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低氧环境下EphrinB2/EphB4调控MC3T3⁃E1细胞成骨分化的实验研究

口腔疾病防治 2023年第9期31卷 618-624页

作者：刘紫杉王一鑫李永明上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学院同济大学附属口腔医院正畸科上海200072

目的探讨低氧环境下促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2/促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4(erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor ligand B2/erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor B4,EphrinB2/EphB4)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响,为低氧调控成骨细胞分化提供实验依据。方法设置对照组与氯化钴诱导的低氧组,对MC3T3-E1细胞进行分组培养,应用qRT-PCR检测细胞成骨标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)、I型胶原(collogen-1,COL I)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达变化,ALP染色检测细胞成骨诱导7 d后ALP活性。同时通过qRT-PCR与Western blot检测两组MC3T3-E1细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白表达。然后增设氯化钴+EphB4磷酸化抑制剂组(加入EphB4磷酸化抑制剂NVP-BHG712)阻止EphrinB2与EphB4结合,通过qRT-PCR与Western blot检测三组成骨标志物ALP、RUNX2、COL I、OCN的mRNA与蛋白表达,ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨诱导后ALP活性及矿化情况。结果与对照组相比,在氯化钴诱导的体外细胞低氧环境下,MC3T3-E1成骨标志物ALP、RUNX2、COL 1、OCN mRNA表达增加,ALP活性增强,矿化增强(P<0.05)。同时,在氯化钴诱导的低氧环境下,HIF-1α、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白水平表达增加(P<0.05)。使用NVP-BHG712阻止EphrinB2和EphB4的结合后,细胞的成骨标志物表达下降,ALP活性及矿化能力降低(P<0.05)。结论低氧环境可通过EphrinB2/EphB4信号通路促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,增加成骨标志物的表达及组织矿化。

关键词：低氧诱导因子-1α 促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2 促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4 成骨分化低氧骨代谢碱性磷酸酶骨钙素

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内源性透明质酸对小鼠牙乳头细胞增殖的影响

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口腔医学研究 2024年第7期40卷 593-598页

作者：黄海燕颜燕宏刘塬吴佳艳宋宸宇蒋备战同济大学附属口腔医院儿童口腔科同济大学口腔医学院上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学研究所上海200072

目的:探究内源性透明质酸(hyaluronan, HA)对小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells, mDPCs)增殖的影响。方法:对出生后2.5 d的小鼠腹腔注射5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)标记快速增殖细胞;体外分... 详细信息

目的:探究内源性透明质酸(hyaluronan, HA)对小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells, mDPCs)增殖的影响。方法:对出生后2.5 d的小鼠腹腔注射5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)标记快速增殖细胞;体外分离培养mDPCs,使用不同浓度透明质酸酶(hyaluronidase, HAase)降解HA,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法及EdU法检测细胞增殖;使用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡;转染siHyal2抑制HA降解,EdU法检测细胞增殖。结果:HA主要表达在小鼠切牙根尖慢增殖间充质细胞周围,而在转运扩增细胞(transit-amplifying cells, TACs)表达下降;CCK-8结果显示,相比对照组,800μg/mL HAase明显促进细胞增殖(P<0.0001);EdU检测及流式细胞术结果显示,HAase处理48 h后,细胞DNA合成增加,S期细胞比率明显增加(P<0.01),并抑制早期细胞凋亡(P<0.05);与之相反,当HA积聚在mDPCs细胞周,细胞增殖受到抑制(P<0.01)。结论:内源性HA与mDPCs增殖密切相关,HA分解可促进细胞增殖;而局部HA的积聚则抑制细胞增殖。

关键词：细胞外基质透明质酸透明质酸酶2 细胞增殖

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低氧对大鼠牙周组织成骨及成血管能力影响的初步研究

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实用口腔医学杂志 2023年第3期39卷 307-312页

作者：王洁朱锐李永明同济大学口腔医学院·附属口腔医院正畸二科上海牙组织修复与再生工程技术研究中心200072

目的:探讨低氧对大鼠牙周组织成骨、成血管能力的影响。方法:20只1周龄SPF级雄性Wistar大鼠随机分为单侧鼻阻塞组(unilateralnasalobstruction,UNO)和假手术组(SHAM),每组10只。同一饲养条件饲养8周后,采用RT-qPCR法、Westernblot、免... 详细信息

目的:探讨低氧对大鼠牙周组织成骨、成血管能力的影响。方法:20只1周龄SPF级雄性Wistar大鼠随机分为单侧鼻阻塞组(unilateralnasalobstruction,UNO)和假手术组(SHAM),每组10只。同一饲养条件饲养8周后,采用RT-qPCR法、Westernblot、免疫荧光染色、组织切片染色等方法,比较两组大鼠牙周组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性磷酸酶(ALP)的表达差异。结果:低氧条件下,UNO大鼠牙周组织中HIF-1α、VEGF、ALP表达均显著升高(P<0.05)。结论:低氧激活大鼠牙周组织HIF-1α/VEGF信号通路,促进牙周膜中ALP的表达。

