检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2023年第2期39卷 589-598页

作者：王绪萌于鑫翟爱霞王燕哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室哈尔滨150081 中山大学附属第八医院深圳518000

DNA甲基转移酶(DNA methylationtransferases,DNMTs)是哺乳动物建立与维持基因甲基化的酶类家族,参与基因表达和调控等生物学过程。其中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3 Alpha,DNMT3A)是机体重要DNMTs之一,DNMT3A突变或异常表达所诱导的基因甲基化引起机体相关因子活性失调进而诱发疾病发生,DNMT3A介导的基因甲基化与人类常见病毒感染所致疾病密切相关。本篇综述从人类常见病毒感染宿主的角度出发,对DNMT3A在促进病毒感染与诱发疾病中的作用进行阐述,为进一步探究以DNMT3A为病毒感染性疾病治疗靶点提供参考和思路。

关键词： DNA甲基转移酶 DNA methyltransferase 3 Alpha(DNMT3A) 人类常见病毒

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巨噬细胞来源外泌体抗肿瘤作用的研究进展

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中国生物制品学杂志 2025年第4期38卷 496-501,507页

作者：杜文雅代禹美(综述) 吴利先(审校) 大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

肿瘤是一种高度异质性的疾病,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)是肿瘤微环境中重要的免疫细胞,具有高度异质性及可塑性,肿瘤复发转移是导致癌症患者发病和死亡的重要原因。巨噬细胞来源的外泌体(macrophage-derived e... 详细信息

肿瘤是一种高度异质性的疾病,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)是肿瘤微环境中重要的免疫细胞,具有高度异质性及可塑性,肿瘤复发转移是导致癌症患者发病和死亡的重要原因。巨噬细胞来源的外泌体(macrophage-derived exosome,MDE)作为细胞间信号传递的信使,携带有母细胞的多种成分。大量研究表明,巨噬细胞的极化状态对肿瘤的进展转归发挥着调控作用,MDE与肿瘤的进展和巨噬细胞极化密切相关。MDE作为一种新的抗肿瘤策略,为肿瘤治疗提供了新的思路。本文对近年来工程化MDE在抗肿瘤方面的研究,以及M1和M2 MDE如何介导肿瘤的发生发展作一综述,以期为肿瘤治疗提供参考。

关键词：肿瘤巨噬细胞外泌体微小RNA

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BCG感染树突状细胞的转录组测序和分析

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中国人兽共患病学报 2022年第12期38卷 1072-1079页

作者：孙巧玲袁欣王玉遵义医科大学基础医学院微生物学教研室遵义563003

目的通过转录组学筛选DC2.4细胞内BCG感染相关的差异表达基因和信号通路,为探索DC细胞抗分枝杆菌的胞内免疫机制提供科学依据。方法以小鼠DC2.4细胞作为细胞模型,设置感染组和未感染组,感染组经BCG(MOI=2)感染,培养24 h后收集细胞,采用... 详细信息

目的通过转录组学筛选DC2.4细胞内BCG感染相关的差异表达基因和信号通路,为探索DC细胞抗分枝杆菌的胞内免疫机制提供科学依据。方法以小鼠DC2.4细胞作为细胞模型,设置感染组和未感染组,感染组经BCG(MOI=2)感染,培养24 h后收集细胞,采用转录组测序技术(RNA-Seq)检测感染组和未感染组mRNA表达谱并结合生物信息学分析方法,筛选树突状细胞内与BCG感染相关的差异表达基因并进行qRT-PCR验证。结果与未感染组相比,感染组差异表达基因共有27个(P<0.05),其中26个上调基因,1个下调基因。通过GO和KEGG富集分析发现差异基因参与炎症反应、免疫系统过程等;TNF信号通路、IL-17信号通路以及细胞因子与细胞因子受体信号通路等参与BCG胞内感染过程。qRT-PCR验证与BCG感染相关的差异表达基因与转录组数据趋势一致。结论BCG感染树突状细胞后,能够激发宿主细胞炎症反应和免疫应答,TNF、IL-17等信号通路参与BCG胞内感染过程。

关键词：卡介苗树突状细胞转录组测序 mRNA

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结核分枝杆菌Rv3203蛋白的生物信息学及免疫信息学分析

