检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报（医学版） 2008年第1期34卷 32-34页

作者：蒋春晓张馨木张赢予顾国贞颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的:观察rhKD/APP对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)血清炎性因子和胰腺组织超微结构的影响。方法:采用3.5%的牛磺胆酸钠0.1mL·100g-1逆行注入大鼠胰胆管内诱导ANP模型。60只大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(Model组),rhKD/... 详细信息

目的:观察rhKD/APP对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)血清炎性因子和胰腺组织超微结构的影响。方法:采用3.5%的牛磺胆酸钠0.1mL·100g-1逆行注入大鼠胰胆管内诱导ANP模型。60只大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(Model组),rhKD/APP低、中、高剂量组(4×104kU·kg-1、8×104kU·kg-1、16×104kU·kg-1组),阳性药抑肽酶组(Aproitin组),观察ANP大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)变化和胰腺组织超微结构变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α和NO水平明显升高(P<0.001);与模型组比较,rhKD/APP中、高剂量组大鼠血清TNF-α和NO均降低(P<0.05或P<0.01),与阳性药抑肽酶组比较差异无显著性。胰腺组织超微结构显示细胞表面可见较多微绒毛,核仁明显,分泌颗粒增多。结论:rhKD/APP早期给药可显著减轻胰腺炎症反应,对大鼠急性胰腺炎具有治疗作用。

关键词： rhKD/APP 急性胰腺炎大鼠,Wistar 细胞因子

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抑肽酶对大鼠实验性慢性肝损伤的治疗作用

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吉林大学学报（医学版） 2006年第5期32卷 770-773页

作者：张馨木常淑芳张赢予孙波颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的：研究抑肽酶对大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法：Wistar大鼠60只，随机分为6组（每组10只）：第Ⅰ组为正常对照组；第Ⅱ～Ⅵ组采用皮下注射四氯化碳（CCl4）12周建立慢性肝损伤实验动物模型后，进行不同处置，即第Ⅱ组为模型组、... 详细信息

目的：研究抑肽酶对大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法：Wistar大鼠60只，随机分为6组（每组10只）：第Ⅰ组为正常对照组；第Ⅱ～Ⅵ组采用皮下注射四氯化碳（CCl4）12周建立慢性肝损伤实验动物模型后，进行不同处置，即第Ⅱ组为模型组、第Ⅲ组为抑肽酶小剂量（2万kIU·kg^-1）组、第Ⅳ组为抑肽酶中剂量（4万kIU·kg^-1）组、第Ⅴ组为抑肽酶大剂量（8万kIU·kg^-1）组、第Ⅵ组为阳性对照促肝细胞生长素（100mg·kg^-1）组。第8周后第Ⅲ～Ⅵ组分别用抑肽酶和肝细胞生长素每日腹腔注射1次，连续4周后测定各组肝损伤大鼠血清丙氨酸氨基转换酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、唾液酸（SA）活性及肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量，观察光镜下肝组织的病理改变。结果：模型组与正常对照组比较，血清ALT、AST活性和肝组织Hyp显著升高，血清SA、ALB和A／G比值显著降低。抑肽酶各组与模型组比较，血清ALT、AST活性及Hyp含量降低，血清SA、ALB和A／G比值明显增高。肝组织病理切片观察显示，抑肽酶能显著减轻由CCl4所致肝细胞脂肪变性及纤维组织增生。结论：抑肽酶对大鼠慢性肝损伤具有明显的治疗作用。

关键词：抑肽酶四氯化碳肝疾病肝再生

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BMP7基因克隆及其在兔关节软骨细胞中的表达

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吉林大学学报（医学版） 2006年第5期32卷 750-754,F0002页

作者：曲福军戚良晨侯宜侯立中吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林大学中日联谊医院胸外科吉林长春130033

