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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：梁雨萌马勇张艳慧陈志杰王志涛李雪峰崔露胥利刘胜旺李海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队

鸭是一种重要的经济水禽,也是一些人畜共患病病原(如流感病毒和黄病毒)的天然宿主。然而,目前对鸭的免疫系统及其与病毒的相互作用仍缺乏深入的了解。外周血白细胞是鸭免疫系统抵抗虫媒传染病病原的第一道防线。本研究利用高通量单细胞m... 详细信息

鸭是一种重要的经济水禽,也是一些人畜共患病病原(如流感病毒和黄病毒)的天然宿主。然而,目前对鸭的免疫系统及其与病毒的相互作用仍缺乏深入的了解。外周血白细胞是鸭免疫系统抵抗虫媒传染病病原的第一道防线。本研究利用高通量单细胞mRNA测序(scRNA-seq)在单细胞水平构建了鸭外周血白细胞的转录图谱,将鸭外周血白细胞分为16个亚群,并确定了各亚群的分子标记。此外,与人外周血白细胞单细胞转录图谱的比较分析发现,髓系细胞在外周血白细胞中的聚类存在物种间差异。

关键词：鸭单细胞转录组测序外周血白细胞

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杆菌七肽抗菌谱和溶血性的研究

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中国畜牧杂志 2020年第4期56卷 159-164页

作者：张江李火明蔡文通周晓容安杰利(重庆)生物科技有限公司重庆402460 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学院重庆402460

本试验旨在研究杆菌七肽抗菌谱和体外对人工肠液和胃液的稳定性、溶血性,为其在饲料中替代抗生素提供理论依据。试验采用管碟法测定抑菌圈来研究杆菌七肽对18株微生物的抑制作用,并研究高温水浴、人工肠液、人工胃液处理后的抑菌活性以... 详细信息

本试验旨在研究杆菌七肽抗菌谱和体外对人工肠液和胃液的稳定性、溶血性,为其在饲料中替代抗生素提供理论依据。试验采用管碟法测定抑菌圈来研究杆菌七肽对18株微生物的抑制作用,并研究高温水浴、人工肠液、人工胃液处理后的抑菌活性以及不同浓度杆菌七肽对红细胞的溶血率。结果表明:杆菌七肽对大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、布氏杆菌(Brucella melitensis)、嗜水气假单胞菌(Pseudomonas hydrophila)等具有明显的抑制作用,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)没有抑制作用,且抑菌活性不受热处理、人工胃液和肠液的影响;不同浓度的(12.5~100μg/mL)杆菌七肽处理红细胞的溶血率都低于5%。结果显示,杆菌七肽抗菌谱主要为革兰氏阴性菌;杆菌七肽对热处理、人工胃液和人工肠液具有很好的耐受性,而且对受试红细胞溶血性低。

关键词：杆菌七肽抗菌谱饲用抗生素溶血性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒在猪肺组织精细切片中感染特性的研究

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 747-752页

作者：崔红亮张洪亮汪孟航贾梅玉孟凡丹蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺脏组织中的感染特性,本研究建立了高度分化的猪呼吸系统体外培养模型-猪肺组织精细切片(PCLS)。该培养体系包含肺脏组织中多种相关细胞并能够体现出肺脏组织的生理结构和生物学功能。本研究... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺脏组织中的感染特性,本研究建立了高度分化的猪呼吸系统体外培养模型-猪肺组织精细切片(PCLS)。该培养体系包含肺脏组织中多种相关细胞并能够体现出肺脏组织的生理结构和生物学功能。本研究针对制备的猪PCLS进行生物学活性的鉴定,利用评估支气管上皮细胞纤毛摆动百分比的方法检测支气管上皮细胞纤毛活性,结果显示猪PCLS制备良好,在制备10 d以后仍保持95%以上的纤毛活性;利用活/死细胞染色法测定制备的猪PCLS体外培养后活细胞的比例,结果显示制备的猪PCLS在体外培养7 d后支气管上皮细胞和肺泡细胞仍为活细胞;利用间接免疫荧光试验测定猪PCLS中上皮细胞、杯状细胞和肺泡巨噬细胞(PAM)的完整性与分布情况,结果显示制备的猪PCLS上皮细胞和杯状细胞保存完整且猪PCLS中包含丰富的PAM。利用6株不同PRRSV分离株(HuN4、XD-15、WK-34、WK-38、LCL-75和DL-1510)以2.5×105TCID50/片的剂量感染猪PCLS,检测不同PRRSV分离株在猪PCLS中的感染特性,结果表明不同PRRSV分离株在该培养体系中表现出不同的增殖能力。本研究表明猪PCLS可用于PRRSV的体外感染试验。本研究为PRRSV的体外研究提供了新的模型与方法,同时也为其它猪呼吸道病原体提供了新的研究平台。

