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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 472-476页

作者：董超刘迪冯业童刘朋飞吴璇吴昊昱周余来吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

目的:从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法:超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休... 详细信息

目的:从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法:超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休克细胞外泌体,进一步用220nm的滤膜进行纯化获得纯度较高的外泌体。采用透射电镜观察所提取外泌体表征形态,聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析细胞和外泌体的蛋白组成,检测外泌体促进外周血单个核细胞(PBMCs)的增殖功能。结果:透射电镜下正常的外泌体和细胞热休克获得的外泌体形态相近,均呈现典型的圆形或椭圆形外泌体结构,直径为50～100nm。聚丙烯酰胺凝胶电泳,结直肠癌细胞裂解物与结直肠癌细胞系来源外泌体的蛋白组成不同,与未处理和经热休克处理的结直肠癌细胞比较,外泌体对PBMCs的增殖有更强的促进作用(P<0.05),热休克作用可使外泌体诱导的PBMCs的增殖程度显著升高(P<0.05)。结论 :超速离心法和滤膜过滤方法可有效地从结直肠癌细胞系中提取外泌体,细胞裂解物和外泌体的蛋白组成差异可能是造成免疫学特性差异的主要原因,将细胞经热休克处理可增强外泌体的免疫原性。

关键词：结直肠肿瘤外泌体热休克免疫治疗

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非灌流法分离大鼠肝星形细胞及其鉴定

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1220-1222页

作者：刘朋飞周余来冯业童吴昊昱刘迪董超吴璇石毅吉林大学药学院生物工程实验中心长春130021

目的采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定。方法采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smo... 详细信息

目的采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定。方法采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(Desmin)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。结果非灌流法结合酶消化法可成功分离大鼠HSC;密度梯度离心纯化的HSC经油红染色,细胞核周围可见红色脂滴;该细胞中α-SMA、结蛋白及GFAP的免疫组化染色结果均呈阳性,细胞着色率可达90%以上。结论成功建立了大鼠HSC的非灌流分离模式,所获得的HSC纯度较高,该方法稳定简便,具有一定的推广应用价值。

关键词：肝星形细胞非灌流细胞分离

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Exosomes在肿瘤免疫方面的研究进展

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中国生物制品学杂志 2010年第4期23卷 441-444页

作者：朱磊李响刘朋飞周余来吉林大学药学院生物工程实验中心长春130021

Exosomes是由细胞多囊体形成的一种膜性小囊泡,其来源十分广泛。Exosomes的功能最初被认为仅仅是降解内吞物质,但经多年来的研究发现,exosomes的特异功能与其来源细胞密切相关。其携带多种独特的蛋白,如黏附蛋白、热休克蛋白等,它们在... 详细信息

Exosomes是由细胞多囊体形成的一种膜性小囊泡,其来源十分广泛。Exosomes的功能最初被认为仅仅是降解内吞物质,但经多年来的研究发现,exosomes的特异功能与其来源细胞密切相关。其携带多种独特的蛋白,如黏附蛋白、热休克蛋白等,它们在信号传导中起重要作用。由于exosomes能够传递抗原给T细胞,使其在免疫系统中也具有重要作用,可作为一种免疫治疗的新手段,应用于肿瘤治疗和免疫耐受等方面。本文主要对exosomes诱导抗肿瘤免疫应答和免疫抑制两方面的功能机制作一综述。

关键词： Exosomes 肿瘤免疫应答免疫抑制

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Exosomes的生物学特性及其在肿瘤免疫治疗中应用的研究进展

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中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 925-928页

作者：冯业童刘朋飞董超周余来吉林大学药学院生物工程实验中心长春130021

Exosomes是一种由活细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡,来源于多囊体,大小为50～100 nm。Exosomes表面有大量与其结构和功能密切相关的蛋白质和脂质成分,多种细胞均可分泌Exosomes。Exosomes具有多种重要功能,尤其对肿瘤的免疫治疗具有重要... 详细信息

Exosomes是一种由活细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡,来源于多囊体,大小为50～100 nm。Exosomes表面有大量与其结构和功能密切相关的蛋白质和脂质成分,多种细胞均可分泌Exosomes。Exosomes具有多种重要功能,尤其对肿瘤的免疫治疗具有重要作用。树突细胞和肿瘤细胞来源的Exosomes在肿瘤免疫治疗方面具有良好的治疗效果,已成为近年来肿瘤学研究的一个热点。本文对Exosomes的生物起源、生物学特性、生理功能及其在肿瘤诊断和免疫中的作用机制作一综述。

