检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2025年

作者：王重阳张丹玮张艳楠刘宇平果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

引发狂犬病的狂犬病病毒（RABV）主要侵袭外周及中枢神经系统，感染后期会在唾液腺中分布，并通过唾液传播给其他易感动物。为研究RABV街毒在3对唾液腺组织中的分布情况，用RABV街毒株PB4通过后肢肌肉接种21日龄的雌鼠，在小鼠濒死期分... 详细信息

引发狂犬病的狂犬病病毒（RABV）主要侵袭外周及中枢神经系统，感染后期会在唾液腺中分布，并通过唾液传播给其他易感动物。为研究RABV街毒在3对唾液腺组织中的分布情况，用RABV街毒株PB4通过后肢肌肉接种21日龄的雌鼠，在小鼠濒死期分别采集舌下腺、颌下腺和腮腺，测定小鼠3种腺体中RABV的TCID50效价、RABV N基因的拷贝数，并通过免疫荧光观察RABV在不同唾液腺中的分布。结果显示，PB4在小鼠3种唾液腺中均有分布，其中腮腺的分布量最多，其次为颌下腺，舌下腺病毒分布量最低。将PB4通过脑部接种3月龄犬，接种后每12 h进行1次唾液采集，通过对不同时间点采集的唾液进行TCID50和荧光定量PCR检测，并在犬发病濒死期采集3对唾液腺。通过TCID50效价测定、荧光定量PCR以及免疫荧光检测，发现PB4在犬3种不同唾液腺中的分布情况为：腮腺的分布量最多，舌下腺的分布量最低。本研究通过PB4对小鼠与犬的感染试验，均发现腮腺是3种唾液腺中RABV街毒含量最高的唾液腺，这一结论为解析临床狂犬病犬中RABV在唾液腺中的分布及唾液的间歇性分泌提供了试验数据。

关键词：狂犬病病毒街毒舌下腺颌下腺腮腺 PB4

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斯氏艾美耳球虫ASP重组腺相关病毒的制备及体外活性检测

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中国兽医学报 2025年

作者：李亚欢李超凡陈梦阁李新王晓岑张旭宫鹏涛张楠李建华吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室

制备可表达斯氏艾美耳球虫天冬氨酸蛋白酶的重组腺相关病毒（rAAV9-ZsGreen1-EsASP），并探究其体外活性。通过PCR扩增EsASP基因，利用同源重组法将重组腺相关病毒载体pAAV-IRES-ZsGreen1与EsASP基因相结合，构建pAAV-ZsGreen1-EsASP表... 详细信息

制备可表达斯氏艾美耳球虫天冬氨酸蛋白酶的重组腺相关病毒（rAAV9-ZsGreen1-EsASP），并探究其体外活性。通过PCR扩增EsASP基因，利用同源重组法将重组腺相关病毒载体pAAV-IRES-ZsGreen1与EsASP基因相结合，构建pAAV-ZsGreen1-EsASP表达质粒；采用脂质体转染法将pAAV-ZsGreen1-EsASP表达质粒、pHelper和pAAV-RC9质粒共转染至HEK-293T细胞中，包装并生产出能够表达EsASP蛋白的重组腺相关病毒rAAV9-ZsGreen1-EsASP；利用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提法纯化rAAV9-ZsGreen1-EsASP，通过银染法鉴定病毒纯度，TEM观察病毒形态，qPCR法检测病毒滴度；进一步将纯化的重组病毒感染HEK-293T细胞，通过观察绿色荧光蛋白ZsGreen1和Western blot法检测EsASP的表达情况。结果显示双酶切及DNA测序证明EsASP基因已成功构建到pAAV-IRES-ZsGreen1表达质粒中，HEK-293T细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功，细胞蛋白制样Western blot结果显示EsASP蛋白成功表达；纯化的重组病毒衣壳蛋白呈现3条清晰条带（VP1～3）；rAAV9-ZsGreen1-EsASP大小均一，20 nm左右且滴度高于1.0×1012VG/mL；重组病毒感染HEK-293T细胞后观察到绿色荧光蛋白表达，Western blot检测到EsASP的表达。结果表明成功获得了较高纯度且具有体外感染活性的rAAV9-ZsGreen1-EsASP，为研制新型斯氏艾美耳球虫病疫苗提供物质基础。

关键词：斯氏艾美耳球虫 ASP 重组腺相关病毒

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miR-146a壳聚糖纳米粒的制备及其对LPS诱导的急性肝细胞损伤的保护作用