关键词：猪肺组织精细切片猪繁殖与呼吸综合征病毒上皮细胞纤毛活性

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一株鸭源H6N6亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2020年第1期42卷 75-79页

作者：范威峰崔鹏飞崔嘉琦谷文丽张元成邢鑫孔兴天彭大新邓国华陈化兰扬州大学江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解H6N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年在广东活禽交易市场分离的一株鸭源AIV DK/GD/S1182/2015(H6N6)进行了全基因组测序、遗传演化分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示,该病毒的HA蛋白裂解位点处仅有... 详细信息

为了解H6N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年在广东活禽交易市场分离的一株鸭源AIV DK/GD/S1182/2015(H6N6)进行了全基因组测序、遗传演化分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示,该病毒的HA蛋白裂解位点处仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白的222V和228S,可以增强病毒对α-2,6唾液酸受体的结合能力。NA蛋白颈部有11个氨基酸的缺失,这将会影响NA的神经氨酸酶活性;该病毒可能是2010年广东H6N6猪流感病毒与2014年广西AIV重组产生。小鼠感染性试验表明,该分离株不需要预先适应就能够在小鼠的肺脏内高效复制,提示该分离株具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究对H6亚型AIV监测和相关生物学特性研究具有一定的指导作用。

关键词：禽流感病毒 H6N6亚型生物学特性

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人工感染禽腺病毒血清4型对鹅天然免疫反应的影响

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 222-232页

作者：李雪峰姜磊孙金艳李慧昕马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江哈尔滨150086

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。... 详细信息

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。初探人工感染鸡源禽腺病毒血清4型(FAdV-4)对鹅的致病性及机体对该病毒形成的天然免疫反应机制。结果显示,感染该FAdV-4毒株后,鹅均没有明显病症和死亡发生。宿主产生特异性抗体,并且肝、心脏组织出现病理学变化,宿主排毒率和病毒载量呈上升趋势。感染早期(36 h和72 h),Av BD1、2、5、9、16,TLR2、3、7、15,IL-1β、2、6、8、18以及髓样分化因子(My D88)在肝中的基因表达量显著上调(P<0.05)或有上调趋势。证实,鸡源FAdV-4对鹅的致病性较弱,可能与实验动物品种、日龄差异或感染途径等条件有关。宿主可通过TLRs-My D88途径引起机体产生大量的免疫因子,参与机体抗病毒免疫反应。本试验结果为深入研究FAdV-4与宿主早期天然免疫间的相互作用提供了新的参考。

关键词：禽腺病毒血清4型禽β-防御素 Toll样受体细胞因子天然免疫反应

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结核分枝杆菌TetR家族蛋白Rv3295新调控靶点及辅助因子的初步研究

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中国预防兽医学报 2020年第7期42卷 643-649页

作者：吕明月崔莹莹唐祎依党光辉崔子寅刘思国宋宁宁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝... 详细信息