关键词： Exosomes 肿瘤免疫治疗

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维生素在肝纤维化治疗中的研究进展

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中国老年学杂志 2013年第12期33卷 3003-3004页

作者：刘迪董超李彤刘朋飞石毅吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

脂肪肝及肝纤维化发病率极高，几乎发生于所有慢性肝损伤患者，严重者发展为肝硬化乃至肝癌，全世界每年约有140万慢性肝病患者因肝纤维化和肝硬化导致死亡，肝病治疗已经成为一个世界性的公共健康问题。老年肝纤维化患者会呈现出疲惫... 详细信息

脂肪肝及肝纤维化发病率极高，几乎发生于所有慢性肝损伤患者，严重者发展为肝硬化乃至肝癌，全世界每年约有140万慢性肝病患者因肝纤维化和肝硬化导致死亡，肝病治疗已经成为一个世界性的公共健康问题。老年肝纤维化患者会呈现出疲惫、食欲、神智、肤色、饮酒量等多个方面的不良反应，

关键词：维生素肝纤维化

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表皮生长因子受体与肿瘤治疗的研究进展

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中国老年学杂志 2010年第14期30卷 2078-2080页

作者：赵青崔海丹周余来吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

肿瘤的发生,复发,转移是一个十分复杂的过程,近年来人们逐渐发现基因变异与恶性肿瘤的发生,发展密切相关.原癌基因的激活即基因变异是导致肿瘤发生的原因之一.表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)是一种酪氨酸激酶... 详细信息

肿瘤的发生,复发,转移是一个十分复杂的过程,近年来人们逐渐发现基因变异与恶性肿瘤的发生,发展密切相关.原癌基因的激活即基因变异是导致肿瘤发生的原因之一.表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)是一种酪氨酸激酶受体,在细胞周期中起重要作用,与细胞生长,增殖,迁移有关.其编码基因是一种原癌基因,在生理状态下它不表达或只是有限制的表达,处于非激活状态,不具有致癌性.如果编码该受体的基因发生突变,将会导致多余的表皮生长因子受体产生,增强了细胞信号的传导,便容易诱发肿瘤.表皮生长因子受体的过度活化与肿瘤生长和分级(包括增殖,血管发生,浸润和转移)的关键过程有关.目前,以EGFR作为肿瘤靶标的研究比较多.本文就近年来EGFR与肿瘤发生相关性和靶向治疗的研究进展做一简要综述

关键词：表皮生长因子受体肿瘤治疗

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结肠癌细胞源exosomes的分离鉴定及其表面蛋白CD44v6的表达

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中国老年学杂志 2010年第16期30卷 2330-2332页

作者：刘朋飞朱磊李响孙一夫石毅丛登立王浩天周余来吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

目的探索结肠癌colo205细胞系对exosomes的分泌功能,并分析热休克作用对表面蛋白CD44v6表达量的影响。方法采用超速离心法分离colo205细胞分泌的exosomes和热休克处理后colo205细胞分泌的exosomes(Heat shocked exosomes,HS-Exo),经220nm微孔滤膜过滤纯化后,在透射电镜下观察其形态,并用SDS-PAGE方法分析细胞与exosomes的蛋白组成,Western Blot检测表面CD44v6的表达情况。结果经透射电镜观察,正常exosomes与HS-Exo形态基本相似,均为圆形或椭圆形膜性囊泡,直径大多在30～100nm之间,且经热休克处理的colo205细胞及其分泌的HS-Exo,在CD44v6表达量上较正常colo205细胞及exosomes显著上调(P<0.05)。结论结肠癌colo205细胞系可分泌exosomes,且超速离心结合滤膜过滤的分离纯化方法切实可行;热休克作用可使CD44v6表达上调,说明HS-Exo较exosomes可能在肿瘤免疫治疗方面有更重要的应用价值。

关键词：结肠癌 exosomes CD44v6 肿瘤免疫

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贴壁生长与悬浮生长树突细胞的免疫学功能比较

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中国老年学杂志 2010年第10期30卷 1403-1405页

作者：刘朋飞朱磊李响葛超卓周余来吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

目的探索树突细胞(DCs)的可能生长状态,比较分析不同生长状态DCs的免疫学功能。方法从正常人外周血分离获得单个核细胞,用不同培养介质常规培养2h,取贴壁细胞,用含细胞因子的培养液进行培养,在培养过程中光镜下对其进行形态鉴别,然后检... 详细信息

