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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1017-1020页

作者：胡大利张雪松王华颖孙然任继玲王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林省血液中心吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺... 详细信息

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺激上清的抗病毒活性作为检测指标,优化各项实验条件,综合评定寡聚脱氧核苷酸的免疫调节活性。结果:成功建立了由阳性免疫调节性ODNA151抑制CpG ODN诱导的人PBMC增殖及抗病毒活性的筛选方法。结论:免疫调节性ODN筛选方法的成功建立,为下一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。

关键词：免疫调节寡聚脱氧核苷酸 CpG ODN 人外周血单个核细胞

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糖尿病和糖尿病肾病患者血清中糖基化终产物的检测

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吉林大学学报（医学版） 2003年第6期29卷 762-764页

作者：徐效义侯芳玉施雨露吉林大学基础医学院病原生物学教研室

目的 :研究糖基化终产物 ( AGEs)与糖尿病及糖尿病肾病的关系。方法 :用竞争性酶联免疫吸附测定 ( ELISA)法测定糖尿病 ( DM)、糖尿病肾病 ( DN)和 DN并发慢性肾功能不全 ( CRF)患者治疗前后血清 AGEs水平 ,以正常人血清作对照。结果 :D... 详细信息

目的 :研究糖基化终产物 ( AGEs)与糖尿病及糖尿病肾病的关系。方法 :用竞争性酶联免疫吸附测定 ( ELISA)法测定糖尿病 ( DM)、糖尿病肾病 ( DN)和 DN并发慢性肾功能不全 ( CRF)患者治疗前后血清 AGEs水平 ,以正常人血清作对照。结果 :DM患者血清 AGEs水平 [( 2 1 .3±6.0 ) mg· L-1 ]明显高于正常人 [( 1 0 .6± 3.1 ) mg· L-1 ]( P<0 .0 1 ) ;DN患者血清 AGEs水平[( 33.1± 9.3) mg·L-1 ]明显高于 DM( P<0 .0 1 ) ;DN并发 CRF患者血液透析治疗后血清 AGEs水平 [( 2 1 .7± 9.8) mg· L-1 ]低于治疗前 [( 36.3± 1 4 .1 ) mg· L-1 ]( P<0 .0 5 )。结论 :竞争性ELISA法可用来监测 DM和

关键词：糖尿病糖尿病肾病糖基化终产物酶联免疫吸附测定血清检测

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Ser176/180磷酸化位点突变的IKKα真核表达载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第9期31卷 1162-1166页

作者：何岩郑倩倩朱亚勤教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体。方法通过PCR获得带有IKKαSer176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/KpnⅠ以及KpnⅠ/EcoR... 详细信息

目的构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体。方法通过PCR获得带有IKKαSer176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/KpnⅠ以及KpnⅠ/EcoRⅠ双酶切,载体pEGFP经HindⅢ/EcoRⅠ双酶切后连接。共聚焦显微镜技术观察激活型/死型p EGFPIKKαKA/KD融合蛋白在真核细胞中的定位及其对P65核质易位的影响。Western blot法检测重组蛋白表达。结果测序显示载体构建成功。pEGFP-IKKαKA分布在细胞核和细胞质,并能使P65发生核穿梭。pEGFP-IKKαKD主要分布在细胞质,不能使P65发生核质易位。Western blot结果显示出融合蛋白的特异性条带。结论成功构建IKKα磷酸化位点激活型及死型的真核表达载体,在真核细胞中可有效表达。pEGFP-IKKαKA/KD在真核细胞中蛋白表达呈现不同定位,对下游P65的核质穿梭调控发挥不同效应。

关键词：核因子κB抑制剂激酶α 激酶突变型真核表达载体

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短期糖尿病大鼠血糖、糖化血清蛋白的动态变化及与体重、器官重量的相关分析

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白求恩医科大学学报 2001年第5期27卷 483-486页

作者：赵慧辛暨丽邹冬辉王忠山张小平吉林大学基础医学院细胞生物学教研室吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院妇产科

目的 :探讨糖尿病初期大鼠血糖、糖化血清蛋白及体重、器官重量的动态变化。方法 :Wistar雄性大鼠腹腔注射链脲菌素 (STZ)致糖尿病后分别观察 1d、3d、5 d、7d、14d,观察期满测血糖、糖化血清蛋白浓度 ,称体重、心、肝、脾、肺、肾、胸... 详细信息

目的 :探讨糖尿病初期大鼠血糖、糖化血清蛋白及体重、器官重量的动态变化。方法 :Wistar雄性大鼠腹腔注射链脲菌素 (STZ)致糖尿病后分别观察 1d、3d、5 d、7d、14d,观察期满测血糖、糖化血清蛋白浓度 ,称体重、心、肝、脾、肺、肾、胸腺重量。结果 :糖尿病大鼠体重明显减轻 ,体重负增长率与血糖正相关 ;胸腺、脾重量明显减轻 ;胸腺重量与血糖、糖化血清蛋白水平显著负相关 ;脾重与糖化血清蛋白水平显著负相关 ;心脏重量与血糖负相关 ;肾重增加 ,与糖化血清蛋白水平高度正相关。结论 :短期糖尿病大鼠体重和器官重量发生明显改变 ,这种变化与血糖或糖化血清蛋白水平有关。

