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中国兽医学报 2025年

作者：柳永赛宋雨濛白玉洁黄培李媛媛张海丽王化磊吉林大学动物医学学院/人畜共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人畜共患病研究教育部重点实验室

通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9)基因编辑技术构建莫洛尼白血病病毒10(Moloney leukemia virus 10,MOV10)基因敲除(MOV10 gene knockout,MKO)小鼠神经瘤母细胞(neuro 2a,N2a)细胞系。首先,构建表达MOV10基因特异性向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的重组质粒pMD18T-U6-sgRNA,随后将pMD18T-U6-sgRNA与pMJ920-Cas9-eGFP共转染至N2a,通过流式细胞术筛选获得单克隆细胞株,并在分子水平进行MOV10敲除试验验证。结果显示,MKO N2a细胞系具有正常的细胞活性和细胞增殖能力;使用弹状病毒科经典病毒狂犬病病毒(rabies virus,RABV)和水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对MKO N2a细胞系进行感染试验,结果显示弹状病毒科病毒在MKO N2a细胞系中复制水平显著增强。结果表明,本研究成功构建了1株MKO N2a细胞系,为MOV10生物学功能和抗病毒机制的探究以及为以RABV/VSV为载体的重组病毒载体疫苗的研发提供了前期基础。

关键词：莫洛尼白血病病毒10 CPISPR/Cas9 基因敲除N2a细胞系弹状病毒科

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表达猫杯状病毒VP1蛋白的重组猫疱疹病毒的构建与鉴定

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中国兽医学报 2025年

作者：艾丽思焦翠翠金宏丽黄培张海丽李媛媛王化磊吉林大学动物医学学院/人畜共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人畜共患病研究教育部重点实验室长春西诺生物科技有限公司

以猫疱疹病毒Ⅰ型（feline herpesvirus 1,FHV-1）为载体,采用CRISPR/Cas9技术和同源重组技术将FHV-1的gI和gE基因替换为猫杯状病毒（feline calicivirus,FCV） VP1基因和红色荧光蛋白（mCherry）基因,拯救获得重组病毒FHVΔgI&gE/V... 详细信息

以猫疱疹病毒Ⅰ型（feline herpesvirus 1,FHV-1）为载体,采用CRISPR/Cas9技术和同源重组技术将FHV-1的gI和gE基因替换为猫杯状病毒（feline calicivirus,FCV） VP1基因和红色荧光蛋白（mCherry）基因,拯救获得重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry+,经空斑纯化重组病毒;利用间接免疫荧光试验、空斑形态学分析及PCR鉴定分析重组病毒的生物学特性和遗传稳定性。间接免疫荧光鉴定结果显示,重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry+能够在F81细胞中表达VP1蛋白,且重组病毒的生长特性与亲本病毒FHV-1无明显差异;空斑形态观察及染色结果显示,重组病毒形成的空斑面积小于亲本病毒,表明缺失gI、gE基因后重组病毒在细胞间扩散能力降低;PCR鉴定结果显示,重组病毒连续传代15代仍能检测到VP1基因,表明重组病毒具有良好的遗传稳定性。结果表明,成功构建了表达FCV VP1蛋白的重组猫疱疹病毒,为FCV、FHV-1二联基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猫杯状病毒猫疱疹病毒Ⅰ型猫杯状病毒VP1蛋白重组猫疱疹病毒生物学特性

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人工感染狂犬病病毒街毒在犬和小鼠唾液腺中的分布

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中国兽医学报 2025年

作者：王重阳张丹玮张艳楠刘宇平果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

引发狂犬病的狂犬病病毒（RABV）主要侵袭外周及中枢神经系统，感染后期会在唾液腺中分布，并通过唾液传播给其他易感动物。为研究RABV街毒在3对唾液腺组织中的分布情况，用RABV街毒株PB4通过后肢肌肉接种21日龄的雌鼠，在小鼠濒死期分... 详细信息

