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携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对前列腺癌移植瘤的体内抑制作用

中国病理生理杂志 2014年第6期30卷 961-967页

作者：赵晓晖芦丽莉葛贺李冰赵雪俭刘艳波北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春132001

目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织... 详细信息

目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织化学染色法、RT-PCR法和TUNEL法检测携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对肿瘤抑制作用的相关机制。结果:与psi-survivin或pGRIM-19单基因治疗对照组比较,携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒减毒沙门菌组肿瘤体积明显缩小,其缩小率分别约为2.36和3.02倍;肿瘤组织内survivin mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),GRIM-19 mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-xL、Stat3、cyclin D1和c-Myc的mRNA表达明显降低(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及Ki67蛋白表达降低而caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.05),同时细胞凋亡明显。结论:携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌明显抑制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的生长,其发生机制与促进细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。

关键词： RNA干扰存活蛋白 GRIM-19 前列腺肿瘤减毒沙门菌

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siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

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中国病理生理杂志 2012年第7期28卷 1241-1246页

作者：沈维高赵丽晶盖晓东芦丽莉葛贺陈立松刘艳波赵雪俭北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒,将成功构建的pGRIM-19-si-survivin质粒转染人前列腺癌DU145细胞株,应用半定量RT-PCR方法检测细胞内survivin和GRIM-19 mRNA表达水平,应用MTT法观察其对细胞增殖能力的影响。结果:(1)应用酶切及质粒测序法鉴定,证明成功构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒。(2)与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19及pGRIM-19-si-survivin组survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.05、0.62±0.08和0.35±0.05,差异显著(P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P<0.05);psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin组GRIM-19表达增强,分别为mock组的1.93±0.14、2.57±0.20和4.12±0.21(P<0.01),与pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin增强GRIM-19表达作用更明显(P<0.05)。(3)转染48 h后,与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin 3组细胞增殖率分别为58.0%±7.2%、62.1%±6.1%和50.2%±4.8%,差异显著(P<0.05);转染72 h后,与mock组比较,3组细胞增殖率分别为43.4%±4.3%、51.3%±6.7%和26.8%±7.1%,差异明显(P<0.05,P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-survivin和GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin;该质粒抑制survivin表达并增强GRIM-19表达,对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。

关键词：前列腺肿瘤存活蛋白 GRIM-19

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Survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑制作用

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中国病理生理杂志 2012年第12期28卷 2178-2181页

作者：郭鹏沈维高赵丽晶闫喜惠刘艳波赵雪俭北华大学附属医院肾病风湿病科北华大学吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春132001 北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013

目的:探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法:体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将su... 详细信息

目的:探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法:体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将survivin-siRNA质粒或scrambled siRNA对照质粒电转染进行治疗,描记移植瘤生长曲线,并计算抑制率;通过HE染色、免疫组化染色及TUNEL染色观察survivin-siRNA对移植瘤影响。结果:成功构建裸鼠前列腺癌移植瘤模型。与mock和scrambled siRNA组相比,survivin-siRNA抑瘤率分别为两对照组的61.81%和62.87%;免疫组织化学染色发现:survivin-siRNA质粒明显抑制细胞内survivin表达;TUNEL染色证实治疗组肿瘤细胞凋亡明显增加。结论:重组质粒survivin-siRNA明显抑制DU145细胞移植瘤的生长,抑制内源性survivin蛋白的表达并促进细胞凋亡,针对survivin靶点的基因治疗前景广阔。

关键词：小干扰RNA 前列腺肿瘤存活蛋白裸鼠

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吸烟相关剂量镉对大鼠心肌的损伤作用及其分子机制

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吉林大学学报（医学版） 2011年第4期37卷 591-595,F0002页

作者：顾俊莲王波刘亚男邵晨郭花李晓洁贾慧婕李馨殷迪李扬吉林大学白求恩医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:建立吸烟相关剂量镉的大鼠模型,研究吸烟相关剂量的镉对大鼠心肌的损伤作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法:建立吸烟相关剂量镉的Wistar大鼠模型作为模型组,同时设立生理盐水对照组,分别于20、36和52周处死大鼠,应用ICP-MS... 详细信息

