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猪源ISG15蛋白通过促进炎症因子释放和巨噬细胞死亡加剧胸膜肺炎放线杆菌感染

微生物学通报 2025年第2期52卷 713-724页

作者：甘林文宇田岩岩张开心李丰阳雷连成李娜吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

【背景】猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起的一种呼吸道疾病,该病死亡率可达80%–100%。干扰素刺激基因15(interferon-stimulated genes 15,ISG15)蛋白可抑制病毒的复制,但其在APP... 详细信息

【背景】猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起的一种呼吸道疾病,该病死亡率可达80%–100%。干扰素刺激基因15(interferon-stimulated genes 15,ISG15)蛋白可抑制病毒的复制,但其在APP方面的研究尚不清楚。【目的】构建猪源ISG15原核表达载体,纯化ISG15蛋白并研究其对APP感染的影响。【方法】构建pET-28a-ISG15原核表达载体,纯化获得ISG15蛋白。采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测ISG15蛋白处理后肺泡巨噬细胞死亡情况和炎症因子表达水平。建立APP感染小鼠模型,鼻内给药ISG15后,检测小鼠体重、临床症状及存活情况,分析ISG15对APP致病性的影响。【结果】获得了ISG15蛋白。相较于单独攻菌组,ISG15添加组的肺泡巨噬细胞死亡率、炎症因子IL-6和IFN-γ表达水平均显著升高(P<0.05)。在小鼠试验中,相较于单独攻菌组,中剂量和高剂量ISG15组小鼠的临床症状及死亡率显著上升,肺组织IL-6、IFN-γ和IL-1β表达水平显著增加。【结论】ISG15通过促进肺泡巨噬细胞死亡和炎症因子的释放加剧APP的感染,为APP防治技术的研发提供了理论基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 ISG15 炎症因子巨噬细胞

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旋毛虫C型凝集素的表达及其对小鼠的免疫调节作用

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 441-448页

作者：秦千策宋军澎 Mahdi Borhani 张藜潇丁静吉林大学人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 青岛普瑞森医药科技有限公司山东青岛266000 新疆医科大学省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆乌鲁木齐830000

探讨旋毛虫C型凝集素(TsCTL)对小鼠的免疫调节作用。将TsCTL基因(GenBank登录号KRY42391.1)克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-TsCTL,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将重组TsCTL(rTsCTL)纯化、复性,并通过Western-blot鉴定,同时测定内毒素水平。使用rTsCTL刺激小鼠脾细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,并采用qPCR检测脾细胞转录因子的表达水平。将10只C57BL/J小鼠随机分为对照组(n=5)和实验组(n=5)。实验组小鼠每只皮下注射50μg的rTsCTL(溶解在200μL PBS中),每周3次,持续4周。对照组则使用等量的PBS进行相同处理。收集实验组和对照组小鼠的脾细胞,并使用ELISA和qPCR检测细胞因子和转录因子的表达水平。最后,采用流式细胞术检测调节性T细胞的增殖情况。结果显示:rTsCTL对脾细胞无毒性。qPCR结果表明,rTsCTL能够提高小鼠脾细胞中Gata3和Foxp3的表达水平,同时降低T-bet的表达水平。动物实验的qPCR结果与细胞实验的结果一致。ELISA结果显示,rTsCTL促进了TGF-β和IL-4的表达,而抑制了IFN-γ的表达。流式细胞术检测结果表明,rTsCTL能够增加调节性T细胞的比例。这些结果表明,rTsCTL可以促进Th2型免疫反应,并抑制Th1型免疫反应。

关键词：旋毛虫 C型凝集素免疫调节

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梅花鹿源奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性

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微生物学通报 2025年第5期 2230-2243页

作者：曹润来王奇林孙春庆薛竹青刘子瑜胡盼王晓旭刘志杰中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室临沂市畜牧发展促进中心吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究所教育部重点实验室

