检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2022年第7期42卷 1026-1031页

作者：赵行宇杨昆宋梓桐何涵张巍吉林医药学院生化教研室吉林吉林132013 延边大学基础医学院生化教研室吉林延边133000

目的观察c-Myc蛋白在宫颈癌HeLa细胞中的表达,探讨胡桃醌通过影响c-Myc蛋白泛素化降解进而影响HeLa细胞的增殖与凋亡。方法培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组:正常培养;10、20、50μmol/L胡桃醌组:培养液中分别加入对应浓度的胡桃醌。以W... 详细信息

目的观察c-Myc蛋白在宫颈癌HeLa细胞中的表达,探讨胡桃醌通过影响c-Myc蛋白泛素化降解进而影响HeLa细胞的增殖与凋亡。方法培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组:正常培养;10、20、50μmol/L胡桃醌组:培养液中分别加入对应浓度的胡桃醌。以Westernblot方法分析胡桃醌处理后c-Myc蛋白的表达。HeLa细胞分为对照组和20μmol/L胡桃醌组,在培养0、2、4、8 h分别用Westernblot检测c-Myc蛋白表达的变化;放线菌酮(CHX)法检测c-Myc蛋白半衰期的变化;CoIP方法检测c-Myc蛋白降解影响。HeLa细胞分为空白对照组:正常培养;胡桃醌组:20μmol/L胡桃醌培养液培养;0.5、1.0、2.0μmol/LMG132组:分别与0、1.0、2.0μmol/L蛋白酶体抑制剂MG132加20μmol/L胡桃醌培养,检测c-Myc蛋白表达的水平。将si c-Myc转染入HeLa细胞后,将细胞分siNC组:空载体组;si-NC;胡桃醌组:空载体加20μmol/L胡桃醌处理;si-cMyc组:转染Myc RNA;sicMyc20μmol/L胡桃醌组:转染Myc RNA加20μmol/L胡桃醌处理。MTT及流式细胞术检测20μmol/L胡桃醌处理后对敲除及未敲除c-Myc基因的细胞增殖及凋亡的影响。结果与对照组相比,不同浓度胡桃醌可下调c-Myc蛋白表达且曾时间及剂量依赖性(P<0.05;P<0.01);胡桃醌可缩短c-Myc蛋白的半衰期,加入不同浓度的MG132后,即可明显上调c-Myc蛋白水平(P<0.05;P<0.01)。未用胡桃醌组相比,胡桃醌可明显增加c-Myc蛋白的泛素降解水平。未敲除c-Myc组相比,敲除组在胡桃醌处理后吸光度值明显增加(P<0.05)和早期凋亡率明显下降(P<0.05)。结论胡桃醌通过影响c-Myc蛋白的泛素化降解过程,进而抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡的发生。

关键词：胡桃醌宫颈癌 HeLa c-Myc 泛素化

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环核苷酸门控离子通道及其功能的研究进展

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 579-586页

作者：方琳李世鹏长春医学高等专科学校基础医学部病原教研室吉林长春130031 吉林大学植物科学学院基础生物系吉林长春130062

环核苷酸门控(CNG)离子通道是一种非选择性的四聚体阳离子通道,可以直接被细胞内信使小分子——环核苷酸活化,是钙离子进入细胞的主要通道之一。CNG通道蛋白由6种不同基因编码:4个A亚单位和2个B亚单位。CNG离子通道的活性可被钙离子/钙... 详细信息

环核苷酸门控(CNG)离子通道是一种非选择性的四聚体阳离子通道,可以直接被细胞内信使小分子——环核苷酸活化,是钙离子进入细胞的主要通道之一。CNG通道蛋白由6种不同基因编码:4个A亚单位和2个B亚单位。CNG离子通道的活性可被钙离子/钙调素(Ca2+/CaM)及磷酸化或膜上磷酸肌醇作用调节,从而改变细胞内钙离子浓度,参与多种生物学功能的调控。自从在视杆细胞中发现CNG离子通道以来,经历了对其生理功能、克隆相关基因、理解调控方式、解析晶体结构和开发相关的基因治疗方法等研究过程,在视觉和嗅觉感觉神经元(OSNs)的信号转导中发挥着重要作用。现就CNG离子通道的功能、结构、调控机制及其与相关疾病关系等方面进行简要综述,以期为CNG离子通道相关疾病的治疗提供理论依据。

