检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 1999年第2期39卷 100-107页

作者：程继忠皇甫永穆海涛梁驹卿肖红同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室

将外源基因———日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因克隆到大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒中，构建成四个不同的表达截体，研究它们在耻垢后分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ）中的表达效率。首先将... 详细信息

将外源基因———日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因克隆到大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒中，构建成四个不同的表达截体，研究它们在耻垢后分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａｔｉｓ）中的表达效率。首先将含有结核杆菌热休克蛋白７０（ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ７０）的启动子的质粒ｐＭＴ７０用ＮｃｏＩ切，进行两种不同的修饰后，得到不同的ＳＤ序列；将Ｓｊ２６ＧＳＴ基因克隆进去。再将含ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的片段切下，克隆到分枝杆菌大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ２０００中，筛选出不同ＳＤ序列、不同方向和不同拷贝数的分枝杆菌表达载体四个。所表达的重组天然Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白，在ＳＤＳＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带。通过薄层扫描分析，发现表达质粒中双拷贝启动子外源基因组合，表达效率最高，是单拷贝组合的１６倍，占分枝杆菌菌体总蛋白的２８％。而不同的克隆方向和不同的ＳＤ序列（两者相差３个碱基）对表达效率的影响不明显。

关键词：上游调控序列表达效率分枝杆菌 GST基因

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大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用

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生物工程学报 1999年第2期15卷 225-229页

作者：程继忠郑波海涛皇甫永穆同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室同济医科大学职业医学研究所

利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓ... 详细信息

利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）抗原基因在卡介苗（ＢａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅＧｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｓｐ）７０基因全长序列的质粒ｐＭＴ７０为模板，扩增出ｈｓｐ７０启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭质粒ｐＢＣＧ２０００中，构建成Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００。再将编码ＧＳＴ的ｃＤＮＡ按正确的阅读框顺序，克隆到ｐＢＣＧ２１００中ｈｓｐ７０启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒ｐＢＣＧＧＳＴ。将ｐＢＣＧＧＳＴ电转化入ＢＣＧ中，筛选出重组ＢＣＧ疫苗，经热诱导后所表达的重组ＧＳＴ（ｒＧＳＴ）抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在ＳＤＳＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带，其表达量占ＢＣＧ菌体总蛋白的１３％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ提示ｒＧＳＴ能与?

关键词：穿梭表达质粒 GST 基因表达纯化卡介苗

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三结构域重组纤连蛋白多肽在大肠杆菌中表达及其产物的纯化与鉴定

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同济医科大学学报 1999年第5期28卷 381-384页

作者：李明才冯作化李东张桂梅同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室

在大肠杆菌中表达了一种抗肿瘤转移多肽——人纤连蛋白（ＦＮ）的ＣｅｌｌＩ－Ｈｅｐ Ⅱ－ＣｅｌｌⅡ三结构域重组多肽（ＣＨ８２），表达效率达２１％。在低温（２２ ℃）培养表达时，ＣＨ８２大部分为可溶性产物，经ＤＥＡＥ... 详细信息

在大肠杆菌中表达了一种抗肿瘤转移多肽——人纤连蛋白（ＦＮ）的ＣｅｌｌＩ－Ｈｅｐ Ⅱ－ＣｅｌｌⅡ三结构域重组多肽（ＣＨ８２），表达效率达２１％。在低温（２２ ℃）培养表达时，ＣＨ８２大部分为可溶性产物，经ＤＥＡＥ－５２层析及Ｈｅｐａｒｉｎ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析可得到纯品；在高温（３７ ℃）培养表达时，ＣＨ８２主要以包涵体形式出现，经尿素变性与复性处理后，可通过Ｈｅｐａｒｉｎ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析得到纯品。所得纯品均具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ更强，

关键词：纤连蛋白重组多肽表达蛋白纯化肿瘤转移

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重组FN多肽CH50及IFN-γ对化疗小鼠免疫功能影响的比较

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同济医科大学学报 1999年第3期28卷 191-193页

作者：曹慧青冯作化张桂梅张慧范曲同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室

腹腔连续注射ＣＨ５０或腹腔内转染ＩＦＮ－γ基因能减弱或防止化疗药物对免疫功能的抑制作用，减轻或防止化疗药物使外周血单核细胞数量和腹腔细胞的数量降低（Ｐ＜０．０５），促进巨噬细胞代谢活性、杀瘤活性以及分泌细胞因子的能力... 详细信息

