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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原S1基因的分子克隆、序列分析及其DNA免疫的初步研究

生物工程学报 1999年第3期15卷 304-309页

作者：江国托步志高刘思国康丽娟祁贤卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

对来源于我国华东地区的鸡传染性支气管炎病毒流行株ＱＤ免疫原Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行了克隆、序列分析和ＤＮＡ免疫的初步研究。ＲＴＰＣＲ扩增ＱＤ毒株的Ｓ１基因，将其５′和３′端分别进行分子修饰后插入克隆载体ｐＵＣ１８的Ｂａ... 详细信息

对来源于我国华东地区的鸡传染性支气管炎病毒流行株ＱＤ免疫原Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行了克隆、序列分析和ＤＮＡ免疫的初步研究。ＲＴＰＣＲ扩增ＱＤ毒株的Ｓ１基因，将其５′和３′端分别进行分子修饰后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆；利用英国ＩＢＶ毒株Ｓ１全基因核酸探针与ＱＤ毒株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交后，采用ＨａｅⅢ，ＰｖｕⅡ和ＸｂａⅠ等限制酶对此流行毒株Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行了酶切分析；在测定ＱＤ毒株Ｓ１基因５′端高变区核苷酸序列并以此与ＩＢＶＭ４１，Ｈ１２０，６／８２及Ｂｅａｕｄ等参考毒株序列对比分析的基础上，构建了ＱＤ株Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒，肌肉注射免疫小鼠后，鸡胚病毒中和试验的结果表明，ＩＢＶＳ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒能诱导小鼠产生病毒特异的中和抗体，具有良好的免疫原性，初步显示基因疫苗在鸡传染性支气管炎防治上应用前景。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒免疫原S1基因分子克隆

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一株鹅源高致病力禽流感病毒分离株血凝素基因的分析

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中国农业科学 1999年第2期32卷 89-94页

作者：陈化兰于康震步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）在决定病毒致病力、受体结合特性、宿主范围等方面起着关键作用。本研究对初步鉴定为高致病力毒株的ＡＩＶ鹅体分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）的Ｈ... 详细信息

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）在决定病毒致病力、受体结合特性、宿主范围等方面起着关键作用。本研究对初步鉴定为高致病力毒株的ＡＩＶ鹅体分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＨＡ基因进行了克隆并测序。结果表明，这一在无胰酶条件下可在单层鸡胚成纤维细胞培养物上形成蚀斑的毒株在其ＨＡ裂解位点附近有连续６个碱性氨基酸的插入物，从而揭示了其高致病力的分子基础。进一步的序列比较发现这一毒株与１９９７年香港流感病毒Ａ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／１５６／９７（ＨＫ／９７）的ＨＡ基因核苷酸和氨基酸同源率分别高达９８．０％和９８．２％，且其６个糖基化位点、２个受体结合位点及裂解位点碱性氨基酸插入物的序列均完全一致，提示该毒株与ＨＫ／９７具有相似的生物学特性。

关键词：禽流感病毒 H5亚型高致病力血凝素基因

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鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的目的基因点突变对其免疫原性的影响

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病毒学报 1999年第3期15卷 249-251页

作者：江国托刘思国步志高康丽娟卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）中国流行株（ＨＤ）的主要免疫原纤突蛋白Ｓ１基因（Ｓｐｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ），将其插入载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ ... 详细信息

反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）中国流行株（ＨＤ）的主要免疫原纤突蛋白Ｓ１基因（Ｓｐｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ），将其插入载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／Ｈｉｎｄ Ⅲ位点，在大肠杆菌中实现目的基因的分子克隆。经克隆化Ｓ１基因的限制性酶切片段多态性（ＲＦＬＰ）分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交之后，双脱氧链终止法测定其５′端高变区核苷酸序列，并以此与ＧｅｎｅＢａｎｋ中的参考毒株Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｔｓ４１相应序列作比较，分析其同源性。在此基础上，分别以此两毒株抗原研制灭活疫苗，交叉免疫攻毒。结果表明，从Ｓ１基因５′端高变区的起始密码子ＡＴＧ至第３５０位，两毒株仅在起始密码子后第１３１位存在一个碱基的点突变，由Ｍ４１的Ｃ突变为ＨＤ株的Ｇ，即Ｓ１蛋白上的第４１个氨基酸由Ｍ４１的Ａｌａ突变为ＨＤ株的Ｇｌｙ，二者核苷酸同源率为９９７％，氨基酸同源率为９９１％。两毒株灭活抗原疫苗免疫后的交叉攻毒试验表明，Ｍ４１毒株疫苗对ＨＤ株的保护率为７５％，而ＨＤ株疫苗对Ｍ４１株的保护率只有６５％。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒免疫原基因点突变

