检索结果-内蒙古大学图书馆

表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用

吉林大学学报（医学版） 2011年第2期37卷 196-201,F0002页

作者：周杨朱建国唐小春闫森宋娜张明军李莉欧阳红生逄大欣吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧... 详细信息

目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达。而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达。结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段。

关键词： Cre-pCEP4 Cre/loxP重组系统猪胚胎成纤维细胞 MCF-7细胞系

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慢病毒介导的猪CD4启动子在白血病Jurkat细胞中的启动作用

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 187-191,F0002页

作者：林晓晨杨鑫曹宇航焦丽戴甄任林柱逄大欣吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

目的:研究异种基因启动子在Jurkat细胞中调节外源基因表达的作用,为人类白血病动物模型的建立提供理论依据。方法:利用生物信息学手段预测并克隆出猪CD4基因启动子,然后利用克隆的猪CD4基因启动子构建和包装慢病毒载体。包装的病毒经过... 详细信息

目的:研究异种基因启动子在Jurkat细胞中调节外源基因表达的作用,为人类白血病动物模型的建立提供理论依据。方法:利用生物信息学手段预测并克隆出猪CD4基因启动子,然后利用克隆的猪CD4基因启动子构建和包装慢病毒载体。包装的病毒经过滴度检测和侵染293T细胞及Jurkat细胞后进行绿色荧光蛋白检测,比较猪CD4基因启动子与EF-1α启动子启动的外源基因表达情况。结果:成功预测出猪CD4基因启动子,成功构建慢病毒载体并包装出病毒。经过病毒滴度测定及侵染293T细胞和Jurkat细胞表明,2种启动子在细胞中的启动绿色荧光蛋白的效果相近。结论:猪CD4基因启动子在白血病Jurkat细胞中没有特异性启动外源基因,猪CD4基因启动子可以作为一种在Jurkat细胞中启动外源基因的不同选择。

关键词： CD4基因慢病毒 Jurkat细胞 293T细胞启动子

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转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达及其意义

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吉林大学学报（医学版） 2011年第1期37卷 6-10页

作者：刘洋金波郭斌赵丽红韩玉帅岳占碰张学明吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

目的:检测Ets家族转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达,探讨其对小鼠睾丸发育的调控及其对精原干细胞(SSCs)增殖、分化的可能影响。方法:取生后第1、5、10、15、20、25、30、35、40、50和70天的小鼠睾丸组织,对成年小鼠进行白消安... 详细信息

目的:检测Ets家族转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达,探讨其对小鼠睾丸发育的调控及其对精原干细胞(SSCs)增殖、分化的可能影响。方法:取生后第1、5、10、15、20、25、30、35、40、50和70天的小鼠睾丸组织,对成年小鼠进行白消安***-1腹腔注射,分别在注射后第0、3、5、8、10和18天取睾丸组织,用半定量RT-PCR方法对比内参β-actin在对应组织内的表达水平,分析Ets1、Ets2mRNA在睾丸组织中的相对表达量。结果:Ets1的表达量在生后第1～30天显著高于出生后第35天(P<0.05或P<0.01),之后明显降低并保持稳定;Ets2在生后第1～25天表达量显著高于第35天(P<0.05或P<0.01),之后明显下降并保持稳定。白消安处理后,Ets1的表达量于第5天降至最低,随后逐渐恢复,第9天后基本达到处理前水平并保持相对稳定,其中第5、8天表达量均显著低于处理后第0天(P<0.05或P<0.01);Ets2的表达量在白消安处理后前期变化不明显,第10天时明显降低,与第0和18天比较差异有统计学意义(P<0.05),之后缓慢回升,第18天左右恢复至处理前水平。结论:转录因子Ets1和Ets2可能对睾丸早期发育、成年精子发生的维持及精原细胞的增殖、分化具有调节作用。

关键词： Ets转录因子家族 Ets1 Ets2 睾丸白消安小鼠

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ER81在白消安模型小鼠睾丸和附睾中的表达及其意义

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 180-182页

作者：金波刘洋车冠宇孙艺学张学明吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

目的:检测Ets家族转录因子ER81在白消安模型小鼠睾丸及附睾中的表达水平,探讨其对精原细胞增殖和分化的影响。方法:成年小鼠腹腔注射白消安10 ***-1,分别在注射后第0、3、5、8、10和18天取睾丸和附睾,半定量RT-PCR分析ER81 mRNA的相对... 详细信息