目的:建立吸烟相关剂量镉的大鼠模型,研究吸烟相关剂量的镉对大鼠心肌的损伤作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法:建立吸烟相关剂量镉的Wistar大鼠模型作为模型组,同时设立生理盐水对照组,分别于20、36和52周处死大鼠,应用ICP-MS检测心肌组织中镉的蓄积量;绘制脏器系数曲线;生化试剂盒检测心肌组织肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;生化试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量;病理组织切片观察心肌形态改变;RT-PCR检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2及bax的变化;Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、bax、caspase-9及Fas的变化。结果:与对照组比较,模型组心肌组织镉含量在36和52周蓄积增加,差异有统计学意义(P<0.05);模型组心肌组织脏器系数在20和36周有略微下降趋势,52周下降明显,差异有统计学意义(P<0.05);模型组心肌组织中CK含量在20、36和52周含量均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);LDH含量在36和52周明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);模型组心肌组织SOD活性分别在36和52周明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);GSH的含量在20、36和52周明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);MDA的含量以20、36和52周明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察显示,模型组有心肌细胞紊乱、结缔组织局灶性增生等改变。RT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组心肌组织caspase-3、bax和Fas的表达明显增加(P<0.05),bcl-2表达明显减少(P<0.05)。结论:吸烟相关剂量镉通过心肌酶CK和LDH的泄漏,造成心肌组织氧化损伤,对心肌产生毒性作用,并最终导致心肌细胞凋亡的发生。

关键词：吸烟相关剂量镉大鼠 Wistar 心脏细胞凋亡

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survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达

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中华男科学杂志 2011年第1期17卷 21-26页

作者：刘艳波沈维高葛贺盖晓东芦丽莉赵雪俭北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春132001

目的:探讨survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化、RT-PCR和Western印迹法检测survivin和GRIM-19在正常前列腺(NP)组织、良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示s... 详细信息

目的:探讨survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化、RT-PCR和Western印迹法检测survivin和GRIM-19在正常前列腺(NP)组织、良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示survivin在NP、BPH和PCa组织中的表达率分别为6.25%、18.18%和90.62%(P<0.01);GRIM-19的表达率分别为87.50%、81.82%和9.37%(P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,在NP和BPH组织未检测到survivinmRNA表达,而PCa组织可检测到survivinmRNA高表达。Western印迹结果证实,在NP和BPH组织中有微量的survivin蛋白表达;而PCa组织可检测到survivin蛋白高表达;在NP和BPH组织中GRIM-19蛋白表达强阳性,而PCa组织中只有微量表达,两者比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:survivin和GRIM-19的表达可能与PCa的发生密切相关。

关键词： survivin GRIM-19 前列腺癌免疫组化 Western印迹

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共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒的构建及其功能研究

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吉林大学学报（医学版） 2010年第5期36卷 858-861页

作者：梁作文赵丽晶贾慧婕李馨高丽芳张灵赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒,观察其对人前列腺癌PC-3M细胞增殖能力的影响。方法:以基因重组技术构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒;应用真核细胞转染技术转染人前列腺癌PC-3M细胞,半定量RT-PCR法检测共表达质粒Stat3和G... 详细信息

目的:构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒,观察其对人前列腺癌PC-3M细胞增殖能力的影响。方法:以基因重组技术构建共表达siRNA-Stat3和GRIM-19质粒;应用真核细胞转染技术转染人前列腺癌PC-3M细胞,半定量RT-PCR法检测共表达质粒Stat3和GRIM-19mRNA水平的变化,细胞增殖实验观察其对前列腺癌细胞增殖能力的影响。结果:酶切鉴定证实成功构建siRNA-Stat3和GRIM-19共表达质粒;与对照组比较,实验组前列腺癌细胞Stat3mRNA表达显著降低,GRIM-19mRNA表达显著升高(P<0.01);实验组前列腺癌细胞增殖率明显降低(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-Stat3和GRIM-19共表达质粒,其对前列腺癌细胞株具有显著的生长抑制作用。