腹腔连续注射ＣＨ５０或腹腔内转染ＩＦＮ－γ基因能减弱或防止化疗药物对免疫功能的抑制作用，减轻或防止化疗药物使外周血单核细胞数量和腹腔细胞的数量降低（Ｐ＜０．０５），促进巨噬细胞代谢活性、杀瘤活性以及分泌细胞因子的能力（Ｐ＜０．０５，＜０．０１）；促进脾淋巴细胞的增殖反应能力（Ｐ＜０．０５，＜０．０１）。注射ＣＨ５０的作用早于ＩＦＮ－γ基因转染的作用。结果提示ＣＨ５０可改善肿瘤化疗药物疗效。

关键词：重组多肽干扰素 FN 免疫功能肿瘤药物疗法

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白细胞介素2(IL-2)基因和γ干扰素(IFN-γ)基因体内转染巨噬细胞对恢复化疗所致免疫功能损伤的研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 1999年第3期8卷 251-255页

作者：周滨姜志尧同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉430030

用磷酸钙——ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ８ＩＦＮγ真核表达质粒或／和ρＲＥＰ８ＩＬ２真核表达质粒直接注射至经大剂量化疗后的小鼠腹腔内，成功地转染腹腔巨噬细胞（Ｍφ）。ＩＬ２基因和ＩＦＮγ基因联合转染... 详细信息

用磷酸钙——ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ８ＩＦＮγ真核表达质粒或／和ρＲＥＰ８ＩＬ２真核表达质粒直接注射至经大剂量化疗后的小鼠腹腔内，成功地转染腹腔巨噬细胞（Ｍφ）。ＩＬ２基因和ＩＦＮγ基因联合转染Ｍφ较ＩＬ２或ＩＦＮγ基因转染Ｍφ，其基因表达产物水平更高，显著地刺激脾脏增生，增强淋巴细胞的增殖，增强腹腔Ｍφ的细胞毒活性，促使腹腔Ｍφ分泌白细胞介素１（ＩＬ１）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和ＮＯ。结果表明，双基因转染效果优于单基因转染，ＩＬ２和ＩＦＮγ基因联合转染Ｍφ更有助于由放疗、化疗所致受损的免疫功能恢复。

关键词：基因转染 IL-2基因 IFN-γ基因 Mφ 免疫损伤的恢复化疗

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百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化

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同济医科大学学报 1999年第1期28卷 17-20页

作者：郑波程继忠皇甫永穆海涛戴五星王建平同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室同济医科大学公共卫生学院劳动卫生与职业病教研室

研究了百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位与谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合蛋白（ＧＳＴ－Ｓ１）在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达，并一步纯化了重组ＧＳＴ－Ｓ１。首先用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长度为５６０ｂｐ的编码百日咳毒素Ｓ１亚单位... 详细信息

研究了百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位与谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合蛋白（ＧＳＴ－Ｓ１）在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达，并一步纯化了重组ＧＳＴ－Ｓ１。首先用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长度为５６０ｂｐ的编码百日咳毒素Ｓ１亚单位的ＤＮＡ片段。该片段比原编码Ｓ１蛋白的ＤＮＡ片段在其３′端缺失了１３８个碱基，将其按正确的阅读框克隆入质粒ｐＧＥＸ中ＧＳＴ基因的３′端，构成ＧＳＴ－Ｓ１融合基因表达载体ｐＧＥＸ－Ｓ１。经异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），可见所表达的ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白存在于细菌上清，为可溶性蛋白。分子量为４９ｋｕ处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析系统，一步纯化出ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白。最后经凝血酶的消化，得到２３ｋｕ的重组百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位蛋白。

关键词：百日咳杆菌毒素 S1亚单位基因表达疫苗

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乙肝病毒特异性核酶的构建及体外切割活性的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第2期19卷 40-44页

作者：祁学忠肖红温淑娟黄镇华周荣同济医科大学实验医学研究中心分子生物学研究室第三军医大学微生物学教研室广州南方医院基因技术中心

目的对我国伯氏考克斯体（Ｃｂ）分离株的２３ＳｒＲＮＡ基因插入片段（２３ＳＩＶＳ）作核酸序列分析。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增７株Ｃｂ中国分离株和２株外国参考株的２３ＳＩＶＳ，用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序。结... 详细信息

