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携带siRNA-STAT3质粒的减毒沙门菌对小鼠移植性前列腺癌的治疗作用

吉林大学学报（医学版） 2010年第3期36卷 477-482,607页

作者：刘喜东周悦周姝含王芳曹群周庆伟赵雪俭吉林大学药学院生物医学工程教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的:观察以减毒沙门菌携带siRNA-STAT3质粒对小鼠前列腺移植癌的治疗效果,阐明siRNA-STAT3诱导前列腺癌细胞凋亡的机制。方法:构建小鼠前列腺移植癌模型,随机分为Mock未治疗组、pGC-Si-Scramble组及pGC-Si-STAT3治疗组(将转化有siRNA-S... 详细信息

目的:观察以减毒沙门菌携带siRNA-STAT3质粒对小鼠前列腺移植癌的治疗效果,阐明siRNA-STAT3诱导前列腺癌细胞凋亡的机制。方法:构建小鼠前列腺移植癌模型,随机分为Mock未治疗组、pGC-Si-Scramble组及pGC-Si-STAT3治疗组(将转化有siRNA-STAT3质粒的减毒沙门菌局部注射到模型构建成功的小鼠体内)。观察小鼠一般状态,记录肿瘤体积的变化,RT-PCR和Western boltting方法检测STAT3及其下游基因Bcl-2、c-Myc、HIF-1、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡。结果:小鼠前列腺移植癌模型构建成功,pGC-Si-STAT3治疗组移植性前列腺癌瘤体生长受到明显抑制,肿瘤的质量和体积明显低于对照组(P<0.05)。流式细胞术检测,pGC-Si-STAT3治疗组、pGC-Si-Scramble组及Mock未治疗组肿瘤细胞早期凋亡率分别为(29.1±1.6)%、(14.7±1.4)%和(8.9±1.8)%,组间比较差异有显著性(P<0.05)。pGC-Si-STAT3治疗组肿瘤组织的STAT3 mRNA和蛋白表达明显降低,其下游基因Bcl-2、c-Myc的mRNA及HIF-1、Cyclin D1蛋白的表达水平均降低,与Mock未治疗组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:以减毒沙门菌作为运载体携带siRNA-STAT3质粒通过调控STAT3下游基因表达,诱导细胞凋亡,对小鼠移植性前列腺癌具有明显的抑瘤效果。

关键词：前列腺肿瘤减毒沙门氏菌 STAT3 RNA干涉

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郁金对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝脏的免疫调节作用

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吉林大学学报（医学版） 2010年第5期36卷 934-937,1004页

作者：韩向北朱彤彤郭亚雄李德龙许多程宏张婉娴赵丽晶赵丽娟吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 吉林省人民医院内分泌科吉林长春130021 吉林大学

目的:观察单味郁金(Curcumae)水煎剂对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤小鼠肝细胞免疫调节作用,为开发利用单味郁金水煎剂防治急慢性肝损伤提供实验依据。方法:ICR小鼠48只,雌雄各半,随机分为空白对照组,模型组,阳性药物组以及郁金高、中... 详细信息

目的:观察单味郁金(Curcumae)水煎剂对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤小鼠肝细胞免疫调节作用,为开发利用单味郁金水煎剂防治急慢性肝损伤提供实验依据。方法:ICR小鼠48只,雌雄各半,随机分为空白对照组,模型组,阳性药物组以及郁金高、中、低剂量组,每组8只。阳性药组以甘利欣22.5mg·kg-1腹腔注射,每天1次;郁金高、中、低剂量组分别以12、6、3g·kg-1灌胃,每天1次;空白对照组及模型组等体积蒸馏水灌胃,每天1次;连续给药7d,第7天给药后11h;再以0.2%CCl4橄榄油溶液(10mL·kg-1)腹腔注射(空白对照组除外),复制急性肝损伤模型。造模后24h处死,计算肝指数;肝组织HE染色观察病理变化;RT-PCR法检测IL-1β及TNF-a mRNA表达水平;免疫组织化学法观察IL-18蛋白表达水平。结果:与模型组比较,各给药组肝指数明显下降(P<0.05)。HE染色显示:模型组小鼠肝小叶组织结构紊乱、肝窦充血明显、炎细胞浸润明显、肝组织呈局灶性细胞变性或死亡;而各给药组上述病理变化明显减轻。与模型组比较,郁金给药组小鼠肝组织IL-1β及TNF-α mRNA表达水平及IL-18蛋白表达水平均明显下调(P<0.05)。结论:单味郁金水煎剂可能通过抑制肝组织细胞因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,调节小鼠肝脏免疫功能而减轻CCl4所致的急性肝损伤。