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝胶迁移试验(EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)试验结果显示,Rv3295与rv3229c(desA3)启动子在体外与体内均能够结合。DNA大沟小沟结合试验表明,Rv3295与rv3229c DNA的大沟结合。通过EMSA小分子筛选,结果显示,小分子(VB1、VB3、VB6、VC)和金属离子(Fe3+和Zn2+)在体外均可降低Rv3295与rv3229c启动子区域的结合,而氨基酸及其它小分子对该结合无影响。分子对接试验表明Rv3295的Glu 67和Glu 105氨基酸残基在该蛋白质与小分子及金属离子的相互作用中起重要作用。以上试验结果表明rv3229c为TetR家族蛋白Rv3295新的调控靶点。本研究首次揭示了MTB中的Rv3295调控蛋白可直接调控rv3229c(desA3)的表达,进而参与油酸合成的调控。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3295 转录调控 rv3229c

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鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析

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浙江农业学报 2020年第5期32卷 789-797页

作者：蒲路莎苏世博陈肖韩赵丽丽陈洪岩黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱导表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别。序列分析表明,该毒株与其他鹅源星状病毒参考毒株的核苷酸相似性介于37.8%~99.3%之间,HLJ-1801分离株与已发表的8株鹅源星状病毒毒株位于同一分支,表明其属于一种新型星状病毒成员。利用原核表达系统成功高效地表达了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在。本试验成功获得了纯化的ORF2重组蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗体,为进一步研究ORF2蛋白对星状病毒感染的诊断试剂的研发奠定了基础。

关键词：鹅星状病毒 ORF2 原核表达遗传进化分析

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小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

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中国动物检疫 2021年第12期38卷 91-98页

作者：杨鸣发马云云于志亚刘家森康洪涛姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人畜共患病团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 b... 详细信息

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMD^(TM)18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(2))copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(-3))copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果(13.29±6.74)copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为(0.44±0.14)copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率(25.5%)高于RT-qPCR(17.0%)。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV) 芯片式数字PCR(cdPCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)

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猪圆环病毒2型抗独特型纳米抗体的制备及其功能研究

猪圆环病毒2型抗独特型纳米抗体的制备及其功能研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：邓盈盈张桂夕王刚王佳茜穆杨蔡雪辉周恩民西北农林科技大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是导致猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)和仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体,是世界养猪业面临的难题[1]。衣壳蛋白(Cap)是PCV2的主要免疫原性蛋白和唯一结构蛋白[2]。抗独特型抗体(AIdorAb2)是以抗体分...

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是导致猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)和仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体,是世界养猪业面临的难题[1]。衣壳蛋白(Cap)是PCV2的主要免疫原性蛋白和唯一结构蛋白[2]。抗独特型抗体(AIdorAb2)是以抗体分子可变区的独特型作为抗原表位诱导产生的特异性抗体[3]。

关键词：

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一株新型三源重配H1N2亚型猪流感病毒的进化分析及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2020年第9期42卷 861-866页

作者：钟秋张丹丹宋祖晨孟飞陈艳乔传玲陈化兰曹允考杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分... 详细信息

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分子进化分析,结果显示其8个节段均与2015年~2016年在美国分离的H1N2亚型SIV有高度同源性(98.9%~99.7%),其中HA基因可能来自于2009年之前的人季节性H1N1亚型流感病毒,PB2、PB1、PA、NP、NA和NS可能来自北美三重配H1N2亚型SIV,M基因可能来自H1N1/2009。以106 EID50 SIV GX238株病毒鼻腔感染BALB/c小鼠后记录小鼠的体质量变化及死亡情况,感染后第3 d检测小鼠各脏器病毒复制情况。结果显示,感染组小鼠体质量与PBS对照组小鼠相比有明显下降趋势,感染小鼠40%死亡;在小鼠肺脏和鼻甲中病毒滴度分别达6.3 Log10EID50/mL、4.8 Log10EID50/mL,表明该病毒对小鼠表现出中等的致病力。本研究结果表明输入型SIV持续对我国猪群造成威胁,凸显了在世界范围内开展猪流感监测的必要性。

关键词：猪流感病毒 H1N2亚型序列分析致病性

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