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中国兽医学报 2025年

作者：王赛宁白慧芳江宁党倩倩尹凤英孙琳王学林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学化学学院

本研究旨在探讨壳聚糖负载miR-146a纳米颗粒的性能及其在LPS诱导的体外急性肝损伤中的保护作用。用离子交联法制备了半乳糖化精氨酸壳聚糖(GCA)纳米颗粒,并进一步制备了不同质量比的GCA-miR-146a纳米颗粒。通过凝胶阻滞试验分析GCA纳米... 详细信息

本研究旨在探讨壳聚糖负载miR-146a纳米颗粒的性能及其在LPS诱导的体外急性肝损伤中的保护作用。用离子交联法制备了半乳糖化精氨酸壳聚糖(GCA)纳米颗粒,并进一步制备了不同质量比的GCA-miR-146a纳米颗粒。通过凝胶阻滞试验分析GCA纳米颗粒对miR-146a的结合效率。使用透射电子显微镜和纳米粒径测量仪对其粒径、形态和电位进行分析。利用CCK-8法检测GCA纳米颗粒对HepG2细胞的细胞毒性。通过荧光显微镜观察细胞对纳米颗粒的摄取,并筛选出最佳比例以进行后续研究。实时荧光定量PCR评估miR-146a在脂多糖(LPS)诱导的体外急性肝损伤中的保护效果。当GCA-miR-146a的质量比为5:1时,获得的纳米颗粒形态均一,粒径约为100 nm,表面电荷为1.15 mV,包封率和载药量分别为97.11%和20.08%。结果表明,GCA-miR-146a纳米颗粒对HepG2细胞无细胞毒性,且具有较高的转染效率。体外试验结果显示,GCA-miR-146a纳米颗粒能够显著提高HepG2细胞中miR-146a的表达,同时显著抑制IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。本研究制备的GCA纳米颗粒对miR-146a具有高负载能力,能够有效保护LPS诱导的HepG2急性肝细胞损伤。

关键词：壳聚糖半乳糖精氨酸 miR-146a 急性肝细胞损伤

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青霉噻唑酸对雄性小鼠生殖功能的毒性作用

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吉林农业大学学报 2024年

作者：胡瑞雪郭健柳增善赵柯胡盼卢士英李岩松任洪林王洋人兽共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林大学动物医学学院

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先... 详细信息

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先前研究表明，青霉噻唑酸对雄性生殖系统具有损伤作用，但其潜在机制尚不明确。为了探究青霉噻唑酸的毒性表现及作用机制，使用C57BL/6 雄性小鼠构建了急性毒性体内模型，评估了组织病理学、精子质量和骨髓微核率。结果表明：青霉噻唑酸导致了睾丸组织曲精小管排列疏松，细胞间隙变宽，精子数量、存活率以及骨髓微核率显著降低，同时精子畸形率明显增加，证实了其具有生殖毒性作用。使用正常小鼠睾丸Sertoli细胞（TM4细胞）构建了体外模型，利用转录组测序分析了青霉噻唑酸处理后引起的差异基因和信号通路的表达变化，同时通过ELISA检测炎症因子，发现细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β明显升高。综上，青霉噻唑酸能够导致雄性生殖障碍，其作用机制可能与调控炎症反应的信号通路相关。

关键词：青霉噻唑酸雄性生殖系统急性毒性转录组测序炎症

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基于CBD功能磁珠富集与RPA-量子点荧光试纸条的单增李斯特菌检测方法

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吉林农业大学学报 2025年

作者：李浩菘李岩松曾德新王菡上官春逸任洪林胡盼柳增善卢士英吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室合肥海关技术中心

针对食品中食源性致病菌检测样品基质复杂，检测方法灵敏度受限，痕量样品易漏检，传统检测耗时长及设备依赖性的问题，本研究旨在建立一种功能化磁珠靶向富集结合核酸快速等温扩增的试纸条现场检测技术。选取可特异性识别单增李斯特菌... 详细信息

针对食品中食源性致病菌检测样品基质复杂，检测方法灵敏度受限，痕量样品易漏检，传统检测耗时长及设备依赖性的问题，本研究旨在建立一种功能化磁珠靶向富集结合核酸快速等温扩增的试纸条现场检测技术。选取可特异性识别单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）1/2群和4群血清型的噬菌体Ply118和Ply500内溶素细胞壁结合结构域（cellwalls binding domains，CBD），生信分析将截短优化的CBD118，CBD500基因序列进行融合表达具备优良靶菌结合活性的重组蛋白CBD118-500，碳二亚胺法偶联构建靶向富集功能磁珠，实现对多种常见血清型单增李斯特菌的富集，且富集效率可高达86.58%；结合重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification，RPA）与量子点免疫层析技术，开发RPA-量子点荧光试纸条检测方法，1.5 h内实现从细菌富集到结果判读，富集处理后在加标肉样中实现9.1×100CFU/mL的检出，较富集前检测限降低了约两个数量级。针对16份市售肉类食品样本的检出率与正确率与PCR结果一致。该CBD富集-RPA-量子点试纸条体系兼具快速、灵敏和高特异性优势，为复杂基质痕量样品中食源性李斯特菌的现场监测提供了创新解决方案。