关键词：糖尿病血糖糖化血清蛋白器官体重大鼠

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rhPGRN通过MAPK/PI3K通路调控自噬和内质网应激并促进细胞增殖

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中国病理生理杂志 2020年第6期36卷 1071-1081页

作者：罗瑞秦启忠刘敏尹丹旸郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室发育生物学与模式动物平台重庆400016

目的:探讨重组人颗粒体蛋白前体(rhPGRN)对人软骨细胞C28I2和小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖、自噬和内质网应激(ERS)的影响及作用机制。方法:采用Ni-NTA琼脂糖树脂对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,通过考马斯亮蓝染色、BCA法和Western ... 详细信息

目的:探讨重组人颗粒体蛋白前体(rhPGRN)对人软骨细胞C28I2和小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖、自噬和内质网应激(ERS)的影响及作用机制。方法:采用Ni-NTA琼脂糖树脂对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,通过考马斯亮蓝染色、BCA法和Western blot验证目的蛋白的浓度和纯度。将细胞随机分为对照组、rhPGRN组、U0126组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+巴弗洛霉素A1(Baf-A1)和rhPGRN+4-苯基丁酸(4-PBA)组,采用细胞计数法、Western blot和RT-qPCR检测rhPGRN对C28I2和RAW264. 7两种不同类型细胞增殖、自噬和ERS的影响。结果:(1)在含有His标签的PGRN稳转细胞株中成功提取高纯度、具有生物活性的人源重组蛋白rhPGRN。(2)rhPGRN能促进C28I2和RAW264. 7细胞的增殖,促进细胞周期相关分子(PCNA、cyclin B1和cyclin D1)的mRNA表达(P<0. 05),上调细胞周期调控蛋白Ki67表达,并提高增殖相关信号分子ERK和Akt蛋白的磷酸化水平(P<0. 05)。(3)ERK通路抑制剂U0126抑制了rhPGRN诱导的细胞增殖、自噬和ERS(P<0. 05);使用3-MA抑制PI3K/Akt通路后,rhPGRN诱导的细胞自噬被显著抑制(P<0. 05);自噬抑制剂Baf-A1和ERS抑制剂4-PBA显著下调了rhPGRN诱导的Ki67蛋白表达(P<0. 05)。结论:rhPGRN通过MAPK和PI3K/Akt通路调控自噬和ERS,从而促进C28I2和RAW264. 7细胞增殖。

关键词：重组人颗粒体蛋白前体真核表达细胞增殖自噬内质网应激

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发动蛋白及其蛋白超家族的功能

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生物化学与生物物理进展 2024年第11期51卷 2821-2831页

作者：杨紫雁蒋昭泓周倩仪陈志明南华大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室衡阳421000 国家卫健委出生缺陷研究与预防重点实验室长沙410008

发动蛋白(dynamin)作为一种复杂的多结构域蛋白质,因其在促进内吞囊泡形成和断裂,诱导囊泡从质膜脱离过程中发挥重要功能而广为人知。其经典功能是在网格蛋白介导型胞吞作用中发挥“膜剪刀”的作用,但是由于其结构和功能的多样性,不同... 详细信息

发动蛋白(dynamin)作为一种复杂的多结构域蛋白质,因其在促进内吞囊泡形成和断裂,诱导囊泡从质膜脱离过程中发挥重要功能而广为人知。其经典功能是在网格蛋白介导型胞吞作用中发挥“膜剪刀”的作用,但是由于其结构和功能的多样性,不同同源异构体间具有组织表达和分布差异性,促使其广泛参与细胞内重要的生理过程,因此具有重要的研究价值。近期研究揭示了发动蛋白的一些非经典功能,包括参与调控网格蛋白介导型胞吞作用(clathrin-mediated endocytosis,CME)的早期阶段、影响肌动蛋白细胞骨架和细胞分裂等。本文主要综述了发动蛋白在CME膜剪切过程中发挥经典功能的最新进展,总结了其非经典功能的挖掘现状,同时阐述了其他发动蛋白超家族蛋白(dynamin superfamily protein,DSP)成员的功能,如抵抗病原体入侵、参与调控线粒体、过氧化物酶体、液泡膜的分裂,以及线粒体、内质网、液泡、过氧化物酶体膜的融合,此外,DSP成员也在调节细胞器间的物质运输,介导细菌胞质分裂和囊泡分泌等方面发挥功能。本综述通过对DSP成员功能的总结和梳理,将为人类疾病相关的分子机制研究提供思路。

关键词：发动蛋白胞吞作用膜剪刀发动蛋白超家族蛋白

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雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

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南方医科大学学报 2019年第2期39卷 134-143页

作者：刘敏谢巍伟郑维尹丹旸罗瑞郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室//发育生物学与模式动物平台重庆400016

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处... 详细信息

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因(PCNA)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达ESR1能够促进E2处理后LC3和ATG7的表达,促进LC3和LAMP1在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleavedcaspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论 E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖,其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。