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理... 详细信息

【背景】奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）是重要的人畜共患病病原，可引起梅花鹿仔鹿腹泻，给梅花鹿养殖业造成严重危害。【目的】鉴定引起吉林省某梅花鹿场仔鹿腹泻病的细菌性病原种类及其生物学特性，并确定该病原造成的主要病理特征。【方法】收集腹泻病空肠内容物，通过细菌分离培养、革兰氏染色、显微镜镜检、16SrRNA基因及atpD基因测序和进化树分析等方法鉴定细菌种类。采集腹泻鹿的空肠、肺、肝、脾、肾和心等组织样品制作病理切片。通过检测毒力基因、生物膜形成能力、耐药性与耐药基因，以及部分菌株的小鼠致病性分析该菌的生物学特性。【结果】共鉴定出3株奇异变形杆菌，分别命名为SKPM1、SKPM2、SKPM3。3株菌均携带ureC、zapA、atfC、atfA、rsbA、ucaA和pmfA等7种毒力基因，具有生物膜形成能力；3株菌对青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、四环素、多黏菌素B等抗生素表现出多重耐药性，并检测出bla TEM、bla CTX-M、tetB、ant（3″）-I、sul2等耐药基因；致病性上菌株SKPM2的LD50为3.98×10～7 CFU/mL。【结论】本研究分离鉴定了3株梅花鹿源奇异变形杆菌，并研究了其生物学特性，为该菌引起的仔鹿腹泻病的防治和深入研究提供了实验基础。

关键词：梅花鹿仔鹿腹泻奇异变形杆菌生物学特性

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NEFA诱导奶牛原代肝细胞中HIF-2α的表达

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中国兽医学报 2025年第4期 745-751页

作者：杨子凤孔繁榕孙岩刘梦林李金霞赵晨晨雷林李心慰吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室

酮病是围产期奶牛常见的能量代谢紊乱疾病,主要病理因素为能量负平衡（NEB）所致的高非酯化脂肪酸（NEFA）血症。由于肝脏无法完全氧化过量的NEFA,导致其不完全氧化生成大量酮体或重新酯化沉积于肝脏,最终引发酮病和脂肪肝。在各种肝病... 详细信息

酮病是围产期奶牛常见的能量代谢紊乱疾病,主要病理因素为能量负平衡（NEB）所致的高非酯化脂肪酸（NEFA）血症。由于肝脏无法完全氧化过量的NEFA,导致其不完全氧化生成大量酮体或重新酯化沉积于肝脏,最终引发酮病和脂肪肝。在各种肝病病程中,肝脏微环境缺氧现象普遍存在。缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）在脂代谢调控中发挥着关键作用。然而,HIF-2 α与奶牛酮病中肝脂代谢紊乱的关系尚不明确。本研究旨在利用奶牛肝脏组织和体外分离的原代奶牛肝细胞,探究高浓度NEFA对肝细胞氧稳态和HIF-2α表达的影响。在体内,通过测量奶牛肝脏组织中甘油三酯（TAG）含量明确肝脏脂蓄积程度,通过免疫组化染色、Western blot和qRT-PCR检测肝脏HIF-2α的蛋白表达水平和基因转录水平;在体外试验中,向原代奶牛肝细胞添加不同浓度的NEFA,通过油红染色和TAG含量检测测定脂肪变性程度,并利用免疫荧光染色、Western blot和qRT-PCR检测HIF-2α的表达水平,同时使用[Ru（dpp）3]Cl2缺氧探针检测细胞内氧水平。研究结果显示,酮病奶牛肝脏中TAG含量显著增加、HIF-2α蛋白和mRNA表达水平显著上调,高浓度NEFA诱导原代奶牛肝细胞中脂质蓄积和HIF-2α表达水平显著上调,且伴随细胞内缺氧现象。该研究表明,HIF-2α在酮病奶牛肝脏和高浓度NEFA诱导的原代奶牛肝细胞中均显著“激活”,并揭示高浓度NEFA可诱导肝细胞缺氧,为进一步研究酮病奶牛肝脂代谢紊乱的分子机制提供了潜在靶点。

关键词：奶牛酮病脂肪肝缺氧缺氧诱导因子-2α

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miR-142-5p过表达慢病毒载体的构建及对小鼠肠道上皮细胞的影响