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征牙周炎低氧诱导因子-1α 成骨成血管

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大肠杆菌脂多糖对大鼠牙囊干细胞生物学行为的影响

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口腔医学研究 2023年第6期39卷 534-540页

作者：姜震颜燕宏韩雪蒋备战同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院儿童口腔科上海牙组织修复与再生工程技术研究中心上海200072

目的:探究大肠杆菌脂多糖(*** LPS)对大鼠牙囊干细胞(rDFSCs)生物学行为的影响。方法:体外培养鉴定rDFSCs,使用不同浓度(0、1、10μg/mL)*** LPS处理细胞,通过qRT-PCR检测炎症因子的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell... 详细信息

目的:探究大肠杆菌脂多糖(*** LPS)对大鼠牙囊干细胞(rDFSCs)生物学行为的影响。方法:体外培养鉴定rDFSCs,使用不同浓度(0、1、10μg/mL)*** LPS处理细胞,通过qRT-PCR检测炎症因子的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色分别评估rDFSCs的矿化情况,并利用qRT-PCR检测其成骨相关基因表达水平。结果:相比于对照组,LPS组IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达水平升高(P<0.05);1μg/mL LPS促进rDFSCs增殖及迁移能力(P<0.05),而10μg/mL LPS对其增殖、迁移影响不明显;LPS处理后ALP染色降低、矿化结节数量减少,且成骨标志物RUNX2、COL1及OPN表达下降(P<0.05)。结论:*** LPS模拟的炎症微环境下,rDFSCs成骨分化能力受到明显抑制,低浓度(1μg/mL)LPS刺激可促进rDFSCs的增殖和迁移。

关键词：脂多糖牙囊干细胞细胞增殖细胞迁移成骨分化

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唾液链球菌对小鼠口腔黏膜慢性炎症的治疗作用

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口腔医学研究 2023年第1期39卷 62-67页

作者：张诗徐盼郭艺婷邵如如赵若闻何园上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学院同济大学附属口腔医院口腔黏膜教研室上海200072

目的:利用口腔黏膜慢性炎症模型,对唾液链球菌(Streptococcus salivarius,Ss)的抗炎作用进行初步研究。方法:(1)健康成年SPF级C57BL/6小鼠75只,随机分为5组,空白对照(CON)组、慢性炎症(CI)组、唾液链球菌治疗(CI+SS)组、糖皮质激素治疗(... 详细信息

目的:利用口腔黏膜慢性炎症模型,对唾液链球菌(Streptococcus salivarius,Ss)的抗炎作用进行初步研究。方法:(1)健康成年SPF级C57BL/6小鼠75只,随机分为5组,空白对照(CON)组、慢性炎症(CI)组、唾液链球菌治疗(CI+SS)组、糖皮质激素治疗(CI+GC)组和单独使用唾液链球菌(CON+SS)组各15只。4周后收集病损部颊黏膜,经苏木素-伊红(HE)染色后观察其病理变化及炎性细胞浸润情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测病损局部白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)和叉头框蛋白3(Foxp3)的mRNA表达改变,采用免疫荧光染色法检测病损局部IL-6的蛋白表达情况。(2)健康成年SPF级C57BL/6小鼠45只,随机分为3组,CON组、CI组及CI+SS组各15只。4周后收集外周血,通过酶联免疫吸附法检测血清中IL-17A的表达水平,采用流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例。结果:(1)与CI组相比,CI+SS组病损局部炎性细胞浸润减少,IL-1β、IL-6和TNF-α的表达降低,IL-6阳性细胞减少(P<0.001);(2)CI+SS组病损组织中IL-10、IL-17和Foxp3的表达降低(P<0.01),血清IL-17A的表达降低(P<0.001),外周血Th17/Treg细胞比例下降(P<0.001)。结论:Ss局部使用具有改善口腔黏膜慢性炎症的作用,其机制可能是通过改善Th17/Treg分化失衡从而维持局部免疫平衡。

关键词：唾液链球菌慢性炎症治疗

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鼻阻塞模型大鼠下颌骨自噬水平的变化

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中国组织工程研究 2022年第35期26卷 5633-5638页

作者：徐怡馨王一鑫李永明上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学院同济大学附属口腔医院正畸科上海市200072

背景:低氧状态下细胞自噬状态易被激活,而自噬水平对骨代谢的调控作用已经被证明。睡眠呼吸暂停使机体处于间歇低氧状态,而睡眠呼吸暂停诱发的低氧是否影响下颌牙槽骨及牙周膜的自噬水平未见报道。目的:观察机体低氧状态下对大鼠下颌自... 详细信息