引发狂犬病的狂犬病病毒（RABV）主要侵袭外周及中枢神经系统，感染后期会在唾液腺中分布，并通过唾液传播给其他易感动物。为研究RABV街毒在3对唾液腺组织中的分布情况，用RABV街毒株PB4通过后肢肌肉接种21日龄的雌鼠，在小鼠濒死期分别采集舌下腺、颌下腺和腮腺，测定小鼠3种腺体中RABV的TCID50效价、RABV N基因的拷贝数，并通过免疫荧光观察RABV在不同唾液腺中的分布。结果显示，PB4在小鼠3种唾液腺中均有分布，其中腮腺的分布量最多，其次为颌下腺，舌下腺病毒分布量最低。将PB4通过脑部接种3月龄犬，接种后每12 h进行1次唾液采集，通过对不同时间点采集的唾液进行TCID50和荧光定量PCR检测，并在犬发病濒死期采集3对唾液腺。通过TCID50效价测定、荧光定量PCR以及免疫荧光检测，发现PB4在犬3种不同唾液腺中的分布情况为：腮腺的分布量最多，舌下腺的分布量最低。本研究通过PB4对小鼠与犬的感染试验，均发现腮腺是3种唾液腺中RABV街毒含量最高的唾液腺，这一结论为解析临床狂犬病犬中RABV在唾液腺中的分布及唾液的间歇性分泌提供了试验数据。

关键词：狂犬病病毒街毒舌下腺颌下腺腮腺 PB4

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miR-146a壳聚糖纳米粒的制备及其对LPS诱导的急性肝细胞损伤的保护作用

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中国兽医学报 2025年

作者：王赛宁白慧芳江宁党倩倩尹凤英孙琳王学林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学化学学院

本研究旨在探讨壳聚糖负载miR-146a纳米颗粒的性能及其在LPS诱导的体外急性肝损伤中的保护作用。用离子交联法制备了半乳糖化精氨酸壳聚糖(GCA)纳米颗粒,并进一步制备了不同质量比的GCA-miR-146a纳米颗粒。通过凝胶阻滞试验分析GCA纳米... 详细信息

本研究旨在探讨壳聚糖负载miR-146a纳米颗粒的性能及其在LPS诱导的体外急性肝损伤中的保护作用。用离子交联法制备了半乳糖化精氨酸壳聚糖(GCA)纳米颗粒,并进一步制备了不同质量比的GCA-miR-146a纳米颗粒。通过凝胶阻滞试验分析GCA纳米颗粒对miR-146a的结合效率。使用透射电子显微镜和纳米粒径测量仪对其粒径、形态和电位进行分析。利用CCK-8法检测GCA纳米颗粒对HepG2细胞的细胞毒性。通过荧光显微镜观察细胞对纳米颗粒的摄取,并筛选出最佳比例以进行后续研究。实时荧光定量PCR评估miR-146a在脂多糖(LPS)诱导的体外急性肝损伤中的保护效果。当GCA-miR-146a的质量比为5:1时,获得的纳米颗粒形态均一,粒径约为100 nm,表面电荷为1.15 mV,包封率和载药量分别为97.11%和20.08%。结果表明,GCA-miR-146a纳米颗粒对HepG2细胞无细胞毒性,且具有较高的转染效率。体外试验结果显示,GCA-miR-146a纳米颗粒能够显著提高HepG2细胞中miR-146a的表达,同时显著抑制IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。本研究制备的GCA纳米颗粒对miR-146a具有高负载能力,能够有效保护LPS诱导的HepG2急性肝细胞损伤。

关键词：壳聚糖半乳糖精氨酸 miR-146a 急性肝细胞损伤

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基于CBD功能磁珠富集与RPA-量子点荧光试纸条的单增李斯特菌检测方法

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吉林农业大学学报 2025年

作者：李浩菘李岩松曾德新王菡上官春逸任洪林胡盼柳增善卢士英吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室合肥海关技术中心

针对食品中食源性致病菌检测样品基质复杂，检测方法灵敏度受限，痕量样品易漏检，传统检测耗时长及设备依赖性的问题，本研究旨在建立一种功能化磁珠靶向富集结合核酸快速等温扩增的试纸条现场检测技术。选取可特异性识别单增李斯特菌... 详细信息