关键词：环核苷酸门控离子通道钙离子调控机制视网膜

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lncRNA Miat通过miR-182/Nogo-A调控氧化应激所致心肌细胞凋亡的机制

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临床与实验病理学杂志 2023年第9期39卷 1084-1094页

作者：薄洪臣谢鲁寒刘赵放韩冰洁刘珊倪玮钰李连宏大连医科大学基础医学院病理学与法医学教研室大连116044

目的探究lncRNA Miat/miR-182/Nogo-A轴在心肌细胞因氧化应激发生凋亡或损伤过程中的调控机制。方法运用H_(2)O_(2)处理模拟心肌细胞氧化应激损伤,CCK-8实验检测细胞活力;si-Miat与miR-182共转染、miR-182 mimic与上调Nogo-A共转染;qR... 详细信息

目的探究lncRNA Miat/miR-182/Nogo-A轴在心肌细胞因氧化应激发生凋亡或损伤过程中的调控机制。方法运用H_(2)O_(2)处理模拟心肌细胞氧化应激损伤,CCK-8实验检测细胞活力;si-Miat与miR-182共转染、miR-182 mimic与上调Nogo-A共转染;qRT-PCR检测Miat、miR-182、Nogo-A mRNA的表达;Western blot检测Bax、Caspase-3、BCL-2、Nogo-A的表达;Hoechst凋亡染色检测凋亡率;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182可能存在靶向结合关系,生物信息网站Targescan预测miR-182与Nogo-A之间的结合关系。结果 lncRNA Miat在H_(2)O_(2)处理后表达升高;抑制lncRNA Miat可减轻H_(2)O_(2)处理导致的细胞凋亡;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;下调lncRNA Miat可以减轻下调miR-182在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的抑制作用;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;上调miR-182可使Nogo-A表达下降进而抑制氧化应激导致的心肌细胞凋亡;上调miR-182可以减轻上调Nogo-A在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA Miat可以通过miR-182/Nogo-A轴促进心肌细胞氧化应激所致的凋亡。Miat可作为氧化应激过程中心肌细胞凋亡或损伤的标志物。

关键词：心肌梗死氧化应激 lncRNA Miat Nogo-A

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内质网应激PERK-eIF2α-ATF4信号通路在延缓APP/PS1小鼠移植瘤生长中的作用

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吉林大学学报（医学版） 2022年第2期48卷 324-330页

作者：董营郭家女王思懿郭丹王力可温旭刘立峰曲萌于春艳刘楠楠王丹陈昌捷北华大学基础医学院病理教研室吉林吉林132013 北华大学基础医学院人体解剖学教研室吉林吉林132013 北华大学基础医学院分子生物教研室吉林吉林132013 北华大学附属医院检验科吉林吉林132013

目的:探讨内质网应激(ERS)及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)通路在其抑制作用中的... 详细信息

目的:探讨内质网应激(ERS)及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)通路在其抑制作用中的可能机制。方法:体外培养B16细胞,通过皮下注射分别植入C57和APP/PS1小鼠背部皮下,建立C57BL/6J和APP/PS1雄性小鼠移植黑色素瘤模型,作为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠出瘤时间并计算肿瘤体积,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组小鼠移植瘤组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和溶酶体组织蛋白酶L(cathepsin L)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组小鼠移植瘤组织中GRP78、PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)和内质网自噬标志蛋白FAM134B蛋白表达水平,免疫组织化学法检测移植瘤组织中蛋白质二硫异构酶(PDI)蛋白表达情况,免疫荧光法测定2组小鼠移植瘤组织中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平。结果:与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤体积小(P<0.05),移植瘤组织中ERS相关基因GRP78和PERK mRNA表达水平升高(P<0.05),移植瘤组织中GRP78、p-eIF2α/eIF2α和ATF4蛋白表达水平及p-PERK/PERK比值均升高(P<0.05)。C57移植瘤组肿瘤细胞胞质内多见黑色素颗粒,为移植瘤组织的形态特征,可见少量棕黄色颗粒,为PDI阳性颗粒;APP/PS1移植瘤组肿瘤细胞胞质内可见少量黑色素颗粒和广泛表达的棕黄色颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠移植瘤组织中内质网自噬标志蛋白FAM 134B蛋白表达水平升高(P<0.05),cathepsin L mRNA表达水平升高(P<0.05),ATP水平降低(P<0.05)。结论:APP/PS1移植瘤模型小鼠肿瘤生长缓慢,其机制可能与ERS的PERK-eIF2α-ATF4信号通路被激活有关。