背景:低氧状态下细胞自噬状态易被激活,而自噬水平对骨代谢的调控作用已经被证明。睡眠呼吸暂停使机体处于间歇低氧状态,而睡眠呼吸暂停诱发的低氧是否影响下颌牙槽骨及牙周膜的自噬水平未见报道。目的:观察机体低氧状态下对大鼠下颌自噬水平的影响。方法:将30只1周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,单侧鼻阻塞组、双侧鼻阻塞组分别构建幼年大鼠单侧及双侧鼻阻塞模型,麻醉30 min后用高频电刀电灼阻塞大鼠的左鼻孔,1周后同样方法阻塞双侧鼻阻塞组右侧鼻孔;对照组不处理鼻孔。单侧鼻阻塞建模成功4周后,模型大鼠5周龄时麻醉处死取下颌骨,制备下颌第一磨牙牙周骨组织切片,进行苏木精-伊红染色和LC3免疫组化染色,利用Image-J图像分析系统对染色后的切片做定位定量分析。Western blot法检测下颌牙槽骨缺氧标志蛋白低氧诱导因子1α、自噬相关蛋白p62的蛋白表达水平,以及自噬标志蛋白LC3亚型LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色显示,单侧鼻阻塞组、双侧鼻阻塞组模型大鼠下颌牙槽骨骨小梁排列混乱;(2)免疫组化结果显示,单侧鼻阻塞组、双侧鼻阻塞组下颌第一磨牙牙槽骨细胞及牙周膜细胞胞浆LC3表达升高,提示自噬主要发生在牙周膜及牙槽骨区;(3)Western blot结果显示,与对照组相比,单侧鼻阻塞组、双侧鼻阻塞组模型大鼠下颌牙槽骨组织低氧诱导因子1α蛋白的表达水平显著升高,p62蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.05);而双侧鼻阻塞组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较单侧鼻阻塞组稍下降(P>0.05);(4)提示大鼠单侧、双侧鼻阻塞导致的低氧使下颌低氧诱导因子1α蛋白的表达水平升高,下颌第一磨牙牙周膜及牙槽骨组织自噬水平升高,但自噬升高的水平并不与鼻阻塞的严重程度呈正相关。

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征牙槽骨鼻阻塞间歇低氧自噬大鼠

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数字化设计全牙列种植固定修复中[牙合]平面的确定

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中国口腔种植学杂志 2024年第1期29卷 9-15页

作者：叶颖刘伟才同济大学口腔医学院·附属口腔医院、上海牙组织修复与再生工程技术研究中心 200072

各类牙科数字化技术在种植固定修复中已经得到了充分应用。多种模态的数字化数据提供了较传统方法不可比拟的信息量及信息精确度,使得医师和技师能够更直观、更精准的进行方案设计。在全牙列数字化修复设计中,平面的确定是其中的重要一... 详细信息

各类牙科数字化技术在种植固定修复中已经得到了充分应用。多种模态的数字化数据提供了较传统方法不可比拟的信息量及信息精确度,使得医师和技师能够更直观、更精准的进行方案设计。在全牙列数字化修复设计中,平面的确定是其中的重要一环,对于咬合功能协调具有重要影响,然而在义齿设计加工中尚缺少可供参考的设计原则及规范方法。本文以[牙合]平面为出发点,讨论了全牙列种植固定修复中涉及的数字化技术及数据、虚拟颌位关系转移,以及平面定位的各类参考方法,以期为全牙列种植咬合重建的临床工作提供参考。

关键词：全牙列种植修复 [牙合]平面虚拟咬合架虚拟患者数字化技术

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多模态数据融合的可视化技术在咬合重建中的应用

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华西口腔医学杂志 2022年第4期40卷 468-475页

作者：孙欣荣冯玥刘伟才上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学院同济大学附属口腔医院口腔修复教研室上海200072

目的通过多模态医学数据融合,实现数字化升高咬合垂直距离并进行咬合重建,应用于临床诊断及修复。方法利用软件手段,将口内扫描(IOS)、口外面部扫描(EOS)、锥形束计算机断层扫描(CBCT)、动态咬合运动轨迹进行多模态医学数据融合,创建可... 详细信息