针对食品中食源性致病菌检测样品基质复杂，检测方法灵敏度受限，痕量样品易漏检，传统检测耗时长及设备依赖性的问题，本研究旨在建立一种功能化磁珠靶向富集结合核酸快速等温扩增的试纸条现场检测技术。选取可特异性识别单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）1/2群和4群血清型的噬菌体Ply118和Ply500内溶素细胞壁结合结构域（cellwalls binding domains，CBD），生信分析将截短优化的CBD118，CBD500基因序列进行融合表达具备优良靶菌结合活性的重组蛋白CBD118-500，碳二亚胺法偶联构建靶向富集功能磁珠，实现对多种常见血清型单增李斯特菌的富集，且富集效率可高达86.58%；结合重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification，RPA）与量子点免疫层析技术，开发RPA-量子点荧光试纸条检测方法，1.5 h内实现从细菌富集到结果判读，富集处理后在加标肉样中实现9.1×100CFU/mL的检出，较富集前检测限降低了约两个数量级。针对16份市售肉类食品样本的检出率与正确率与PCR结果一致。该CBD富集-RPA-量子点试纸条体系兼具快速、灵敏和高特异性优势，为复杂基质痕量样品中食源性李斯特菌的现场监测提供了创新解决方案。

关键词：单增李斯特菌噬菌体CBD蛋白重组酶聚合酶扩增(RPA) 量子点荧光试纸条

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旋毛虫TsNas36蛋白的表达和生物学特性分析

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中国兽医学报 2025年

作者：司光泉宋军澎吕庆博白雪王洋刘晓雷张藜潇吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室青岛普瑞森医药科技有限公司

旋毛虫Nas-36（TsNas36）是一种在旋毛虫排泄分泌产物（excretory secretory products，ESP）中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因，鉴定其生物学特性和时空表达特征，为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论... 详细信息

旋毛虫Nas-36（TsNas36）是一种在旋毛虫排泄分泌产物（excretory secretory products，ESP）中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因，鉴定其生物学特性和时空表达特征，为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论和材料基础。生物信息学分析显示，TsNas36全长470 AA，分子量约为54.69 kDa，无跨膜区，有1个信号肽（1-20 AA），1个虾红素蛋白酶（Astacin）结构域（116-320 AA）和1个CUB结构域（355-470 AA），有5个活性位点残基分别位于216（His），217（Glu），220（His），226（His）和275（Tyr）位氨基酸。通过构建重组表达质粒pET-28a（+）/TsNas36，并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，获得重组蛋白rTsNas36。使用纯化后的重组蛋白免疫家兔获得抗rTsNas36多克隆抗体血清，间接ELISA结果显示其抗体效价达到1：105。qRT-PCR和Western-blot结果显示，TsNas36在新生幼虫（NBL）时期的转录水平显著高于成虫和肌幼虫时期。免疫荧光结果表明，TsNas36仅定位于新生幼虫虫体表皮。综上，本研究表征了TsNas36基因的生物学特征，并发现该基因的表达具有高度的时期特异性，可能参与新生幼虫的发育进程。

关键词：旋毛虫虾红素蛋白酶锌金属蛋白酶 TsNas36蛋白原核表达免疫荧光

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自噬与蛋白酶体途径在布鲁菌感染巨噬细胞过程中的相互作用

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 507-513页

作者：董炳梅梁萌萌许文雅王君宋立立任洪林沧州师范学院生命科学学院河北沧州061001 吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为了探明巨噬细胞(macrophage,M_(φ))感染布鲁菌(Brucella)后泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)在对抗Brucella过程中的相互作用关系,一方面将猪种布鲁菌(Brucella suis,***)分别体外感染M_(φ)和腹腔接种BALB/c小鼠,并对细胞上清液和腹腔液中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行了测定,结果显示***感染过程中UPS首先被激活,随后ALP途径发挥作用;另一方面,应用3-MA、乳胞素分别制备ALP抑制态M_(φ)与UPS抑制态M_(φ)并接种***,随后对细胞上清中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行测定,结果显示当M_(φ)UPS功能被抑制时,ALP作用被显著提高;而ALP功能被抑制时,UPS活性未有显著变化。最后,将不同状态M_(φ)接种***后,对***的胞内增殖能力进行测定,结果显示当UPS与ALP功能被同时抑制时,***的胞内增殖能力显著降低,且UPS对***胞内增殖的促进作用强于ALP。结果表明,Brucella感染M_(φ)过程中UPS与ALP存在相互作用关系,在理论上可为Brucella与宿主细胞相互作用机制的研究提供新思路。