关键词：蛋白激酶R样内质网激酶内质网应激内质网自噬淀粉蛋白前体蛋白早老素1 移植黑色素瘤

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LGI-1抗体阳性自身免疫性脑炎伴睡眠结构异常和认知障碍1例报告及文献复习

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吉林大学学报（医学版） 2024年第4期50卷 1137-1143页

作者：刘洋刘志孙可金嘉慧任俊北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132021 吉林省吉林市中心医院神经内科吉林吉林132011

目的:分析富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI-1)抗体阳性自身免疫性脑炎(AE)(LGI-1 AE)并发睡眠障碍和认知障碍患者的临床资料,探讨其可能的病理机制。方法:患者,男性,68岁。因记忆力减退2个月,抽搐1个月入院,临床诊断LGI-1 AE,给予人免疫球... 详细信息

目的:分析富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI-1)抗体阳性自身免疫性脑炎(AE)(LGI-1 AE)并发睡眠障碍和认知障碍患者的临床资料,探讨其可能的病理机制。方法:患者,男性,68岁。因记忆力减退2个月,抽搐1个月入院,临床诊断LGI-1 AE,给予人免疫球蛋白联合甲泼尼龙琥珀酸钠治疗后症状好转。在排除任何药物影响下,分别于急性期及恢复期对患者进行神经心理学评估及包括睡眠多导图(PSG)检查的睡眠评估。结果:急性期评估提示患者存在严重认知障碍,简易精神状态检查量表(MMSE)评分22分,蒙特利尔认知评价量表(MoCA)评分19分。PSG检查,总睡眠时间明显缩短(265 min),睡眠全程碎片化,睡眠效率降低,N3和快速眼动期(REM)睡眠完全缺失。恢复期评估,患者认知功能改善(MMSE评分30分,MoCA评分26分),PSG检查总睡眠时间正常,睡眠潜伏期13.5 min,睡眠碎片化明显改善,睡眠效率提高(84.3%),N3期睡眠26 min(5.1%),REM期睡眠69 min(13.6%)。结论:LGI-1 AE患者睡眠结构的异常与认知障碍在发病和转归方面同步,可能是LGI-1 AE患者认知障碍的病因之一。睡眠障碍的病理起源可能为下丘脑。下丘脑分泌素和LIM同源框(lhx6)通路可能成为纠正睡眠结构同时治疗认知障碍的新靶点。

关键词：富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1 自身免疫性脑炎睡眠结构异常睡眠障碍认知功能神经心理学评估睡眠多导图

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沉默CD147基因对姜黄素抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第6期50卷 1572-1586页

作者：王馨赵杰瑞郭玉苗陈姝彤侯宗昊张若文北华大学基础医学院病原生物学教研室吉林吉林132000 澳门科技大学中医药学院附属医院骨外科广东珠海519003 延边大学医学院生物化学教研室吉林延吉133000

目的:探讨姜黄素对人前列腺癌C4-2细胞和LNCaP细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用慢病毒转染系统分别转染C4-2细胞和LNCaP细胞,作为shCD147-C4-2组和shCD147-LNCaP组。采用RNA干扰技术制备沉默CD147基因细胞... 详细信息