目的探索树突细胞(DCs)的可能生长状态,比较分析不同生长状态DCs的免疫学功能。方法从正常人外周血分离获得单个核细胞,用不同培养介质常规培养2h,取贴壁细胞,用含细胞因子的培养液进行培养,在培养过程中光镜下对其进行形态鉴别,然后检测两种DCs促淋巴细胞增殖和诱导免疫反应的功能。结果 7d后,培养瓶中DCs基本处于悬浮状态,而培养板中DCs基本处于贴壁状态;培养瓶中DCs与培养板中DCs形态与理论相符,但培养板中DCs分化形态优于培养瓶中DCs。而在体外促进淋巴细胞增殖及体外诱导免疫反应方面,培养瓶中DCs的能力优于培养板中DCs。结论在DCs体外培养至发育成熟的过程中,DCs先贴壁后悬浮的生长性质可能对其免疫学功能有着重要意义。

关键词：树突细胞细胞培养生长状态免疫学功能

来源：评论

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树突细胞在直肠癌免疫治疗中的研究进展

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中国老年学杂志 2009年第22期29卷 2988-2990页

作者：李响刘朋飞朱磊周余来吉林大学药学院生物工程实验中心吉林长春130021

直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤,其发病率仅次于胃癌和食道癌,是大肠癌的最常见部位(占65%左右),且患病人群以中老年为主。由于老年人的脏器功能较青年人有所减退,且易患多种疾病,故老年人直肠癌相对中青年有其特殊性。对于直肠癌处理... 详细信息

直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤,其发病率仅次于胃癌和食道癌,是大肠癌的最常见部位(占65%左右),且患病人群以中老年为主。由于老年人的脏器功能较青年人有所减退,且易患多种疾病,故老年人直肠癌相对中青年有其特殊性。对于直肠癌处理的手段通常所采用的方法是直肠系膜的整体切除并结合放射疗法。但是复发率高,严重影响了患者的生活质量。目前,免疫治疗已经被认为是继放疗、化疗、手术切除之后的第4种肿瘤治疗模式,主要有肿瘤抗原疫苗、多肽疫苗、基因疫苗以及树突细胞(DC)疫苗等,其中以DC疫苗为基础的主动免疫治疗,已成为最近研究的热点。[第一段]

关键词：树突细胞直肠癌疫苗免疫疗法

来源：评论

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结肠癌源性exosomes的分离及其相关免疫学性质

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中国生物制品学杂志 2012年第12期25卷 1635-1637,1643页

作者：冯业童刘朋飞吴昊昱刘迪董超吴璇周余来孙波吉林大学药学院生物工程实验中心长春130021 吉林大学药学院病理教研室长春130021

目的分离结肠癌细胞株的exosomes,并分析其在致敏抗原呈递细胞及激活相关效应细胞过程中的作用。方法差速离心法分离体外培养的正常exosomes和经热休克处理的sw1116细胞(Heat shocked sw1116,HS-sw1116)分泌的exosomes(Heat shocked exo... 详细信息

目的分离结肠癌细胞株的exosomes,并分析其在致敏抗原呈递细胞及激活相关效应细胞过程中的作用。方法差速离心法分离体外培养的正常exosomes和经热休克处理的sw1116细胞(Heat shocked sw1116,HS-sw1116)分泌的exosomes(Heat shocked exosomes,HS-Exo),并在电子显微镜下观察exosomes和HS-Exo的形态结构;SDS-PAGE初步分析exosomes和HS-Exo的蛋白组分,CCK-8法检测其促外周血单个核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMCs)增殖的能力。结果电子显微镜观察,exosomes和HS-Exo的形态学结构无明显差异,其平均直径约为150 nm;exosomes和HS-Exo的蛋白条带分布情况基本相同,在高相对分子质量区域蛋白分布较多;exosomes比sw1116细胞更易引起PBMCs的增殖反应,HS-sw1116细胞和HS-Exo促PBMCs增殖的作用比sw1116细胞和exosomes更明显(P<0.05)。结论结肠癌sw1116细胞株可分泌exosomes,其比肿瘤细胞更易引起PBMCs的增殖,热休克处理可进一步增强细胞和exosomes的促PBMCs增殖的能力,exosomes在结肠癌免疫治疗方面具有重要的应用价值。

关键词：结肠癌 exosomes 热休克免疫治疗

来源：评论

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