酯键共价结合在蛋白质分子的半胱氨酸（S）的巯基侧链上,是蛋白质脂类修饰的重要形式之一,在细胞信号转导、代谢等过程中起着重要作用。本实验首先利用酰基-生物素置换反应,将A型流感病毒血凝素蛋白上的S-棕榈酸分子转换为含有生物素（Biotin）分子的标签。生物素标记蛋白经特异性富集、电泳分离纯化后,进行胶内水解。再利用质谱技术对水解混合物进行分析。结果表明,经酰基-生物素置换方法处理A型流感病毒裂解产物后,蛋白质耦联生物素的浓度（羟胺处理,+Hydroxylamine）与空白对照组（未加羟胺处理,-Hydroxylamine）的比值大于3;对经富集后的流感病毒血凝素蛋白进行了质谱分析,鉴定了A型的两个S-棕榈酰化修饰位点,分别位于蛋白羧基末端的Cys;和Cys;。本研究为大规模研究S-棕榈酰化修饰蛋白提供了一种特异、有效的分析方法。

关键词：流感病毒血凝素蛋白酰基-生物素置换 S-棕榈酰化

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