目的:探讨姜黄素对人前列腺癌C4-2细胞和LNCaP细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用慢病毒转染系统分别转染C4-2细胞和LNCaP细胞,作为shCD147-C4-2组和shCD147-LNCaP组。采用RNA干扰技术制备沉默CD147基因细胞,以转入空载体的细胞作为阴性对照,分为shNC-C4-2组(shNC-C4-2细胞)和shNC-LNCaP组(shNC-LNCaP细胞)。取生长对数期C4-2、LNCap、shCD147-C4-2和shCD147-LNCaP细胞,加入20μmol·L^(-1)姜黄素,处理0和24 h时,显微镜观察各组细胞形态表现。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡、侵袭和迁移相关蛋白表达水平。结果:与C4-2组比较,沉默CD147基因后shCD147-C4-2组细胞中CD147蛋白表达量明显减少;与LNCaP组比较,沉默CD147基因后shCD147-LNCaP组细胞中CD147蛋白表达量明显减少。与处理0 h比较,20μmol·L^(-1)姜黄素处理24 h后C4-2组和LNCaP组部分细胞出现凋亡征象,且有典型凋亡小体存在;shCD147-C4-2组和shCD147-LNCaP组细胞凋亡现象减弱。MTT法检测,与C4-2+0μmol·L^(-1)姜黄素组比较,C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组、C4-2+40μmol·L^(-1)姜黄素组、C4-2+60μmol·L^(-1)姜黄素组和C4-2+80μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与LNCaP+0μmol·L^(-1)姜黄素组比较,LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组、LNCaP+40μmol·L^(-1)姜黄素组、LNCaP+60μmol·L^(-1)姜黄素组和LNCaP+80μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与shNC-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞增殖活性明显升高(P<0.01)。细胞划痕愈合实验检测,姜黄素处理24 h,与C4-2组比较,C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组和C4-2+40μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率均明显降低(P<0.01);与LNCaP组比较,LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组和LNCaP+40μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率明显升高(P<0.05);与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率明显降低(P<0.01);与shNC-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组细胞迁移率明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与C4-2组比较,C4-2+20μmol·L^(-1)姜黄素组和C4-2+40μmol·L^(-1)姜黄素组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)和聚二磷酸腺苷(ADP)-核糖聚合酶1(PARP1)蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与LNCaP组比较,LNCaP+20μmol·L^(-1)姜黄素组和LNCaP+40μmol·L^(-1)姜黄素组细胞中Bax、cleaved Caspase-3和PARP1蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),LNCaP+40μmol·L^(-1)姜黄素组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20μmol·L^

关键词：姜黄素 CD147 前列腺肿瘤细胞侵袭细胞迁移

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快速定性检测人呼吸道样本中冠状病毒基因芯片的制备方法及其效果评价

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国际老年医学杂志 2024年第2期45卷 135-141页

作者：郑皓宇郑文学谷奕诺安一鸣张嘉琪张雨涵张姗姗孟晓婷王放吉林大学基础医学院病原生物学教研室长春130021 吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室长春130021

目的探讨冠状病毒基因芯片的研制方法,建立一种快速定性检测人咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等呼吸道感染样本中的7种冠状病毒和2种流感病毒核酸的方法。方法根据互联网公布的10种呼吸道感染病毒的基因序列,设计了相应的引物和探针序列,经... 详细信息

目的探讨冠状病毒基因芯片的研制方法,建立一种快速定性检测人咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等呼吸道感染样本中的7种冠状病毒和2种流感病毒核酸的方法。方法根据互联网公布的10种呼吸道感染病毒的基因序列,设计了相应的引物和探针序列,经琼脂糖凝胶电泳筛选验证后,将探针点样于醛基修饰基片,完成了检测芯片制作。结果将聚合酶链式反应扩增产物用10倍梯度稀释法稀释后进行基因芯片检测,结果表明可形成杂交斑点的最低检测浓度为103copies/mL。结论研制的冠状病毒基因芯片具有良好的特异度和灵敏度,可同时对SARS-CoV-2及其他呼吸道病毒同时进行高通量快速检测。

关键词：冠状病毒流感病毒基因芯片

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孤立性主动脉窦粥样硬化斑块致冠状动脉开口狭窄猝死1例

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法医学杂志 2023年第1期39卷 88-90页

作者：王郁芳冯向阳彭一林官鹏黄飞骏严赫中南大学基础医学院法医学系湖南长沙410000 新疆医科大学基础医学院法医学系新疆乌鲁木齐830000 四川大学华西基础医学与法医学院法医病理学教研室四川成都610041

1案例1.1简要案情及病史摘要某女,42岁,感冒流涕1周,某日自感胸闷气紧,遂至医院就诊。入院后行胸部X线片检查示,双肺下野少许小斑片影,两肺纹理增多。血常规示白细胞12×10^(9)/L(正常参考值4×10^(9)/L~10×10^(9)/L)。予... 详细信息