关键词：前列腺肿瘤 Stat3 GRIM-19 基因治疗

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Survivin-siRNA真核重组质粒的构建和鉴定及其对前列腺癌DU145细胞的影响

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中国老年学杂志 2010年第5期30卷 642-645页

作者：刘艳波葛贺卢丽莉赵雪俭吉林大学前列腺疾病防治研究中心北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013

目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响。方法构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染DU145细胞株,通过半定量RT-PCR和Western印迹检测survivinm... 详细信息

目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响。方法构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染DU145细胞株,通过半定量RT-PCR和Western印迹检测survivinmRNA转录水平和蛋白表达的变化。结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒;两种重组质粒shRNA-sur1和-sur2均能明显抑制内源性survivin基因表达,其抑制率分别为72%±8%和77%±5%;两种质粒均能明显抑制survivin蛋白的表达,其抑制率分别为75%±8%和80%±6%。结论重组质粒shRNA-sur1和-sur2均可明显抑制DU145细胞内源survivin蛋白表达和mRNA转录,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础。

关键词： siRNA DU145细胞株 survivin基因质粒

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Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

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中国病理生理杂志 2010年第8期26卷 1474-1478页

作者：刘艳波沈维高芦丽莉葛贺盖晓东赵雪俭北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。

关键词： RNA干扰 Survivin 前列腺肿瘤 DU145细胞细胞凋亡

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共表达p53及siRNA-VEGF质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

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中国实验诊断学 2010年第3期14卷 337-340页

作者：刘亚男邵月婷赵丹汲坤李晓洁邵晨王波张爽李馨李扬赵雪俭吉林大学白求恩医学院病理生理教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的构建可同时表达野生型p53(wt-p53)及siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53,siRNA-VEGF,p53/siRNA-VEGF及siRNA-scramble重组质粒。以脂... 详细信息

目的构建可同时表达野生型p53(wt-p53)及siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53,siRNA-VEGF,p53/siRNA-VEGF及siRNA-scramble重组质粒。以脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,PCR鉴定p53,VEGF基因的表达。结果克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-VEGF序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述五种真核重组表达载体。转染细胞48 h后可见GFP(siRNA-VEGF组)明显表达;RT-PCR检测到转染后PC-3细胞中wt-p53表达增强,而VEGF表达下调。结论p53/siRNA-VEGF共表达载体的构建及其在PC-3细胞中的表达为进一步研究wt-p53和VEGF双基因对人前列腺癌作用机制为治疗作用奠定了基础。

关键词： p53 VEGF RNAi 前列腺癌质粒

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Stat3、Survivin和Bcl-2在胃癌组织中的表达

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中国实验诊断学 2010年第1期14卷 73-75页

作者：孙莹吴荒王波张灵赵雪俭吉林大学前列腺疾病防治研究中心白求恩医学院病理生理教研室吉林长春130021 吉林大学第一医院吉林大学第二医院

目的探讨Stat3、Survivin和Bcl-2在胃癌组织中的表达情况。方法对42例胃癌组织和19例正常胃组织采用免疫组织化学方法分析,采用Mann-Whitney U法分析组间差异。结果胃癌组中Stat3、Survivin和Bcl-2表达阳性的分别有31例、29例和25例,正... 详细信息

目的探讨Stat3、Survivin和Bcl-2在胃癌组织中的表达情况。方法对42例胃癌组织和19例正常胃组织采用免疫组织化学方法分析,采用Mann-Whitney U法分析组间差异。结果胃癌组中Stat3、Survivin和Bcl-2表达阳性的分别有31例、29例和25例,正常组Stat3、Survivin和Bcl-2表达阳性的分别有2例、0例和3例,三者在两组间均存在统计学差异(P<0.01)。结论胃癌组织中Stat3、Survivin和Bcl-2表达上调,可能与肿瘤的发生和发展相关。

关键词：胃癌 Stat3 survivin Bcl-2 免疫组织化学

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