关键词：单增李斯特菌噬菌体CBD蛋白重组酶聚合酶扩增(RPA) 量子点荧光试纸条

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MOV10敲除N2a细胞系的构建及其对弹状病毒科病毒复制的影响

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中国兽医学报 2025年

作者：柳永赛宋雨濛白玉洁黄培李媛媛张海丽王化磊吉林大学动物医学学院/人畜共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人畜共患病研究教育部重点实验室

通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9)基因编辑技术构建莫洛尼白血病病毒10(Moloney leukemia virus 10,MOV10)基因敲除(MOV10 gene knockout,MKO)小鼠神经瘤母细胞(neuro 2a,N2a)细胞系。首先,构建表达MOV10基因特异性向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的重组质粒pMD18T-U6-sgRNA,随后将pMD18T-U6-sgRNA与pMJ920-Cas9-eGFP共转染至N2a,通过流式细胞术筛选获得单克隆细胞株,并在分子水平进行MOV10敲除试验验证。结果显示,MKO N2a细胞系具有正常的细胞活性和细胞增殖能力;使用弹状病毒科经典病毒狂犬病病毒(rabies virus,RABV)和水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对MKO N2a细胞系进行感染试验,结果显示弹状病毒科病毒在MKO N2a细胞系中复制水平显著增强。结果表明,本研究成功构建了1株MKO N2a细胞系,为MOV10生物学功能和抗病毒机制的探究以及为以RABV/VSV为载体的重组病毒载体疫苗的研发提供了前期基础。

关键词：莫洛尼白血病病毒10 CPISPR/Cas9 基因敲除N2a细胞系弹状病毒科

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旋毛虫TsNas36蛋白的表达和生物学特性分析

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中国兽医学报 2025年

作者：司光泉宋军澎吕庆博白雪王洋刘晓雷张藜潇吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室青岛普瑞森医药科技有限公司

旋毛虫Nas-36（TsNas36）是一种在旋毛虫排泄分泌产物（excretory secretory products，ESP）中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因，鉴定其生物学特性和时空表达特征，为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论... 详细信息

旋毛虫Nas-36（TsNas36）是一种在旋毛虫排泄分泌产物（excretory secretory products，ESP）中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因，鉴定其生物学特性和时空表达特征，为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论和材料基础。生物信息学分析显示，TsNas36全长470 AA，分子量约为54.69 kDa，无跨膜区，有1个信号肽（1-20 AA），1个虾红素蛋白酶（Astacin）结构域（116-320 AA）和1个CUB结构域（355-470 AA），有5个活性位点残基分别位于216（His），217（Glu），220（His），226（His）和275（Tyr）位氨基酸。通过构建重组表达质粒pET-28a（+）/TsNas36，并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，获得重组蛋白rTsNas36。使用纯化后的重组蛋白免疫家兔获得抗rTsNas36多克隆抗体血清，间接ELISA结果显示其抗体效价达到1：105。qRT-PCR和Western-blot结果显示，TsNas36在新生幼虫（NBL）时期的转录水平显著高于成虫和肌幼虫时期。免疫荧光结果表明，TsNas36仅定位于新生幼虫虫体表皮。综上，本研究表征了TsNas36基因的生物学特征，并发现该基因的表达具有高度的时期特异性，可能参与新生幼虫的发育进程。

关键词：旋毛虫虾红素蛋白酶锌金属蛋白酶 TsNas36蛋白原核表达免疫荧光

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BALB/c小鼠肠道主要原虫感染情况的分子流行病学调查

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 514-518页

作者：郑瑜张西臣荣尧李建华宫鹏涛王晓岑岳涛涛李新张旭张楠吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室吉林长春130062

分别对国内4家BALB/c小鼠供应商提供的540只BALB/c小鼠进行肠道原虫检测。其中,供应商A 140只,供应商B 130只,供应商C 135只,供应商D 135只。分别采集每只小鼠的新鲜粪便样本以提取基因组,并根据人五毛滴虫(Pentatrichomonas hominis,*... 详细信息

