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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：孟松树张绍杰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

该研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡，以MTT法检测鸡胸、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性，以间接ELISA法检测血清... 详细信息

该研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡，以MTT法检测鸡胸、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性，以间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明，ILTV基因免疫诱导机体产生了较强的淋巴细胞增殖反应，血清抗体在免疫后第2周发生阳转，而对照组无相应变化。这是ILTV基因免疫研究的首次报道。

关键词：喉气管炎病毒鸡家禽传染病

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鸡传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达

鸡传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：张绍杰倪健强中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

将克隆到pUC119中的鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因，通过EcoRI位点再亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中，构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-Blue DNA)共转Sf9昆虫细胞，经三轮蚀斑纯... 详细信息

将克隆到pUC119中的鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因，通过EcoRI位点再亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中，构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-Blue DNA)共转Sf9昆虫细胞，经三轮蚀斑纯化，获得的重组病毒命名为rpVL-ILTVgB。PCR方法鉴定证明，gB基因正确插入到杆状病毒基因组中，直接免疫荧光试验和Dot-ELISA结果均表明gB基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达，表达的gB蛋白将作为鸡传染性喉气管炎的亚单位疫苗和诊断抗原。

关键词：喉气管炎病毒鸡杆状病毒重组病毒糖蛋白基因

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猪生殖-呼吸综合征病毒蛋白的结构与功能

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动物医学进展 2000年第2期21卷 23-26页

作者：仇华吉周彦君童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

猪生殖 -呼吸道综合征 ( PRRS)病毒是新发现的 RNA病毒。其基因组有 8个开放阅读框架 ( ORF) ,ORF1编码病毒的RNA聚合酶 ,ORF2～ 7分别编码糖蛋白GP2～ 5、M蛋白和 N蛋白。本文概括了近几年来国际上对其病毒蛋白的研究成果 ,对这些病毒... 详细信息

猪生殖 -呼吸道综合征 ( PRRS)病毒是新发现的 RNA病毒。其基因组有 8个开放阅读框架 ( ORF) ,ORF1编码病毒的RNA聚合酶 ,ORF2～ 7分别编码糖蛋白GP2～ 5、M蛋白和 N蛋白。本文概括了近几年来国际上对其病毒蛋白的研究成果 ,对这些病毒蛋白的结构。

关键词： PRRSV 病毒蛋白结构功能 ORF5基因

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲张建林于康震刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分析和PCR鉴定后,利用脂质体转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒疫苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化,获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：禽流感 HA基因重组禽痘病毒

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IBV地方分离株致病原性和血清学分型的比较

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上海农业学报 2000年第2期16卷 74-76页

作者：祁贤叶向阳张婉华朱永军徐平曹伟民江国托步志高刘思国上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将 6株分离自国内不同地方的 IBV流行株分别感染 SPF鸡 ,对气管和肾脏进行系统病理观察 ,发现 6株 IBV在致病原性和组织嗜性上存在显著差异 ,其中 QD可引起严重的呼吸道损伤 ,并伴有相对较轻的肾脏损伤 ,其余 5株对肾脏损伤较为严重而... 详细信息

将 6株分离自国内不同地方的 IBV流行株分别感染 SPF鸡 ,对气管和肾脏进行系统病理观察 ,发现 6株 IBV在致病原性和组织嗜性上存在显著差异 ,其中 QD可引起严重的呼吸道损伤 ,并伴有相对较轻的肾脏损伤 ,其余 5株对肾脏损伤较为严重而对呼吸道损伤相对温和。用气管环组织培养交叉中和实验 (SN)和 SAS软件对 6株分离毒进行血清学分型研究 ,结果显示 QD株属于 M型 ,ZZ、GZ属于 T型 ,而 TJ、DL和 YC株是不同于 M和 T血清型的变异株。研究结果表明 ,不同 IBV毒株的致病原性和血清型有一定的相关性 ,同时也说明我国 IBV流行株已发生变异 ,并存在所谓肾型

关键词：鸡传染性支气管炎病毒致病原性血清型

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鸡传染性支气管炎病毒地方分离株S1基因克隆和基因型鉴定

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上海农业学报 2000年第4期16卷 52-56页

作者：祁贤叶向阳张婉华朱永军步志高刘思国上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨 150001

利用IBV全长S1基因特异性引物 ,以纯化的 3个标准株M4 1、H52 、T和 6个地方分离株 (QD、ZZ、GZ、TJ、DL和YC)的基因组RNA为模板 ,用RT PCR方法扩增出预期大小约 1.73kbcDNA片段 ,经BAMHI和HindIII酶切插入到质粒 pUC18中 ,并在大肠杆菌... 详细信息

利用IBV全长S1基因特异性引物 ,以纯化的 3个标准株M4 1、H52 、T和 6个地方分离株 (QD、ZZ、GZ、TJ、DL和YC)的基因组RNA为模板 ,用RT PCR方法扩增出预期大小约 1.73kbcDNA片段 ,经BAMHI和HindIII酶切插入到质粒 pUC18中 ,并在大肠杆菌JM 83中实现了克隆。对 6个分离株的S1基因PCR产物进行HaeIIIRFLP分析 ,表明QD、TJ属于M4 1基因型 ,ZZ和GZ与T基因型一致 ;而DL、YC表现为不同的基因型 ,这一结果与血清中和实验结果基本吻合 ,证实我国IBV流行株已发生基因变异。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 RFLP 基因型鉴定

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我国禽流感防制研究进展

我国禽流感防制研究进展

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：于康震付朝阳崔尚金步志高唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心

动物流感研究中心的成立有力地推动了我国禽流感的防制研究工作。本文将就我国在禽流感疫情调查、诊断和监测、病毒分离鉴定、疫苗免疫、病毒分子生物学等诸多方面的研究现状作一简要综述。

关键词：禽流感防制进展

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心(哈尔滨) 东北农业大中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切分析和PCR鉴定后，利用脂质转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化，获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：基因重组血凝素禽痘病毒

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H3N8亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

H3N8亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：崔尚金于康震唐秀英刘明田国彬刘尚高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业大学动物医学院

本研究对分离到的H3N8禽流感病毒分离株A/Chick/Jilin/98(J1株)和其传代过程中发生变异的变异株(J2株)进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,J1株病毒致死鸡胚数量明显高于J2株病毒,病毒HA的滴度也明显高于J2株;J1株... 详细信息

本研究对分离到的H3N8禽流感病毒分离株A/Chick/Jilin/98(J1株)和其传代过程中发生变异的变异株(J2株)进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,J1株病毒致死鸡胚数量明显高于J2株病毒,病毒HA的滴度也明显高于J2株;J1株的IPVI为1.44,而J2为0.64;毒株的致病性试验与SPF感染鸡的器官变化表明J1组的病理学变化较J2组明显,且嗜器官为肺、肝、法氏囊、胸腺、脾等主要的免疫器官;本研究还对SPF感染鸡的病变器官进行了病原学检测、病理组织检测和电镜观察。结果表明两者存在较明显的差异。

关键词：禽流感病毒 H3N8 生物学特性

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流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 177-页

作者：刘明于康震张云孔宪刚徐宜为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子ｐＵＣＨ５。然后将ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移... 详细信息

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子ｐＵＣＨ５。然后将ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ，筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后，在脂质体转染试剂介导下，ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－ＢｌｕｅＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化，获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验结果表明ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞，血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达，为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达

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