检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 11-页

作者：张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬... 详细信息

ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒繁殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较，确定了编码Ｒｅｖ蛋白的病毒基因组转录产物的编码序列和拼接位点。

关键词： EIAV核输出因子蛋白 cDNA克隆序列测定

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编码EIAV反式激活蛋白Tat的cDNA克隆和序列测定

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 93-页

作者：张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在... 详细信息

ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒增殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较。确定了编码ＥＩＡＶ反式激活蛋白的转录产物及阅读框架及转录后拼接位点，研究发现至少有两种拼接产物编码ＴＡＴ。

关键词：

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马传染性贫血病病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 175-页

作者：王柳杨志彪刘红全智海东仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ　ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ，这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组，ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接，获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组... 详细信息

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ　ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ，这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组，ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接，获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组质粒，将其命名为ｐ８．０。将此８．０ＫｂＥＩＡＶ全基因再亚克隆到含有一完整ＥＩＡＶＤＬＡ株长末端重复序列的质粒中，获得一含有ＥＩＡＶ驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒，将其命名为ｐ８．２，经核苷酸序列分析，证明ｐ８．２含有ＥＩＡＶ前病毒的全基因。用ｐ８．２转染驴白细胞，将其作为种毒进行传代，于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶，说明在驴白细胞中由ｐ８．２衍生出了ＥＩＡ病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后，第４天出现病变，经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子，进一步证明ｐ８．２具有感染性，我们获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆，为进一步在分子水平上阐明我国ＥＩＡＶ疫苗株的减毒机理和免疫保护机制奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克降

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马传贫病毒基因组转录图谱的研究

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 68-页

作者：刘相冬张宝山孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

ＥＩＡＶ和ＨＩＶ－１、ＦＩＶ等病毒均属慢病毒属成员，这些病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。在慢病毒基因转录过程中，首先形成一个与病毒基因组等长的ｍＲＮＡ，然后经过不同方... 详细信息

ＥＩＡＶ和ＨＩＶ－１、ＦＩＶ等病毒均属慢病毒属成员，这些病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。在慢病毒基因转录过程中，首先形成一个与病毒基因组等长的ｍＲＮＡ，然后经过不同方式的拼接，得到长短不一的ｍＲＮＡ，进而出现核表达不同的蛋白。我们知道，慢病毒的基因表达受多种病毒蛋白及细胞核因子的复杂调控，这一过程的改变往往会影响病毒的致病力和繁殖能力。马传贫白细胞弱毒疫苗是目前唯一成功的慢病毒疫苗，因此比较ＤＬＡＥＩＡＶ的拚接位点及拚接方式与其他毒株的异同，对于揭示ＤＬＡＥＩＡＶ致弱的分子机制是十分必要的。本研究首先鉴定了ＤＬＡＥＩＡＶ和ＤＡＥＩＡＶ的几个拼接位点和几个转录产物，将这些拼接位点与已报道毒株相比较，发现ＤＬＡＥＩＡＶ和ＤＡＥＩＡＶ外显子３上游拼接位点为新发现的位点信号。同时，Ｒｅｖ的靶序列ＲＲＥ的核苷酸序列差异较大。在本研究试验条件下，未克隆到ＤＬＡＥＩＡＶ的１、２、４外显子拼接产物及ＤＡＥＩＡＶ感染动物细胞的１、４外显子拼接产物，这可能由于样品采集时间及病毒体内外繁殖环境差异造成的假阴性结果，但也有一种可能的情况。

关键词：马传贫转录产物毒株基因组染色体组

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表达H5N1亚型高致病性禽流感病毒HA基因的DNA疫苗可保护SPF鸡抵抗同型病毒的致死性攻击

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 173-页

作者：姜永萍姜永萍陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林步志高唐秀英田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的... 详细信息

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的动物保护试验。试验Ｉ分为两部分，第一部分为ｐＣＩＨ５一次免疫组（１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ）、油苗组及空白对照组，第二部分为ｐＣＩＨ５两次免疫组（５μｇ、２０μｇ、３５μｇ、５０μｇ）及其对照组，ｐＣＩＨ５以２００μｌ腿肌两点注射，一次免疫组于免疫后３周以１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，两次免疫组首免后３周加强免疫一次，二免后２周以５０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，免疫及攻毒前后均采血检测ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体，攻毒后７天采集泻殖腔棉拭子分离病毒。试验Ⅱ分为５０μｇ和１００μｇ（１００μｌ）两次免疫组及对照组，攻毒剂量为１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６。试验Ⅲ为试验Ⅱ的重复试验，但免疫注射体积为２００μｌ。结果，三批试验的所有对照鸡在攻毒后２－８天全部死亡；试验Ⅰ中１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ和１５０μｇｐＣＩＨ５一次免疫，但免疫保护率分别为１２．５％（１／８?