目的:克隆骨形态发生蛋白BMP7基因并检测其在体外培养的兔关节软骨细胞中的表达。方法:从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中提取总RNA;按GenBankBMP7基因序列化学合成2条引物,采用RT-PCR方法得到BMP7基因;将BMP7基因片段插入到真核表达载... 详细信息

目的:克隆骨形态发生蛋白BMP7基因并检测其在体外培养的兔关节软骨细胞中的表达。方法:从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中提取总RNA;按GenBankBMP7基因序列化学合成2条引物,采用RT-PCR方法得到BMP7基因;将BMP7基因片段插入到真核表达载体pcDNA3·1中,构建pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒;利用双酶切、PCR及核苷酸序列分析鉴定BMP7目的基因;将重组pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒转染家兔关节软骨细胞,分别采用原位杂交、PCR、Westernblotting法测定BMP-7表达。结果:克隆得到的BMP7基因核苷酸序列长约1300bp,构建的重组pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒目的基因BMP-7序列与GenBank报道的BMP-7基因(No·BC008584)一致,转染了BMP7基因的体外培养的成年家兔膝关节软骨细胞表达了BMP7蛋白。结论:成功构建表达BMP7蛋白的转基因关节软骨细胞,其可用于细胞移植治疗或作为种子细胞构建组织工程软骨修复关节软骨缺损。

关键词：骨形态发生蛋白质类软骨细胞遗传载体

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白蛋白信号肽引导天然N-端的rBPTI在毕赤酵母中高效分泌表达

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吉林大学学报（医学版） 2007年第1期33卷 17-20页

作者：杨莉莉贺巾超董文范伟全凡炼炼潘秦牟旭鹏颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室天津市红桥医院骨科天津300130

目的:探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI。方法:将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti,电击转化毕赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛... 详细信息

目的:探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI。方法:将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti,电击转化毕赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛选阳性转化菌。结果:转染pPICZ/hsasp-bpti的毕赤酵母X-33工程菌能够高效地分泌表达rBPTI;培养上清中rBPTI含量约200 mg.L-1;SDS-PAGE和质谱分析结果显示rBPTI相对分子质量分别为6 500和6 508;rBPTI的N-端测序结果表明其N-端15个氨基酸序列与天然BPTI完全一致;胰蛋白酶活性抑制分析结果表明,抑制常数Ki=(2.6±0.1)×10-9,与天然BPTI一致。结论:hsasp能够在毕赤酵母中高效地引导分泌表达天然N-端氨基酸序列的rBPTI,其表达量达200 mg.L-1。

关键词：牛胰蛋白酶抑制剂白蛋白信号肽毕赤酵母

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大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素

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吉林大学学报（医学版） 2004年第6期30卷 885-887页

作者：杨春伟周余来侯立中杨同书颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的 :探讨大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素。方法 :将传代培养的第 2代大鼠角朊细胞 (KCs) ,以含有新生牛血清的 DMEM- F12培养基进行无滋养层法培养 ,当细胞培养至对数生长期时 ,分别改用含有不同浓度表皮生长因子 (EGF)、肝细胞生长... 详细信息

目的 :探讨大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素。方法 :将传代培养的第 2代大鼠角朊细胞 (KCs) ,以含有新生牛血清的 DMEM- F12培养基进行无滋养层法培养 ,当细胞培养至对数生长期时 ,分别改用含有不同浓度表皮生长因子 (EGF)、肝细胞生长因子 (HGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF)、霍乱毒素 (CT)、氢化可的松(HVB)、胰岛素 (Insulin)、三碘甲腺原氨酸 (T3)的培养液继续培养 ,以 MTT法测定细胞增殖活性。结果 :在一定浓度范围内 ,EGF (5～ 2 5 μg· L- 1 )、 HGF (0 .1～ 10 μg· L- 1 )、 FGF (0 .0 5～ 2 .0 μg· L- 1 )、 CT (2～10μg· L- 1 )、 HVB (0 .1～ 0 .8mg· L- 1 )、 Insulin (0 .5～ 6 .0 m g· L- 1 )及 T3(0 .1～ 2 .0μg· L- 1 )对 KCs的增殖均具有不同程度的促进作用。结论 :采用无滋养层法培养大鼠表皮角朊细胞时 ,在培养液中加入一定浓度的EGF、 HGF、 FGF、 CT、 HVB、 Insulin及 T3是必要的。