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中国兽医学报 2025年第4期 678-684页

作者：孙奕成王静何雨殊董子健丁静吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGF... 详细信息

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGFP Puro,测序无误后命名该重组载体为plenti-miR-142-5p。将重组质粒和包装辅助质粒共转染293T细胞,包装产生miR-142-5p过表达慢病毒载体(LV-miR-142-5p)。收取重组慢病毒悬液,利用超速离心沉淀法浓缩,Real-time PCR测定病毒滴度。将病毒悬液尾静脉注射6～8周龄BALB/c小鼠,解剖取其结肠组织进行HE染色并在显微镜下观察。结果显示miR-142-5p同源重组入plenti载体,测序结果与预期序列一致。plenti-miR-142-5p与包装辅助质粒共转染293T细胞,根据绿色荧光表达情况确认转染成功,Real-time PCR结果显示慢病毒滴度为1.23×10～9 IU/mL。小鼠结肠组织切片显示感染组结肠完整性受损,出现明显炎症反应。证明miR-142-5 p可诱导小鼠肠上皮细胞损伤。

关键词： miR-142-5p 慢病毒肠道上皮细胞

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泛素特异性蛋白酶47调控狂犬病病毒感染的功能研究

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中国兽医学报 2025年第2期45卷 266-273页

作者：张艳楠武梦阳王重阳董浩淼果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染... 详细信息

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染对USP47表达水平的影响,然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示,RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平均上升,上清中病毒滴度也随之升高,同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低;敲低USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平降低,上清中病毒滴度也相应降低,IL-6基因水平升高。结果表明,USP47可促进RABV感染,抑制IL-6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

关键词：狂犬病病毒泛素特异性蛋白酶47 白细胞介素6

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羊肠道病毒胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2025年第4期 662-667页

作者：郑学博崔续媛闫乃天王倩颖李宏伟陈丽慧龚文杰王新平吉林大学动物医学学院吉林省公主岭市动物疫病预防控制中心吉林大学人兽共患病研究所教育部人兽共患病重点实验室

为建立一种快速检测羊肠道病毒（CEV）的免疫层析方法,以鼠源抗CEV VP1单克隆抗体作为金标抗体,以兔源抗CEV VP1多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别作为检测线和质控线,应用双抗体夹心原理制备CEV胶体金免疫层析试纸条,并对该方法的性能及临床... 详细信息

为建立一种快速检测羊肠道病毒（CEV）的免疫层析方法,以鼠源抗CEV VP1单克隆抗体作为金标抗体,以兔源抗CEV VP1多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别作为检测线和质控线,应用双抗体夹心原理制备CEV胶体金免疫层析试纸条,并对该方法的性能及临床应用等方面进行评估。结果显示,该方法能够特异性的检测出CEV,与牛肠道病毒、牛病毒性腹泻病毒无交叉反应;该方法最低检测限为102.49TCID50/mL,且具有良好的重复性;制备的试纸条于4℃条件下,有效期为3个月;应用该方法与RT-PCR方法检测部分临床样品,两者的符合率为100%。综上所述,本研究建立了检测新发CEV的胶体金免疫层析试纸条方法,组装的试剂条具有良好的特异性与敏感性,且操作简便,为CEV感染的现场快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

关键词：羊肠道病毒双抗体夹心胶体金免疫层析试纸条 VP1蛋白

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BALB/c小鼠肠道主要原虫感染情况的分子流行病学调查

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 514-518页

作者：郑瑜张西臣荣尧李建华宫鹏涛王晓岑岳涛涛李新张旭张楠吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室吉林长春130062

分别对国内4家BALB/c小鼠供应商提供的540只BALB/c小鼠进行肠道原虫检测。其中,供应商A 140只,供应商B 130只,供应商C 135只,供应商D 135只。分别采集每只小鼠的新鲜粪便样本以提取基因组,并根据人五毛滴虫(Pentatrichomonas hominis,*... 详细信息