目的:检测Ets家族转录因子ER81在白消安模型小鼠睾丸及附睾中的表达水平,探讨其对精原细胞增殖和分化的影响。方法:成年小鼠腹腔注射白消安10 ***-1,分别在注射后第0、3、5、8、10和18天取睾丸和附睾,半定量RT-PCR分析ER81 mRNA的相对表达量。结果:在睾丸组织内,与第0天比较,ER81的表达量在第5天显著降低(P<0.01),随后基本恢复;在附睾组织内,与第0天比较,ER81表达量于第8天显著降低(P<0.05),并随后恢复。结论:转录因子ER81可能对精原细胞的分化有调节作用。

关键词： Ets家族转录因子ER81 睾丸附睾白消安小鼠

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与细胞衰老相关的sirtuin家族

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生命的化学 2010年第5期30卷 744-750页

作者：朱建国周杨段新平逄大欣欧阳红生吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室长春130062

衰老是发育过程中的普遍现象,是生理功能衰退过程中呈现的一系列特定变化,趋向于疾病发生的复杂过程。细胞衰老是由于端粒缩短、DNA损伤、氧化应激和原癌基因激活中特征分子的改变等产生的一种生理变化。本篇综述通过总结衰老信号通路... 详细信息

衰老是发育过程中的普遍现象,是生理功能衰退过程中呈现的一系列特定变化,趋向于疾病发生的复杂过程。细胞衰老是由于端粒缩短、DNA损伤、氧化应激和原癌基因激活中特征分子的改变等产生的一种生理变化。本篇综述通过总结衰老信号通路中的年龄相关基因sirtuins家族与核因子(NF)-κB转录因子家族、p53、FoxO、PGC-1、mTOR等的相互作用,为我们研究衰老进程并在延缓衰老和自然死亡方面提供了可靠的依据。

关键词：细胞衰老 sirtuins家族 p53 NF-κB FoxO PGC-1 mTOR

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不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌发育及二倍体形成的影响

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中国兽医学报 2011年第8期31卷 1218-1222页

作者：赵天闯张鹏陈玥高飞唐博李子义吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

卵母细胞的孤雌激活是研究哺乳动物受精机制和发育机理的有效方法,也是细胞核移植、显微注射受精技术、孤雌胚胎干细胞等研究内容中的重要环节。本试验分别用乙醇、SrCl2、钙离子载体A23187对小鼠卵母细胞进行单独孤雌激活,并分别与6-D... 详细信息

卵母细胞的孤雌激活是研究哺乳动物受精机制和发育机理的有效方法,也是细胞核移植、显微注射受精技术、孤雌胚胎干细胞等研究内容中的重要环节。本试验分别用乙醇、SrCl2、钙离子载体A23187对小鼠卵母细胞进行单独孤雌激活,并分别与6-DMAP联合运用,对小鼠卵母细胞进行联合孤雌激活。结果显示:(1)不同激活剂单独或联合激活,对卵母细胞的激活率有显著影响(P<0.05),SrCl2组的激活率最高(92%～94%);(2)相同激活剂对卵母细胞孤雌囊胚的发育率在单独激活组(SrCl2组,18%)和联合激活组(SrCl2+6-DMA组,53%)中存在显著差异(P<0.05);(3)相同激活剂对卵母细胞二倍体率在单独激活组(钙离子载体A23187组,21%)和联合激活组(钙离子载体A23187+6-DMA组,77%)中均存在显著差异(P<0.05)。结果表明:(1)SrCl2可以对小鼠卵母细胞进行有效的孤雌激活;(2)联合激活法可以显著提高孤雌卵母细胞的囊胚发育率;3、6-DMAP可以抑制第二极体排出,显著提高孤雌激活卵母细胞的二倍体率。

关键词：孤雌激活二倍体小鼠

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血小板源性生长因子(PDGF-BB)促进山羊骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化

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中国兽医学报 2008年第8期28卷 939-942页

作者：张舒周杨关思宇梁霄玉欧阳红生吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

将血小板源性生长因子(PDGF-BB)作用于骨髓间充质细胞,分别于5、7d后用抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体进行免疫组化分析,定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达,透射电镜观察细胞超微结构。免疫组化结果显示,PDGF-BB诱导组表达α-SMA... 详细信息

将血小板源性生长因子(PDGF-BB)作用于骨髓间充质细胞,分别于5、7d后用抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体进行免疫组化分析,定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达,透射电镜观察细胞超微结构。免疫组化结果显示,PDGF-BB诱导组表达α-SMA的细胞数约为95%,而对照组表达α-SMA的细胞数约为5%。免疫组化图象分析结果显示,5、7d PDGF-BB诱导组抗α-SMA着色平均灰度值小于对照组。RT-PCR结果显示,PDGF-BB诱导组有α-SMA mRNA表达,而对照组则没有。透射电镜显示,骨髓间充质细胞经过诱导后细胞浆内出现肌丝样结构。结果表明,PDGF-BB可以促进骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化。