关键词：角蛋白细胞细胞分裂细胞培养生物因子

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抗CD_3单克隆抗体激活杀伤细胞高效扩增培养体系的建立及细胞毒活性检测

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吉林大学学报（医学版） 2007年第2期33卷 265-268页

作者：张赢予张馨木王建秋张磊焦平王丁丁王文加马杰颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的：建立从20mL外周血中高效扩增抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞（CD3AK）的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。方法：采用抗CD3单克隆抗体（Anti-CD3mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2（rIL-2）的协同活化... 详细信息

目的：建立从20mL外周血中高效扩增抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞（CD3AK）的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。方法：采用抗CD3单克隆抗体（Anti-CD3mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2（rIL-2）的协同活化下,获得CD3AK。对CD3AK进行长期体外培养,进行增殖动力学、免疫表型和体外抗肿瘤活性的分析。结果：在培养第7-22天,CD3AK增殖倍数明显提高,最高可达317倍;免疫表型分析显示,CD3^＋细胞从活化前的51.9%增加至94.6%,CD4^＋细胞从19.5%增加至51.1%,CD8^＋细胞从22.1%增加至52.1%;效靶比20∶1组和40∶1组的杀伤肿瘤细胞活性明显高于10∶1组（P〈0.05和P〈0.01）;在7-19 d的培养天数之内,杀伤肿瘤细胞活性最强。结论：从外周血中高效扩增的CD3AK是以CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋细胞为主的异质性细胞群,在体外有明显的杀伤肿瘤细胞活性。

关键词：杀伤细胞淋巴因子激活细胞培养抗肿瘤活性

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应用几丁质胶原网架构建组织工程软骨

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吉林大学学报（医学版） 2004年第5期30卷 697-699页

作者：池光范侯宜周余来侯立中颜炜群杨同书吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的 :探索利用几丁质胶原网架构建组织工程人工软骨的方法。方法 :取 2周龄的新生兔关节软骨 ,经消化、传代培养后 ,将获得的软骨细胞与牛型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合 ,将几丁质纤维网架浸入上述混合物中制成... 详细信息

目的 :探索利用几丁质胶原网架构建组织工程人工软骨的方法。方法 :取 2周龄的新生兔关节软骨 ,经消化、传代培养后 ,将获得的软骨细胞与牛型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合 ,将几丁质纤维网架浸入上述混合物中制成人工软骨培养物并在体外培养。将培养 1周的组织工程培养物 ,植入同种异体动物皮下组织培养 4周 ,观察组织工程软骨的形成情况。结果 :细胞在几丁质网架培养物中分布均匀 ,细胞多呈三角形或梭形 ,培养物体积收缩不明显 ,经体内培养存活的软骨细胞分泌型胶原 ,有血管和炎性细胞的侵入。结论 :用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合凝胶与几丁质纤维网架载体为支架植入软骨细胞以后 ,在体外和体内都可以培养构建出较大的组织工程软骨。

关键词：组织工程软骨细胞胶原纤维蛋白几丁质

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rhKD/APP对急性肝损伤小鼠的保护作用

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吉林大学学报（医学版） 2007年第1期33卷 51-53,F0002页

作者：张馨木贺巾超杨莉莉张赢予董文侯立中颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021 天津市红桥医院骨科天津300130

目的:观察rhKD/APP对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:采用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,取小鼠60只随机分为6组(每组10只),分别设为空白对照组、模型组、阳性药对照组及rhKD/APP小中大剂量(4.5、9.0... 详细信息