目的通过多模态医学数据融合,实现数字化升高咬合垂直距离并进行咬合重建,应用于临床诊断及修复。方法利用软件手段,将口内扫描(IOS)、口外面部扫描(EOS)、锥形束计算机断层扫描(CBCT)、动态咬合运动轨迹进行多模态医学数据融合,创建可视化、可操作的四维虚拟牙科患者,对虚拟患者咬合及颞下颌关节进行系统性评估,在兼顾前牙美学及后牙修复空间的基础上,进行数字化升高咬合垂直距离,建立新的颌位并对接计算机辅助设计和计算机辅助制造(CAD/CAM)设备,实现咬合重建的固定修复。结果通过多模态医学数据融合及CAD/CAM设备的对接,得到了可视化、可操控的四维虚拟牙科患者,使咬合重建的固定修复技术更加便捷与安全。结论多模态数据融合创建四维虚拟患者创新地实现了同一患者各种数据在同时间、同空间的结合,方便、直观地展示了患者口颌系统解剖结构及功能状态,能够为临床医生提供有效的诊断与修复手段。

关键词：多模态数据融合虚拟牙科患者咬合重建动态咬合

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Dnmt3b对髁突纤维软骨干细胞多向分化调控作用的实验研究

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口腔医学研究 2024年第6期40卷 501-505页

作者：杨慧苏俭生周玥同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔修复科上海200072 上海牙组织修复与再生工程技术研究中心·同济大学口腔医学研究所上海200072 同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院牙体牙髓病科上海200072

目的:探究DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b enzyme,Dnmt3b)对大鼠髁突纤维软骨干细胞(fibrocartilage stem cells,FCSCs)成脂、成骨、成软骨向分化能力的影响。方法:体外分离培养大鼠髁突FCSCs,构建Dnmt3b过表达慢病毒,感染FCSCs建立过表达Dnmt3b的FCSCs细胞模型,并对其进行成脂、成骨、成软骨诱导培养,检测Dnmt3b过表达对大鼠髁突FCSCs成脂、成骨、成软骨相关基因表达的影响。结果:大鼠髁突纤维软骨干细胞具有间充质干细胞特性。与对照组相比,Dnmt3b过表达组成脂相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,Ppar-γ)的表达显著降低,成骨相关基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达显著升高,成软骨相关基因SRY相关转录因子9(SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的表达显著升高。结论:Dnmt3b能促进大鼠髁突纤维软骨干细胞成软骨向分化和成骨向分化,抑制其成脂向分化。

关键词： DNA甲基转移酶3b 髁突纤维软骨干细胞成脂分化成骨分化成软骨分化

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蛋白聚糖与小鼠牙周炎牙槽骨吸收的相关性

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口腔疾病防治 2022年第7期30卷 457-463页

作者：王思远张璠王雪奎孙瑶上海牙组织修复与再生工程技术研究中心同济大学口腔医学院同济大学附属口腔医院种植科上海200072

目的探讨小鼠牙周炎牙槽骨中蛋白聚糖含量的改变及其与牙周炎牙槽骨吸收的相关性。方法选取12只8周龄C57BL/6J雄性鼠,6-0丝线结扎右侧上颌第二磨牙建立牙周炎模型,左侧上颌未结扎处作为对照,术后14 d处死小鼠。Micro-CT扫描分析牙槽... 详细信息

目的探讨小鼠牙周炎牙槽骨中蛋白聚糖含量的改变及其与牙周炎牙槽骨吸收的相关性。方法选取12只8周龄C57BL/6J雄性鼠,6-0丝线结扎右侧上颌第二磨牙建立牙周炎模型,左侧上颌未结扎处作为对照,术后14 d处死小鼠。Micro-CT扫描分析牙槽骨吸收情况;HE染色观察牙槽骨形态变化;TRAP染色观察破骨细胞阳性率的改变;RT-qPCR检测细胞外蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)、双链蛋白聚糖(biglycan,BGN)、饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)和多能蛋白聚糖(versican,VCAN)等蛋白聚糖相关基因表达情况,组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)等破骨细胞相关基因表达情况,白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症相关基因表达情况;最后对蛋白聚糖与破骨相关基因表达量,蛋白聚糖与炎症相关基因表达量进行Pearson相关性分析。结果牙周炎侧牙槽骨吸收增多。TRAP染色结果显示牙周炎侧牙槽骨破骨细胞数量上升。RT-qPCR结果显示牙周炎侧蛋白聚糖相关基因ACAN、BGN、DCN的表达较对照侧降低,VCAN的表达较对照侧升高。牙周炎侧破骨细胞相关基因CTSK、MMP-9、RANKL及炎症相关基因IL-1β、IL-6、TNF-α的表达较对照侧升高(P<0.05)。Pearson相关性分析表明牙周炎中蛋白聚糖与破骨细胞相关基因表达量、炎症相关基因表达量均具有负相关性(P<0.05)。结论牙周炎时牙槽骨蛋白聚糖的表达与牙槽骨吸收密切相关。

关键词：牙周炎牙周组织细胞外基质蛋白蛋白聚糖糖基化破骨细胞炎症牙槽骨吸收

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