目的对我国伯氏考克斯体（Ｃｂ）分离株的２３ＳｒＲＮＡ基因插入片段（２３ＳＩＶＳ）作核酸序列分析。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增７株Ｃｂ中国分离株和２株外国参考株的２３ＳＩＶＳ，用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序。结果重庆，四川，内蒙分离株以及Ｈｅｎｚｅｒｌｉｎｇ和Ｇｒｉｔａ等６株的ＩＶＳ序列均相同，ＹＳ－８，ＹＳ－９和ＹＨ－１１等云南分离株的ＩＶＳ与前６株的比较仅少一个７个碱基的重复序列。结论Ｃｂ２３ＳＩＶＳ为高度保守基因片段，与高度异质性的钩端螺旋体的同源性基因片段不同；云南株和其它６株的ＩＶＳ差别与Ｃｂ分离株的地理分布的不同有关，云南分离株可能为一亚种

关键词：考克斯体.伯氏 RNA.核糖体.23S DNA插入元件

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结核杆菌HSP70在耻垢分枝杆菌中的表达及其免疫原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 337-341页

作者：程继忠郑波肖红梁驹卿皇甫永穆同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室

目的在重组分枝杆菌中表达编码人结核杆菌（ＴＢ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的ＤｎａＫ基因，并观察其对小鼠的免疫效应。方法采用基因工程和免疫学技术将ＤｎａＫ基因及其两侧的表达调控区一起从质粒ｐＭＴ－７０中切出，经末端修... 详细信息

目的在重组分枝杆菌中表达编码人结核杆菌（ＴＢ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的ＤｎａＫ基因，并观察其对小鼠的免疫效应。方法采用基因工程和免疫学技术将ＤｎａＫ基因及其两侧的表达调控区一起从质粒ｐＭＴ－７０中切出，经末端修饰后装入大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构建成新的重组质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０，并用以转化耻垢分枝杆菌及大肠杆菌，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的ＨＳＰ７０；以重组耻垢分枝杆菌分别经皮下及腹腔免疫小鼠，用淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ法检测巨噬细胞吞噬活性，并检测血清中特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体。结果ＴＢＨＳＰ７０能在分枝杆菌中表达，表达量占菌体总蛋白量的１０％，不能在大肠杆菌中表达；重组耻垢分枝杆菌以１０６ＣＦＵ的剂量经皮下免疫小鼠后，可使小鼠脾淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）和腹腔巨噬细胞吞噬活性增高（Ｐ＜０．０５），并能刺激机体产生特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体，腹腔免疫激发的抗体滴度较皮下免疫为低，而ＳＩ无明显改变。结论构建的表达质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０能在耻垢分枝杆菌中表达ＨＳＰ７０，该重组菌具有较强的免疫原性。

关键词：结核分枝杆菌基因转移免疫原性表达

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日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第6期14卷 661-667页

作者：程继忠皇甫永穆海涛梁驹卿同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链... 详细信息

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术，以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板，经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序，克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０的启动子下游，再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原，所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见，Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．

关键词： BCG 日本血吸虫 26kD抗原基因基因表达

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体内IL-2基因转染小鼠腹腔巨噬细胞的抗肿瘤作用

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癌症 1998年第5期17卷 346-348页

作者：周滨姜志尧冯作化湖北武汉同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室430030

目的：研究ＩＬ２基因体内转染小鼠腹腔巨噬细胞，探讨基因的表达，抗肿瘤作用及其机理。方法：采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ８ＩＬ２真核表达质粒直接注射至小鼠腹腔，转染腹腔巨噬细胞。结果：ＩＬ２基因可成功... 详细信息

目的：研究ＩＬ２基因体内转染小鼠腹腔巨噬细胞，探讨基因的表达，抗肿瘤作用及其机理。方法：采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法，将ｐＲＥＰ８ＩＬ２真核表达质粒直接注射至小鼠腹腔，转染腹腔巨噬细胞。结果：ＩＬ２基因可成功地转染腹腔巨噬细胞（ＭФ），并表达基因产物，能有效地抑制肿瘤的生长，转基因ＭФ及其表达产物可使脾ＮＫ活性和内源性ＬＡＫ活性增强，能增加腹腔ＭФ细胞毒活性并使ＭФ分泌ＴＮＦ、ＩＬ１和ＮＯ的水平增加。结论：本实验能有效地激活机体的非特异性免疫功能，从而发挥抗肿瘤效应。

关键词： IL-2基因基因转染抗肿瘤作用小鼠巨噬细胞

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