关键词：骨髓间充质干细胞血小板源性生长因子平滑肌细胞

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骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ转基因猪胚胎成纤维细胞克隆的构建与鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 192-196页

作者：袁婷刘帅李小平唐成程韩晓蕾逄大欣欧阳红生吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;... 详细信息

目的:构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有FSⅠ-Ⅰ基因的细胞克隆,为研究FSⅠ-Ⅰ对猪骨骼肌的影响奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从猪骨骼肌中扩增FS A(包含FS N端和结构域FSⅠ)和结构域FSⅠ;利用PCR方法分别从鼠基因组、人血液基因组和pcDNA3.1(+)载体上扩增出MCK增强子、ACTA 1启动子和BGHpolyA。将上述4个片段分别连接到真核表达载体pGKneotpAlox2上,构建骨骼肌特异性表达FSⅠ-Ⅰ(包含FS N端和2个连续FSⅠ结构域)的载体pGK-MCK-ACTA 1-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA;用FuGENE○RHD转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果:成功构建骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的表达载体pGK-MCK-ACTA1 promoter-FSⅠ-Ⅰ-BGHpolyA,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论:获得了骨骼肌特异性表达猪FSⅠ-Ⅰ的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过核移植方法获得表达FSⅠ-Ⅰ转基因猪提供了供体细胞。

关键词：卵泡抑素猪胚胎成纤维细胞真核表达

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WT1基因组蛋白乙酰化修饰对细胞核重编程的影响

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 325-328页

作者：高飞刘丽梅安培培谭文涛唐博李子义吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

利用体细胞移植技术获得克隆动物的成功是几十年来生命科学领域取得的重大突破之一,这项技术引起了社会的广泛关注。然而,由于哺乳动物克隆效率低下,且克隆后代发育异常等问题,已成为目前制约动物克隆技术发展和应用的瓶颈。克隆动物中... 详细信息

利用体细胞移植技术获得克隆动物的成功是几十年来生命科学领域取得的重大突破之一,这项技术引起了社会的广泛关注。然而,由于哺乳动物克隆效率低下,且克隆后代发育异常等问题,已成为目前制约动物克隆技术发展和应用的瓶颈。克隆动物中经常出现后代过大综合征(LOS),该病导致克隆动物早产、难产和易夭折。LOS类似于人的伯-伟综合征(BWS),BWS也称为Wlims瘤,表现为巨舌、内脏肿大等症状。研究发现BWS的发病机理与WT1基因(Wilms’tumor 1gene)异常表达有关。本文对体细胞核重编程和表观遗传学调控细胞重编程的研究进展进行综述,并对WT1基因组蛋白乙酰化修饰与体细胞重编程之间的联系进行简要介绍,以期为生命科学领域的进一步探索与研究提供借鉴。

关键词：重编程组蛋白乙酰化 WT1基因克隆胚胎

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表达FLP重组酶pCEP4-FLP载体的构建及其在FLP/FRT重组系统中的应用

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河北师范大学学报（自然科学版） 2012年第3期36卷 291-296页

作者：肖雪宾袁婷纪元宋奇韩晓蕾武蓉林晓晨欧阳红生李莉吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

构建重组载体pCEP4-FLP和pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP,重组载体pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP瞬时转染PK-15细胞24h后,再将重组载体pCEP4-FLP瞬时转染该细胞,利用荧光显微镜观察PK-15细胞GFP蛋白的表达情况,利用细胞流式技术统计绿色荧光蛋白表达... 详细信息

构建重组载体pCEP4-FLP和pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP,重组载体pEF1a-FRT-stop-FRT-GFP瞬时转染PK-15细胞24h后,再将重组载体pCEP4-FLP瞬时转染该细胞,利用荧光显微镜观察PK-15细胞GFP蛋白的表达情况,利用细胞流式技术统计绿色荧光蛋白表达效率.结果表明:重组载体pCEP4-FLP在细胞内能够表达FLP重组酶,并且表达的FLP重组酶能够识别FRT位点,删除两同向FRT位点间的DNA片段,为FLP/FRT位点特异性重组系统在转基因猪的应用奠定了基础.

关键词： FLP/FRT系统位点特异性重组 PK-15细胞系

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