分别对国内4家BALB/c小鼠供应商提供的540只BALB/c小鼠进行肠道原虫检测。其中,供应商A 140只,供应商B 130只,供应商C 135只,供应商D 135只。分别采集每只小鼠的新鲜粪便样本以提取基因组,并根据人五毛滴虫(Pentatrichomonas hominis,***)、泰泽隐孢子虫18S rRNA基因序列引物进行巢氏PCR扩增,利用鼠三毛滴虫(Tritrichomonas muris,***)16S-like rRNA基因序列引物进行PCR扩增并测序,以检测BALB/c小鼠肠道原虫的感染状况。结果显示,供应商A提供的140份小鼠粪便样本中,总肠道原虫感染率为7.1%(10/140),其中,***虫阳性率为7.1%(10/140)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri,***)阳性率为2.1%(3/140)、***阳性率为7.1%(10/140),2种肠道原虫共感染率为7.1%(10只:***+***)、3种肠道原虫共感染率为2.1%(3只:***+***+***)。供应商C提供的135份小鼠粪便样本中,总肠道原虫感染率为7.4%,其中,***阳性率为7.4%(10/135),未检出***和***感染。供应商B提供的130份小鼠粪便样本和供应商D提供的135份小鼠粪便样本中均未检出肠道原虫感染。遗传进化分析结果显示,本研究扩增的*** 16S-like rRNA基因序列与GenBank发表的***的16S-like rRNA基因具有98.52%的同源性(GenBank No:AY886846.1),并且在遗传进化树中聚类为一独立分支;*** 18S rRNA基因序列与GenBank发表的*** 18S rRNA基因具有98.27%的同源性(GenBank ***156964.1),聚为一独立分支;*** 18S rRNA基因序列与GenBank发表的*** 18S rRNA基因同源性为99.87%(GenBank ***000486.1)。综上,本研究对不同实验动物供应商提供的BALB/c小鼠进行肠道寄生虫检测,发现存在不同程度的肠道原虫感染情况,并发现有***、***和***等3种以上寄生虫共感染的现象,从而为今后预防和制定有效的防控策略提供科学依据。

关键词：鼠三毛滴虫人五毛滴虫泰泽隐孢子虫 BALB/c小鼠

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自噬与蛋白酶体途径在布鲁菌感染巨噬细胞过程中的相互作用

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 507-513页

作者：董炳梅梁萌萌许文雅王君宋立立任洪林沧州师范学院生命科学学院河北沧州061001 吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为了探明巨噬细胞(macrophage,M_(φ))感染布鲁菌(Brucella)后泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)在对抗Brucella过程中的相互作用关系,一方面将猪种布鲁菌(Brucella suis,***)分别体外感染M_(φ)和腹腔接种BALB/c小鼠,并对细胞上清液和腹腔液中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行了测定,结果显示***感染过程中UPS首先被激活,随后ALP途径发挥作用;另一方面,应用3-MA、乳胞素分别制备ALP抑制态M_(φ)与UPS抑制态M_(φ)并接种***,随后对细胞上清中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行测定,结果显示当M_(φ)UPS功能被抑制时,ALP作用被显著提高;而ALP功能被抑制时,UPS活性未有显著变化。最后,将不同状态M_(φ)接种***后,对***的胞内增殖能力进行测定,结果显示当UPS与ALP功能被同时抑制时,***的胞内增殖能力显著降低,且UPS对***胞内增殖的促进作用强于ALP。结果表明,Brucella感染M_(φ)过程中UPS与ALP存在相互作用关系,在理论上可为Brucella与宿主细胞相互作用机制的研究提供新思路。

关键词：自体吞噬泛素蛋白酶体途径布鲁菌巨噬细胞

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应用免疫沉淀-质谱联用技术筛选细粒棘球绦虫抗体识别分子

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 519-526页

作者：吴小霞丁静金雪敏张壮志张藜潇刘明远吉林大学动物医学学院/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 新疆畜牧科学院兽医研究所/国家动物包虫病参考实验室新疆乌鲁木齐830010

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线... 详细信息

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线预测软件对肽段覆盖率最高的蛋白进行生物信息学分析。结果显示,IP-MS鉴定得到133种细粒棘球绦虫相关蛋白,其中肽段覆盖率≥70%的有1种蛋白,为肌动蛋白;肽段覆盖率为30%~40%的有3种蛋白,分别为含Ton B结构域蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物2、乳酸脱氢酶;肽段覆盖率为20%~30%的有6种蛋白,分别为剪接因子3b亚基5、肿瘤蛋白D52、表达的保守蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物7、肌苷-5′-单磷酸脱氢酶和醛酮还原酶家族1成员B4。生物信息学分析显示,肌动蛋白无信号肽,可能为非分泌型蛋白,亚细胞定位在细胞骨架,存在6个最佳潜在抗原表位,二级结构和三级结构一致以α螺旋和无规则卷曲为主。结果表明,免疫沉淀-质普联用技术是筛选和鉴定细粒棘球绦虫抗原的一种高通量、简便、快速有效的方法,可为筛选中间宿主羊血清诊断标识的特异分子及包虫病新型诊断技术的研发提供依据。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫免疫沉淀-质谱联用技术抗体识别分子生物信息学分析

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