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医学信息 2024年第21期37卷 23-29页

作者：余海燕任芹孟余李光华杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室

目的运用生物信息学及免疫信息学方法分析结核分枝杆菌（Mtb）Rv3203蛋白的结构特征，为研究Rv3203蛋白在Mtb感染中的功能提供基础。方法利用信息学软件分别预测Rv3203蛋白的理化性质、溶解度、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、糖基化位... 详细信息

目的运用生物信息学及免疫信息学方法分析结核分枝杆菌（Mtb）Rv3203蛋白的结构特征，为研究Rv3203蛋白在Mtb感染中的功能提供基础。方法利用信息学软件分别预测Rv3203蛋白的理化性质、溶解度、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、糖基化位点、磷酸化位点、相互作用蛋白、免疫原性、抗原性、毒性、致敏性，以及T、B细胞抗原表位和二级结构，并对蛋白的三级结构进行建模，最后对Rv3203蛋白进行密码子优化、计算机克隆和构建进化树。结果 Rv3203蛋白由224个氨基酸组成，理论等电点为4.68，为结构稳定的弱疏水性蛋白；无跨膜区和信号肽，定位于细胞质，具有1个糖基化位点和11个磷酸化位点；与lipD、lipE、lipP、lipZ、amiB2、amiC、bpoC、Rv0183、Rv1367c和Rv3204发生相互作用，参与Mtb的多种生物学过程；免疫原性为3.4211，抗原性为0.6533，无毒性，无致敏性；含5个CTL表位、1个Th表位和4个B细胞表位；二级结构和三级模型含大量的α-螺旋和无规则卷曲；经密码子优化后可在大肠杆菌中克隆并高效表达；此外，Mtb的Rv3203蛋白还与Mycobacterium canettii CIPT 140010059具有高度同源性。结论 Rv3203蛋白是一个结构稳定且具有热稳定性的酸性蛋白，具有免疫原性和抗原性，无毒性和致敏性，含多个T/B细胞表位，可在体外克隆并高效表达，参与Mtb的多种生物学过程及调控宿主的免疫应答反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3203 生物信息学免疫信息学

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脓毒血症的研究机制及免疫炎症因子吸附装置

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中国免疫学杂志 2022年第20期38卷 2550-2554页

作者：蹇艾利郭乐申元英姜石松云南大理大学基础医学院微生物学及免疫学教研室大理671000

脓毒血症是机体感染后引起的一种全身性免疫应答,进展到后期可发展为脓毒血症休克、多器官衰竭甚至死亡。研究表明在脓毒血症的早期阶段,天然免疫系统被激活以便清除入侵细菌,如果控制不当,脓毒症引起细胞因子风暴特别是TNF、IL-1、IL-... 详细信息

脓毒血症是机体感染后引起的一种全身性免疫应答,进展到后期可发展为脓毒血症休克、多器官衰竭甚至死亡。研究表明在脓毒血症的早期阶段,天然免疫系统被激活以便清除入侵细菌,如果控制不当,脓毒症引起细胞因子风暴特别是TNF、IL-1、IL-6等促炎因子大量释放从而加重炎症反应;到了晚期阶段由于巨噬细胞失活,抗炎因子增加则表现为免疫抑制状态。目前临床对于脓毒血症的治疗除了基础的对症用药外,还用血液净化装置以辅助缓解症状。本文通过文献检索,分析比较国内外常用免疫吸附装置的作用原理及优缺点,以期阐明免疫吸附装置在脓毒血症治疗中的前景及改进设想。

关键词：免疫吸附脓毒血症炎症反应治疗现状

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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 523-532页

作者：杨雨婷李玉洁余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 详细信息

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 PE22/PPE36融合蛋白巨噬细胞

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结核分枝杆菌ESX-1分泌系统与宿主巨噬细胞相互作用的研究进展

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中国人兽共患病学报 2023年第12期39卷 1218-1225页

作者：余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能... 详细信息

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能将Mtb分泌的蛋白质转运到宿主细胞中,发挥毒力及免疫调节作用;某些分泌蛋白具有高度免疫原性,并是强有效的T细胞抗原,可作为结核疫苗设计及结核病诊断的重要抗原。对ESX-1分泌系统与M?相互作用过程的机制研究是分析Mtb毒力因子的致病机理及疫苗研发的途径之一。因此,本文对Mtb的ESX-1分泌系统组成以及分泌蛋白对M?调控作用进行综述,分析ESX-1分泌系统因子在Mtb与宿主相互作用中发挥的作用,对于开发新的结核疫苗和药物控制结核病至关重要。