关键词：四氯化碳肝损伤细胞因子郁金

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Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

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中国病理生理杂志 2010年第8期26卷 1474-1478页

作者：刘艳波沈维高芦丽莉葛贺盖晓东赵雪俭北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。

关键词： RNA干扰 Survivin 前列腺肿瘤 DU145细胞细胞凋亡

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共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

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吉林大学学报（医学版） 2010年第1期36卷 30-34,I0001页

作者：邵月婷刘亚男邵晨汲坤李晓洁李峰张灵赵丹李扬徐德启胡嘉弟赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 美国食品药品监督管理局马里兰州bethesda20892 美国马里兰大学医学院马里兰州baltimore21201

目的:构建可同时表达野生型p53(wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法:利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。... 详细信息

目的:构建可同时表达野生型p53(wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法:利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对mdm2和p53表达的影响,MTT法检测共表达质粒转染后PC-3细胞增殖活性。结果:克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-mdm2序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述真核重组表达载体;转染细胞48h后可见siRNA-mdm2组GFP明显表达;RT-PCR和Western blotting检测显示转染共表达质粒后PC-3细胞中wt-p53表达增强,mdm2表达下调;MTT检测显示共表达质粒转染后PC-3细胞生长抑制率为40.4%。结论:成功构建p53与siRNA-mdm2共表达质粒,共表达质粒可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖。

关键词：基因,p53 mdm2基因 RNA干扰前列腺肿瘤质粒

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原核表达HPV16 L1蛋白ELISA方法检测血清抗体

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中国妇幼保健 2010年第3期25卷 395-397页

作者：赵丽晶王学林许多梁作文郭恒孙树民赵淑华赵雪俭郑晶莹吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 吉林大学人兽共患病教育部重点实验室吉林大学第二医院妇产科

目的:从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建原核表达载体,表达并纯化蛋白用于ELISA检测。方法:根据基因序列设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pet28a为载体构建表... 详细信息

目的:从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建原核表达载体,表达并纯化蛋白用于ELISA检测。方法:根据基因序列设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pet28a为载体构建表达质粒,IPTG诱导表达蛋白,DEAE及葡聚糖凝胶分离纯化目的蛋白,将蛋白包被平底96孔板用于ELISA检测。结果:从宫颈癌临床标本克隆到HPV16型L1蛋白编码序列,其原核表达产物纯化后可用于ELISA检测。结论:成功获得人有抗原性的HPV16L1蛋白,可用于ELISA检测。

关键词： HPV16 L1蛋白原核表达 ELISA检测

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促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤病理学及超微结构

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吉林大学学报（医学版） 2010年第4期36卷 735-740,F0003页

作者：徐斌王波顾俊莲李馨李扬福建省福州市第一医院病理科福建福州350009 吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 内蒙古林业总医院病理科内蒙古牙克石022150

目的:观察促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的病理学和超微结构改变,提高对促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的认识和诊断水平。方法:对1例原发于右小腿的促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤进行光镜和电镜观察及免疫组织化学染色分析,并结合文献... 详细信息