关键词：禽流感病毒血凝索基因 DNA疫苗免疫保护

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禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 179-页

作者：马文军马文军陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬ... 详细信息

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬＤ５０的ＨＡ基因同源ＡＩＶＡ／ＡｒｆｉＳｔａｒ／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９（Ｈ７Ｎ１）进行人工感染。１周后用棉拭子于泄殖腔取样，进行病毒分离。免疫后第３周及攻毒后第１、２周对所有动物进行翅静脉采血，检测血凝抑制（ＨＩ）抗体和免疫沉淀（ＡＧＰ）抗体。结果，攻毒前重组病毒免疫组可检测到很低的ＨＩ抗体，检测不到ＡＧＰ抗体，野生型病毒（Ｆ０１７）接种组和空白对照组ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体均为阴性。攻毒后重组病毒免疫组的ＨＩ抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组。重组病毒免疫组有６／８的鸡为流感病毒分离阴性，野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性。这些结果表明我们所构建的表达Ｈ７亚型ＡＩＶ　ＨＡ基因的重组鸡痘病毒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应，肠道排毒显著减少。同时也表明，重组禽痘病毒可作为一种预防禽流感候选标记疫苗，藉此可望较好地解决全病毒灭活疫苗成本高和疫苗免疫鸡与自然感染鸡?

关键词：禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒

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猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株非结构基因的分子克隆及其基因特征的研究

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 78-页

作者：刘光清仇华吉蔡雪晖钱平薛强童光志郭宝清中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究对猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的非结构基因，包括ＯＲＦ１基因、５’端非编码区基因（Ｎｏｎ－ＣｏｄｉｎｇＲｉｇｏｎ，ＮＣＲ）和３’端非编码区基因（ＮＣＲ）分别进行了分子克隆和测序，并对其基因特征作了研究... 详细信息

本研究对猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的非结构基因，包括ＯＲＦ１基因、５’端非编码区基因（Ｎｏｎ－ＣｏｄｉｎｇＲｉｇｏｎ，ＮＣＲ）和３’端非编码区基因（ＮＣＲ）分别进行了分子克隆和测序，并对其基因特征作了研究分析。结果表明，ＰＲＲＳＶ－ＣＨ－１ａ株ＯＲＦ１ａ起始密码子上游是由保守序列５’ＵＵＡＡＣＣ３’连接的５’ＮＣＲ，在该区附近的约４３个碱基有较高的保守性，其余核苷酸的变异较大。ＯＲＦ１ａ编码的多聚蛋白又可切割生成六个非结构蛋白（Ｎｓｐ１ａ、Ｎｓｐ１β、Ｎｓｐ２－５），其中Ｎｓｐ２可能具有型特异性，在不同基因型的ＰＲＲＳＶ分离株之间表现出较大的变异，和ＶＲ２３３２株的ＮｓＰ２的编码基因相比有８６％的同源性，同ＬＶ株只有４５％的同源性；ＯＲＦ１ｂ所编码的聚合蛋白经切割后形成四个非结构蛋白（ＲｄＲｐ、ＣＰ２－４），同ＯＲＦ１ａ所编码的蛋白相比较为保守，但是，在ＣＰ４的Ｃ端仍有较大的变异，其编码区和ＶＲ２３３２株相比有８８．７％的同源性，而和ＬＶ株只有５３．４％的同源性。ＣＨ－１ａ株的ＯＲＦ１ａ－ＯＲＦ１ｂ的衔接区为核糖体移码区，在所有的ＰＲＲＳＶ分离株中高度保守。

关键词： PRRSV CH-1a株 ORF1基因非结构基因 5’NCR 3’NCR

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禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 146-页

作者：孟庆文邓国华曹素芳乔传玲于康震田国斌唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 新疆农业大学

根据反义ＲＮＡ作用原理，以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因，反向插入反转录病毒载体ｐＬＸＳＮ中，命名为ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及ｐＬＸＳＮ－ＮＰ，用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ... 详细信息

根据反义ＲＮＡ作用原理，以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因，反向插入反转录病毒载体ｐＬＸＳＮ中，命名为ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及ｐＬＸＳＮ－ＮＰ，用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选抗性克性，扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ），以巢式ＰＣＲ方法检测，以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３，表明已筛选出产毒的的克隆细胞质，得到重组逆转录病毒，为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。

关键词：反义RNA 禽流感病毒逆转录病毒载体巢式PCR

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禽流感免疫与流行的生物数学模型初析

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 73-73页

作者：崔尚金于康震毕可东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室莱阳农学院动科系265200

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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 178-页

作者：乔传玲乔传玲于康震于康震贾永清刘明刘明孟庆文孟庆文田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 详细信息

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素基因神经氨酸酶基因重组禽痘病毒

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