关键词：自体吞噬泛素蛋白酶体途径布鲁菌巨噬细胞

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鼻疽诊断与防治技术研究进展

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 644-650页

作者：胡晓祥熊秋婷刘倩刘明远方仁东西南大学动物医学院重庆北碚400715 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工... 详细信息

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工作人员中也有病例报告。世界动物卫生组织(WOAH)一直在努力进行全球性的鼻疽根除工作,通过全面监测、扑杀受感染动物和采取严格进口措施,该病在北美、澳大利亚和欧洲大部分地区已被根除。然而,随着牲畜的全球性流动,导致世界其他地区的病例增加,非洲、亚洲、中东和南美洲仍然存在区域性流行。近些年来在中东和亚洲暴发的鼻疽疫情为鼻疽重新传入无疫病地区创造了可能。因此,鼻疽被归类为一种重新出现的疾病,再次威胁人类和动物健康。

关键词：鼻疽诊断检测疫苗综合防治

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梅花鹿源奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性

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微生物学通报 2025年第5期52卷 2230-2243页

作者：曹润来王奇林孙春庆薛竹青刘子瑜胡盼王晓旭刘志杰中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室临沂市畜牧发展促进中心吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究所教育部重点实验室

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理... 详细信息

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理特征。【方法】收集腹泻病空肠内容物，通过细菌分离培养、革兰氏染色、显微镜镜检、16SrRNA基因及atpD基因测序和进化树分析等方法鉴定细菌种类。采集腹泻鹿的空肠、肺、肝、脾、肾和心等组织样品制作病理切片。通过检测毒力基因、生物膜形成能力、耐药性与耐药基因，以及部分菌株的小鼠致病性分析该菌的生物学特性。【结果】共鉴定出3株奇异变形杆菌，分别命名为SKPM1、SKPM2、SKPM3。3株菌均携带ureC、zapA、atfC、atfA、rsbA、ucaA和pmfA等7种毒力基因，具有生物膜形成能力；3株菌对青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、四环素、多黏菌素B等抗生素表现出多重耐药性，并检测出bla TEM、bla CTX-M、tetB、ant（3″）-I、sul2等耐药基因；致病性上菌株SKPM2的LD50为3.98×10～7 CFU/mL。【结论】本研究分离鉴定了3株梅花鹿源奇异变形杆菌，并研究了其生物学特性，为该菌引起的仔鹿腹泻病的防治和深入研究提供了实验基础。

关键词：梅花鹿仔鹿腹泻奇异变形杆菌生物学特性

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应用免疫沉淀-质谱联用技术筛选细粒棘球绦虫抗体识别分子

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 519-526页

作者：吴小霞丁静金雪敏张壮志张藜潇刘明远吉林大学动物医学学院/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 新疆畜牧科学院兽医研究所/国家动物包虫病参考实验室新疆乌鲁木齐830010

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线... 详细信息

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线预测软件对肽段覆盖率最高的蛋白进行生物信息学分析。结果显示,IP-MS鉴定得到133种细粒棘球绦虫相关蛋白,其中肽段覆盖率≥70%的有1种蛋白,为肌动蛋白;肽段覆盖率为30%~40%的有3种蛋白,分别为含Ton B结构域蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物2、乳酸脱氢酶;肽段覆盖率为20%~30%的有6种蛋白,分别为剪接因子3b亚基5、肿瘤蛋白D52、表达的保守蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物7、肌苷-5′-单磷酸脱氢酶和醛酮还原酶家族1成员B4。生物信息学分析显示,肌动蛋白无信号肽,可能为非分泌型蛋白,亚细胞定位在细胞骨架,存在6个最佳潜在抗原表位,二级结构和三级结构一致以α螺旋和无规则卷曲为主。结果表明,免疫沉淀-质普联用技术是筛选和鉴定细粒棘球绦虫抗原的一种高通量、简便、快速有效的方法,可为筛选中间宿主羊血清诊断标识的特异分子及包虫病新型诊断技术的研发提供依据。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫免疫沉淀-质谱联用技术抗体识别分子生物信息学分析

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