目的:观察促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的病理学和超微结构改变,提高对促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的认识和诊断水平。方法:对1例原发于右小腿的促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤进行光镜和电镜观察及免疫组织化学染色分析,并结合文献复习。结果:肿瘤大体表现为大小为3.2cm×2.4cm×1.3cm,切面灰黄色,见出血、坏死;光镜下表现为瘤细胞呈大小不等团巢状结构,巢之间有十分丰富的硬化性纤维结缔组织间质,并见坏死,巢团内瘤细胞排列成条索状,瘤细胞大小与形态较一致,呈小圆形或短梭形,核小、深染、核仁不明显;免疫组织化学显示为瘤细胞表达EMA(+)、CK(+)、NSE(+)及Desmin核旁点状染色(+),而不表达CgA、Myogenin、Syn、LCA、SMA、S-100、NF、GFAP、HMB45、HHF-35、CD3、CD10、Actin、CD99及CD20;电镜特征性结构为瘤细胞胞浆内核旁区有中间丝聚集物,呈小球形或螺纹状排列。结论:促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤发生部位可在腹腔也可在腹腔外,发病年龄跨度较大。促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤具有特殊的组织学和超微结构特征,免疫组织化学显示瘤细胞具有上皮源性、间质性和神经源性等多向分化的特点,并且RT-PCR在促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤分子遗传学的诊断中有重要价值。促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤预后差。

关键词：软组织肿瘤促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤光学显微镜免疫组织化学电子显微镜超微结构

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尾叶香茶菜二萜类化合物B对人宫颈癌细胞的生长抑制作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2010年第1期36卷 54-57,I0001页

作者：刘亚男金永日钟加滕朱璐汲坤李晓洁崔伟李扬赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 吉林大学化学学院分析化学系吉林长春130021 吉林大学生物与农业工程学院食品科学与工程系吉林长春130022

目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对人宫颈癌细胞株Hela细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法:处于对数生长期的Hela细胞分为正常对照组,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg.L-1DB实验组,MTT法观察不同剂量DB作用24和48h后Hel... 详细信息

目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对人宫颈癌细胞株Hela细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法:处于对数生长期的Hela细胞分为正常对照组,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg.L-1DB实验组,MTT法观察不同剂量DB作用24和48h后Hela细胞增殖抑制率,相差显微镜观察DB作用后Hela细胞形态的改变,RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后Hela细胞P53、P21、CDK2mRNA和蛋白表达水平。结果:MTT检测,24h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为18.18%、28.89%和32.84%,48h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为26.64%、47.03%和51.90%,呈时间-剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);形态学观察,DB作用后Hela细胞变圆、体积缩小,有部分细胞漂浮;2.0、4.0和8.0mg.L-1DB分别作用Hela细胞24和48h后,P53和P21mRNA和蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),CDK2mRNA和蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:DB可抑制Hela细胞生长,其机制可能与上调细胞周期相关基因p53、p21的表达,下调CDK2表达,从而影响细胞从G1期进入S期有关。

关键词：二萜类化合物B 尾叶香茶菜宫颈肿瘤细胞周期

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Bcl-2在H2O2诱导神经胶质瘤自噬中的作用

Bcl-2在H2O2诱导神经胶质瘤自噬中的作用

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中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议

作者：孔晓霞张宏宇康劲松温州医学院基础医学院机能实验学教研室吉林大学白求恩医学院病理生理学教研室

目的:探讨抗凋亡蛋白Bcl-2在HO诱导神经胶质瘤U251细胞自噬中的作用。方法:基因重组技术构建pEGFP-C1-Bcl-2质粒,并转染于人神经胶质瘤U251细胞株。通过透射电镜检测U251细胞形态学变化;免疫荧光检测自噬标志物MDC的积聚;Western blott... 详细信息

目的:探讨抗凋亡蛋白Bcl-2在HO诱导神经胶质瘤U251细胞自噬中的作用。方法:基因重组技术构建pEGFP-C1-Bcl-2质粒,并转染于人神经胶质瘤U251细胞株。通过透射电镜检测U251细胞形态学变化;免疫荧光检测自噬标志物MDC的积聚;Western blotting检测自噬相关蛋白Beclin 1及自噬上游调控信号Akt、mTOR蛋白的表达。结果:与对照组相比:

关键词：神经胶质瘤 H2O2 Bcl-2

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纤维样肾小球病病理分析

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吉林大学学报（医学版） 2010年第5期36卷 952-956页

作者：徐斌王波邵晨李扬曲利娟福建省福州市第一医院病理科福建福州350009 吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 内蒙古林业总医院病理科内蒙古牙克石022150 南京军区福州总医院病理科福建福州350025