目的:观察rhKD/APP对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:采用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,取小鼠60只随机分为6组(每组10只),分别设为空白对照组、模型组、阳性药对照组及rhKD/APP小中大剂量(4.5、9.0、18.0 ***-1)组。测定实验小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织丙二醛(MDA)、肝重系数并观察肝脏组织病理学变化。结果:rhKD/APP小、中、大剂量组血清ALT、AST活性和肝组织中MDA低于模型组(P<0.05或P<0.01);肝脏组织病理切片显示,模型组有炎细胞浸润,肝细胞坏死,与模型组相比,rhKD/APP小、中、大剂量组肝组织损伤程度较轻,且随着rhKD/APP剂量增加肝组织损伤程度逐渐减轻。结论:rhKD/APP对CCl4所致急性肝损伤小鼠具有明显的保护作用。

关键词： rhKD/APP 蛋白酶抑制药肝/损伤急性病四氯化碳

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rhKPI/AβPP大规模发酵及纯化工艺

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吉林大学学报（医学版） 2006年第2期32卷 278-281页

作者：贺巾超杨莉莉马杰颜波群韩树海侯立中颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021 吉林大学第四医院消化内科吉林长春130011

目的：在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达AβPP中的Kunitz型蛋白酶抑制剂的结构域（KPI／AβPP），利用80L的发酵罐优化发酵条件，制备rhKPI／AβSPP。方法：克隆kpi基因插入到pPICZα，构建真核表达载体pPICZμ-kpi，经核酸测... 详细信息

目的：在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达AβPP中的Kunitz型蛋白酶抑制剂的结构域（KPI／AβPP），利用80L的发酵罐优化发酵条件，制备rhKPI／AβSPP。方法：克隆kpi基因插入到pPICZα，构建真核表达载体pPICZμ-kpi，经核酸测序确证后，电转化毕赤酵母菌株X-33，筛选高表达rhKPI／AβPP工程菌。结果：筛选出的高表达工程菌采用80L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵，在pH3．3、纯氧浓度22％～30％、罐内压力为12psi、甲醇诱导60h时产量1．0g·L^-1。纯化的rhKPI／AβPP经SDS-PAGE分析显示单一区带，相对分子质量6750。质谱测定其相对分子质量为6750，抑制胰蛋白酶的比活性为8．4EPU·mg^-1。结论：克隆、构建、筛选出高效表达rhKPI／AβPP的毕赤酵母工程菌，并建立了稳定的发酵和纯化工艺。

关键词： rhKPI/AβPP 毕赤酵母发酵

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大鼠角朊细胞的无滋养层培养

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吉林大学学报（医学版） 2003年第6期29卷 765-767,770页

作者：周余来周宏侯立中颜炜群杨同书赵轶卓吉林大学再生医学科学研究所生物化学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院生物化学教研室

目的 :探索一种新的表皮角朊细胞 (角蛋白细胞 ,KCs)的培养方法。方法 :应用含有新生牛血清并附加多种调节因子的 DMEM- F1 2培养基 ,对大鼠表皮 KCs进行无滋养层法培养。结果 :大部分 KCs在接种后 36h贴壁 ,并有集落形成。培养至第 9... 详细信息

目的 :探索一种新的表皮角朊细胞 (角蛋白细胞 ,KCs)的培养方法。方法 :应用含有新生牛血清并附加多种调节因子的 DMEM- F1 2培养基 ,对大鼠表皮 KCs进行无滋养层法培养。结果 :大部分 KCs在接种后 36h贴壁 ,并有集落形成。培养至第 9天 ,细胞接近铺满单层。结论 :采用无滋养层法培养大鼠 KCs不仅可行 ,而且具有细胞成活率高、避免滋养层细胞影响等优点。

关键词：角蛋白细胞细胞培养无滋养层培养表皮角朊细胞大鼠皮肤病

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