关键词： ESX-1分泌系统巨噬细胞结核分枝杆菌

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WalK(S221P)突变促进金黄色葡萄球菌荚膜产生的作用研究

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陆军军医大学学报 2023年第23期45卷 2460-2466页

作者：郭祖文饶一凡彭华刚饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400030

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进... 详细信息

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用,再用RT-qPCR筛选参与介导WalK(S221P)促进荚膜合成的调控分子,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证实WalKR对目标分子的调控作用。结果RNA-seq分析显示WalK(S221P)突变对196个金葡菌基因的表达水平影响显著,其中16个荚膜合成操纵子基因在XN108中的表达均显著上调。RT-qPCR检测显示荚膜合成相关capA,capH和capK在含有WalK(S221P)突变的XN108及K-Newman菌株中分别较回复株XN108-R和野生型Newman菌株显著上调。荚膜染色和透射电镜观察显示XN108的荚膜合成相比于回复株XN108-R明显增多,增厚。RT-qPCR筛选提示WalK(S221P)促进金葡菌荚膜合成可能是通过上调MgrA表达水平实现的,结合位点检索分析及EMSA实验证实WalK激活的WalR具有直接结合mgrA基因调控区的功能。结论金葡菌WalK(S221P)突变具有促进金葡菌荚膜产生的作用,该作用的发挥可能通过上调MgrA的表达而实现。

关键词：金黄色葡萄球菌荚膜二元调控系统WalKR WalK(S221P) MgrA

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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汉滩病毒糖蛋白Gn的T细胞表位预测及其跨种属验证

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解放军医学杂志 2023年第9期48卷 1000-1010页

作者：孙报增秦聪聪张俊琦王永凯张文标刘瑞波白天原张志辉张宇丝杨琨姜东伯空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院生物武器损伤防治药物重点实验室陕西西安710032 空军医科大学唐都医院风湿科陕西西安710032 空军军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032

目的筛选、鉴定并验证汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白-N末端(Gn)上的免疫反应性表位。方法通过UniProt数据库获取HTNV 76-118株Gn蛋白序列。采用IEDB、SMMPMBEC、NetMHCpan 4.1、SYFPEITHI、Rankpep算法预测表位亲和力,VaxiJen v2.0分析免疫... 详细信息

目的筛选、鉴定并验证汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白-N末端(Gn)上的免疫反应性表位。方法通过UniProt数据库获取HTNV 76-118株Gn蛋白序列。采用IEDB、SMMPMBEC、NetMHCpan 4.1、SYFPEITHI、Rankpep算法预测表位亲和力,VaxiJen v2.0分析免疫原性,Blastp工具计算保守性,HPEPDOCK和EpiDOCK模拟pMHC对接,TBtools进行双向聚类分析,酶联免疫斑点(ELISpot)实验评价表位细胞免疫反应性。结果通过UniProt数据库获得了HTNV 76-118株Gn蛋白序列(PRO_0000036816)。整合5种亲和力算法,在小鼠H-2亚型中获得了61个优势表位,在人主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅰ亚型中得到234个优势表位,MHC-Ⅱ亚型中得到212个优势表位;VaxiJen筛选分别获得H-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ亚型强免疫原性优势表位23、110、42个;进一步采用Blastp筛选获得高亲和力、强免疫原性、种间种内保守的MHC-Ⅰ类限制性表位3个,MHC-Ⅱ类限制性表位81个。双向分层聚类分析揭示了小鼠H2-d、H2-b和部分人类白细胞分化抗原(HLA)在提呈HTNV Gn表位上的相似性。ELISpot验证了5个表位具有较强的诱导脾细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的能力。结论预测并验证了HTNV Gn上的细胞免疫反应性表位,证实在MHC提呈中病毒抗原存在跨基因、种属、物种的交叉免疫反应性,为预防肾综合征出血热(HFRS)提供了新思路。

关键词：汉滩病毒糖蛋白表位计算机预测免疫反应性

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