分别对国内4家BALB/c小鼠供应商提供的540只BALB/c小鼠进行肠道原虫检测。其中,供应商A 140只,供应商B 130只,供应商C 135只,供应商D 135只。分别采集每只小鼠的新鲜粪便样本以提取基因组,并根据人五毛滴虫(Pentatrichomonas hominis,***)、泰泽隐孢子虫18S rRNA基因序列引物进行巢氏PCR扩增,利用鼠三毛滴虫(Tritrichomonas muris,***)16S-like rRNA基因序列引物进行PCR扩增并测序,以检测BALB/c小鼠肠道原虫的感染状况。结果显示,供应商A提供的140份小鼠粪便样本中,总肠道原虫感染率为7.1%(10/140),其中,***虫阳性率为7.1%(10/140)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri,***)阳性率为2.1%(3/140)、***阳性率为7.1%(10/140),2种肠道原虫共感染率为7.1%(10只:***+***)、3种肠道原虫共感染率为2.1%(3只:***+***+***)。供应商C提供的135份小鼠粪便样本中,总肠道原虫感染率为7.4%,其中,***阳性率为7.4%(10/135),未检出***和***感染。供应商B提供的130份小鼠粪便样本和供应商D提供的135份小鼠粪便样本中均未检出肠道原虫感染。遗传进化分析结果显示,本研究扩增的*** 16S-like rRNA基因序列与GenBank发表的***的16S-like rRNA基因具有98.52%的同源性(GenBank No:AY886846.1),并且在遗传进化树中聚类为一独立分支;*** 18S rRNA基因序列与GenBank发表的*** 18S rRNA基因具有98.27%的同源性(GenBank ***156964.1),聚为一独立分支;*** 18S rRNA基因序列与GenBank发表的*** 18S rRNA基因同源性为99.87%(GenBank ***000486.1)。综上,本研究对不同实验动物供应商提供的BALB/c小鼠进行肠道寄生虫检测,发现存在不同程度的肠道原虫感染情况,并发现有***、***和***等3种以上寄生虫共感染的现象,从而为今后预防和制定有效的防控策略提供科学依据。

关键词：鼠三毛滴虫人五毛滴虫泰泽隐孢子虫 BALB/c小鼠

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自噬与蛋白酶体途径在布鲁菌感染巨噬细胞过程中的相互作用

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 507-513页

作者：董炳梅梁萌萌许文雅王君宋立立任洪林沧州师范学院生命科学学院河北沧州061001 吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为了探明巨噬细胞(macrophage,M_(φ))感染布鲁菌(Brucella)后泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)在对抗Brucella过程中的相互作用关系,一方面将猪种布鲁菌(Brucella suis,***)分别体外感染M_(φ)和腹腔接种BALB/c小鼠,并对细胞上清液和腹腔液中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行了测定,结果显示***感染过程中UPS首先被激活,随后ALP途径发挥作用;另一方面,应用3-MA、乳胞素分别制备ALP抑制态M_(φ)与UPS抑制态M_(φ)并接种***,随后对细胞上清中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行测定,结果显示当M_(φ)UPS功能被抑制时,ALP作用被显著提高;而ALP功能被抑制时,UPS活性未有显著变化。最后,将不同状态M_(φ)接种***后,对***的胞内增殖能力进行测定,结果显示当UPS与ALP功能被同时抑制时,***的胞内增殖能力显著降低,且UPS对***胞内增殖的促进作用强于ALP。结果表明,Brucella感染M_(φ)过程中UPS与ALP存在相互作用关系,在理论上可为Brucella与宿主细胞相互作用机制的研究提供新思路。

关键词：自体吞噬泛素蛋白酶体途径布鲁菌巨噬细胞

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鼻疽诊断与防治技术研究进展

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 644-650页

作者：胡晓祥熊秋婷刘倩刘明远方仁东西南大学动物医学院重庆北碚400715 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工... 详细信息

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工作人员中也有病例报告。世界动物卫生组织(WOAH)一直在努力进行全球性的鼻疽根除工作,通过全面监测、扑杀受感染动物和采取严格进口措施,该病在北美、澳大利亚和欧洲大部分地区已被根除。然而,随着牲畜的全球性流动,导致世界其他地区的病例增加,非洲、亚洲、中东和南美洲仍然存在区域性流行。近些年来在中东和亚洲暴发的鼻疽疫情为鼻疽重新传入无疫病地区创造了可能。因此,鼻疽被归类为一种重新出现的疾病,再次威胁人类和动物健康。

关键词：鼻疽诊断检测疫苗综合防治

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