关键词： ESR1 自噬凋亡增殖 ERK信号通路雌二醇

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畸形精子症研究进展

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生殖与避孕 2007年第4期27卷 292-295,303页

作者：王瑞雪孙卉芳刘睿智吉林大学基础医学院细胞生物学教研室吉林省生殖医学研究所长春130021

正常的精子形态和结构是保证精子完成受精的基础。因此,精子形态和结构异常成为导致体内或体外受精失败的重要原因。本综述回顾近五年文献,对精子形态、结构上的异常进行分类描述,并探讨导致精子形态、结构异常的机制。

关键词：男性不育精子形态结构

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特发性无精或严重少精症患者生精基因微缺失的检测及临床意义

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吉林大学学报（医学版） 2004年第4期30卷 518-519,523页

作者：张家颖武广恒李晓梅陆艳娟李建伟陆培信李晓林王忠山吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心吉林长春130021 吉林大学基础医学院细胞生物学教研室吉林长春130021

目的 :探讨特发性无精或严重少精症生精基因微缺失的检测方法和临床意义。方法 :应用 PCR技术对 4 0例无精或严重少精的不育症患者进行 Y染色体 AZFa、 AZFb和 AZFc基因微缺失的检测。结果 :4例患者(10 % )存在 AZFa基因的微缺失 ,5例患... 详细信息

目的 :探讨特发性无精或严重少精症生精基因微缺失的检测方法和临床意义。方法 :应用 PCR技术对 4 0例无精或严重少精的不育症患者进行 Y染色体 AZFa、 AZFb和 AZFc基因微缺失的检测。结果 :4例患者(10 % )存在 AZFa基因的微缺失 ,5例患者 (12 .5 % )存在 AZFc基因的微缺失 ,SRY基因 PCR扩增结果均为阳性。阳性对照 (正常已育男性 )均无 AZFa、 AZFb、 AZFc和 SRY基因微缺失 ,阴性对照 (正常女性 )无基因扩增产物。结论 :在男性不育患者中 ,Y染色体 AZFa、AZFb和 AZFc基因微缺失是无精或严重少精症发生原因之一 ,生精基因检测可为正确诊断和合理治疗提供科学依据。

关键词：不育,男(雄)性 Y染色体 AZF微缺失基因缺失

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铜及赖氨酰氧化酶与胎膜早破的相关性研究

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中华妇产科杂志 2006年第1期41卷 7-11页

作者：张惠丹陈惠池单连峰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001 第二临床医院妇产科基础医学院数学教研室

目的探讨孕妇血清铜（Cu）、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶（LOX）、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性，以及与胎膜早破的关系。方法100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组，其中妊娠37～42周40例、34～36周^＋6 40例、28～33周^＋6 20例；与胎膜... 详细信息

目的探讨孕妇血清铜（Cu）、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶（LOX）、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性，以及与胎膜早破的关系。方法100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组，其中妊娠37～42周40例、34～36周^＋6 40例、28～33周^＋6 20例；与胎膜早破组孕周、例数相对应的100例非胎膜早破孕妇作为对照组。应用火焰原子吸收法检测两组孕妇血清Cu和羊膜Cu水平，荧光发光法检测羊膜LOX水平，免疫组化法和图像分析法检测羊膜Ⅲ型胶原水平。将不同孕周孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原测定结果进行直线相关分析，并比较胎膜早破组与对照组在这些指标上的差异。结果（1）妊娠37—42周：两组孕妇血清Cu与羊膜Cu水平呈正相关，r为0．82（P〈0．001），其他各指标均无相关关系。（2）妊娠34～36周^＋6和28～33周^＋6：两组孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原水平之间均呈正相关（P〈0．01）。（3）妊娠37～42周：两组孕妇血清Cu水平与羊膜Cu比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；胎膜早破组及对照组孕妇羊膜LOX水平分别为（0．53±0．10）和（0．75±0．10）μg／g（P〈0．01），羊膜Ⅲ型胶原吸光度（A）值分别为0．36±0．01和0．37±0．01（P〈0．05）；（4）妊娠34—36周^＋6：胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为（115．23±9．56）、（139．03±10．59）mg／L，羊膜Cu水平分别为（0．19±0．04）、（0．29±0．04）μg／mg，羊膜LOX水平分别为（0．54±0．10）、（0．70±0．13）μg／g，羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0．36±0．01、0．37±0．01。胎膜早破组以上各指标均低于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（5）妊娠28～33周^＋6：胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为（120．31±8．04）、（136．40±8．21）μg／L，羊膜Cu水平分别为（0．21±0．04）、（0．26±0．03）μg／mg，羊膜LOX水平分别为（0．62±0．09）、（0．72±0．09）μg／g，羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0．35±0．01、0．38±0．01。胎膜早破组以上各指标均低于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论足月妊娠的胎膜早破孕妇，其羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原水平下降不受血清Cu水平的影响，这可能与羊膜的退行性变加快有关；未足月妊娠的胎膜早破孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原的水平降低则与胎膜早破的发生直接相关。

关键词：胎膜早破铜蛋白赖氨酸6-氧化酶胶原Ⅲ型

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