目的:光镜及电镜下观察纤维样肾小球病的病理特征,为纤维样肾小球病的诊断及鉴别诊断提供依据。方法:2例纤维样肾小球病患者(其中1例并发免疫触须样肾小球病)经皮肾穿刺取活检组织,HE、PAS、PAM-Masson染色,IgG、IgM、IgA、C3、C4、C1q... 详细信息

目的:光镜及电镜下观察纤维样肾小球病的病理特征,为纤维样肾小球病的诊断及鉴别诊断提供依据。方法:2例纤维样肾小球病患者(其中1例并发免疫触须样肾小球病)经皮肾穿刺取活检组织,HE、PAS、PAM-Masson染色,IgG、IgM、IgA、C3、C4、C1q免疫组化染色,于光镜下观察;病理分析(光镜和电镜)及免疫组织化学染色;铀铅双重染色透射电镜观察。结果:光镜下PAM-Masson染色膜性肾病示系膜区团块状、肾小球基底膜细小嗜复红蛋白沉积,而膜增殖性肾小球肾炎示肾小球基底膜局灶增厚、"双轨化"伴嗜复红蛋白沉积。免疫组织化学染色膜性肾病和膜增殖性肾小球肾炎在肾小球系膜区有IgG、IgM、IgA、C3免疫复合物沉积,而在血管襻区膜性肾病见IgG、C3免疫复合物沉积,膜增殖性肾小球肾炎可见IgM、C3、C1q免疫复合物沉积,但其刚果红染色阴性。电镜下膜性肾病和膜增殖性肾小球肾炎在系膜区、基底膜上皮下和(或)内皮下有电子致密物沉积,见无分支的纤维样结构(直径15～25nm),而膜增殖性肾小球肾炎还可见微管状结构(直径30～50nm)。结论:纤维样肾小球病具有典型的形态学特征,确诊需依赖电镜特征性纤维样结构。

关键词：肾脏疾病病理学纤维样肾小球病

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人参二醇皂苷对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas基因表达的影响

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吉林中医药 2010年第5期30卷 444-445页

作者：李璐王星云陈万才刘喜春赵雪俭长春中医药大学基础医学院预防医学教研室吉林长春130117 吉林大学基础医学院病理生理学研究室吉林长春130021

目的:研究人参二醇皂苷(PDS)对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas表达的影响。方法:Wistar大鼠随机分为实验对照组(CTRG)、内毒素休克组(LPSG)、地塞米松组(DEXG)和人参二醇皂苷组(PDSG)。以内毒素(4mg/kg)复制内毒素休克模型,平均动脉压降... 详细信息

目的:研究人参二醇皂苷(PDS)对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas表达的影响。方法:Wistar大鼠随机分为实验对照组(CTRG)、内毒素休克组(LPSG)、地塞米松组(DEXG)和人参二醇皂苷组(PDSG)。以内毒素(4mg/kg)复制内毒素休克模型,平均动脉压降至基础血压的2/3为休克状态。取肝脏组织提取总RNA和蛋白以RT-PCR检测IL-18、Fas mRNA表达,应用Western blotting检测IL-18的蛋白表达。结果:(1)肝脏组织IL-18mRNA和蛋白表达丰度以LPSG最高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性(P<0.01);DEXG、PDSG IL-18mRNA和蛋白表达丰度高于CTRG(P<0.01);PDSG IL-18mRNA和蛋白表达水平与DEXG接近(P>0.05)。(2)肝脏组织FasmRNA表达丰度以LPSG最高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性(P<0.01);DEXG、PDSG Fas mRNA表达丰度仍高于CTRG(P<0.01);PDSG Fas mRNA表达水平与DEXG接近(P>0.05)。结论:PDS与DEX预治疗对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、FasmRNA和IL-18蛋白过度表达产生了一定的抑制作用,在某种程度上抑制了IL-18通过Fas/FasL途径介导的肝细胞凋亡,削弱了内毒素休克对肝脏的损伤,保护了肝脏组织。

关键词：内毒素人参二醇皂苷地塞米松 IL-18 Fas 凋亡休克

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