1案例1.1简要案情及病史摘要某女,42岁,感冒流涕1周,某日自感胸闷气紧,遂至医院就诊。入院后行胸部X线片检查示,双肺下野少许小斑片影,两肺纹理增多。血常规示白细胞12×10^(9)/L(正常参考值4×10^(9)/L~10×10^(9)/L)。予以抗感染治疗后返回家中,次日上午在家中突然倒地,经抢救无效死亡。否认有传染病史。为明确死亡原因,委托进行法医学鉴定。

关键词：法医病理学猝死冠状动脉开口狭窄主动脉窦粥样硬化

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肥胖伴慢性束缚应激小鼠血压升高与孤束核去甲肾上腺素能神经元损伤的关系研究

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四川大学学报（医学版） 2022年第1期53卷 77-82页

作者：王森甲郑翔毕文杰周雪四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院基础医学专业实验室成都610041 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室成都610500

目的探讨肥胖伴慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)是否致小鼠血压升高及其与孤束核中间部(iNTS)损伤的关系。方法制作CRS小鼠模型,将51只小鼠分为低脂非束缚组(LF组)、低脂束缚组(LS组)、高脂非束缚组(HF组)、高脂束缚组(HS组... 详细信息

目的探讨肥胖伴慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)是否致小鼠血压升高及其与孤束核中间部(iNTS)损伤的关系。方法制作CRS小鼠模型,将51只小鼠分为低脂非束缚组(LF组)、低脂束缚组(LS组)、高脂非束缚组(HF组)、高脂束缚组(HS组);7 d束缚+3 d自由活动为一个周期,共4个周期(40 d);每个周期中第9天时检测小鼠体质量、并测量动脉收缩压,实验第40天时处死各组小鼠后取脑组织行免疫组织化学染色及免疫印迹检测胶质纤维状酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达,取附睾脂肪垫免疫印迹检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)蛋白表达(代表脂肪组织血管密度)。结果在第40天时,HS组小鼠动脉收缩压明显高于其他三组小鼠,高脂喂养组(HF组和HS组)体质量增长明显;各组小鼠VEGFA蛋白表达差异无统计学意义;束缚组(LS组和HS组)小鼠脑组织iNTS星形胶质细胞活化,HS组iNTS TH表达减少;HF组、LS组小鼠血压均无异常变化;HS组血压普遍升高,其中37.5%小鼠出现高血压(动脉收缩压≥140 mmHg,1 mmHg=0.133 kPa)。结论肥胖伴慢性束缚应激可致小鼠动脉血压升高,且其机制与孤束核去甲肾上腺素能神经元损伤有关。

关键词：慢性束缚应激高脂饮食去甲肾上腺素能神经元孤束核

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一种基于植物瞬时表达研制新冠病毒重组蛋白疫苗的方法

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中国免疫学杂志 2022年第20期38卷 2512-2516页

作者：王弘瑞赵丽娟房明丽杨明吉林大学基础医学院分子生物学教研室长春130021

目的:探究一种以植物烟草为瞬时表达载体快速且高效研制和表达SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的方法。方法:培育植物烟草,当烟草生长到第6周时,叶片生长到接近手掌大小,可用于下一步的农杆菌渗透。构建包含SARS-CoV-2 S重组质粒的农杆菌。培养... 详细信息

目的:探究一种以植物烟草为瞬时表达载体快速且高效研制和表达SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的方法。方法:培育植物烟草,当烟草生长到第6周时,叶片生长到接近手掌大小,可用于下一步的农杆菌渗透。构建包含SARS-CoV-2 S重组质粒的农杆菌。培养含目的基因的农杆菌,来获得农杆菌渗透液。选择待渗透的目标叶片,用针头轻轻在叶片上刺穿一个小孔,然后将制备好的农杆菌渗透液注入叶片,使其慢慢吸收渗透液。需要从渗透后的烟叶中提取和纯化SARS-CoV-2 S重组蛋白,并进行初步鉴定。对SARS-CoV-2 S重组蛋白进行纯化与鉴定,并对纯化的SARS-CoV-2 S重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果:采用植物烟草成功地表达SARS-CoV-2 S重组蛋白,其分子量约为53.2 kD,Western blot结果显示His-tag抗体可以识别SARS-CoV-2 S重组蛋白。结论:基于植物的瞬时表达系统可作为SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的快速研制方法。

关键词： COVID-19 植物生产疫苗瞬时表达系统本氏烟草农杆菌渗透法

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