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新型伪狂犬病疫苗及其评价

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中国兽医杂志 1999年第7期25卷 34-37页

作者：仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）为α疱疹病毒，能引起多种动物的伪狂犬病。该传染病遍布世界主要养猪国家。我国１９４７年首次发现本病，现已蔓延到十几个省市，给畜牧业造成巨大的经济损失。免疫接种是防制伪狂犬病的主要策略。尽管疫苗不能... 详细信息

伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）为α疱疹病毒，能引起多种动物的伪狂犬病。该传染病遍布世界主要养猪国家。我国１９４７年首次发现本病，现已蔓延到十几个省市，给畜牧业造成巨大的经济损失。免疫接种是防制伪狂犬病的主要策略。尽管疫苗不能完全阻止ＰＲＶ强毒感染和排毒，但它...

关键词：伪狂犬病疫苗评价

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马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒全基因核苷酸序列测定

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中国预防兽医学报 1999年第1期21卷 74-75页

作者：卢景良张宝山刘永刚孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料，应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法，分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因，并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马... 详细信息

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料，应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法，分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因，并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马传贫病毒核苷酸序列比较，推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。

关键词：马传贫白细胞弱毒马传贫驴强毒核苷酸序列

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抗体依赖性增强作用的免疫生物学特点及其意义

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中国兽医科技 1999年第7期29卷 19-20页

作者：仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

抗体依赖性增强作用（ａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＡＤＥ）就是某些病毒用相应抗体处理后，其复制或感染能力显著增强。这种现象是Ｈａｗｋｅｓ于１９６４年在研究虫媒病毒中首先发现的〔１〕。他将澳... 详细信息

抗体依赖性增强作用（ａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＡＤＥ）就是某些病毒用相应抗体处理后，其复制或感染能力显著增强。这种现象是Ｈａｗｋｅｓ于１９６４年在研究虫媒病毒中首先发现的〔１〕。他将澳洲墨莱溪谷脑炎病毒（ＭＶＥ）、西尼...

关键词：抗体依赖性免疫生物学特性增强作用产生机制

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禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达

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中国预防兽医学报 1999年第2期21卷 81-83页

作者：邓国华马文军于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法成功地扩增了我国禽流感病毒分离株Ａ／Ｘｉｎｇｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）的核蛋白（ＮＰ）基因，其限制性内切酶图谱和核苷酸序列与鸭源的标准Ｈ１４Ｎ５毒株几乎完全一致，与其它毒株则有较大差异，说... 详细信息

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法成功地扩增了我国禽流感病毒分离株Ａ／Ｘｉｎｇｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）的核蛋白（ＮＰ）基因，其限制性内切酶图谱和核苷酸序列与鸭源的标准Ｈ１４Ｎ５毒株几乎完全一致，与其它毒株则有较大差异，说明该鸡源分离株与鸭源毒株有非常近的亲缘关系。将ＮＰ基因定向克隆到杆状病毒转移载体ｐＶＬ１３９３中，再与杆状病毒线性ＤＮＡ（ＢＡＣ－Ｎ－ＢｌｕｅＤＮＡ）共转染于Ｓｆ９昆虫细胞中，经过三次蚀斑筛选，获得重组病毒ｒＢ２。用其细胞表达产物裂解后作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，结果表明ＮＰ基因在杆状病毒系统中获得了表达。同时用表达产物作琼脂扩散试验，结果表明表达产物与现行标准禽流感琼扩抗原具有相同的生物学活性。

关键词：禽流感病毒重组杆状病毒核蛋白基因

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牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究

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中国兽医科技 1999年第5期29卷 3-5页

作者：张桂红童光志王柳仇华吉赵晓岩张绍杰于力刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、... 详细信息

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南１和云南２分离株进行了ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增均产生４５７ｂｐ的特异性片段，而ＴＫ－ＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ片段；用引物ＰＢ１和ＰＢ２对７株ＩＢＲＶＤＮＡ及ＴＫ－ＩＢＲＶＤＮＡ进行扩增均产生３３９ｂｐ的特异性片段；用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增，均未见特异性条带，从而证明该引物是特异的；ＰＣＲ的敏感性检测表明，该法可检测出３ｐｇ的病毒ＤＮＡ。所建立的方法可以鉴别野毒与ＴＫ－ＩＢＲＶ疫苗毒的感染。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 鉴别诊断 TK基因

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禽肺病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 1999年第1期21卷 76-77页

作者：沈瑞忠曲立新于康震李建伟张建林谷守林徐宜为唐桂运中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽肺病毒（ＡＰＶ）于１９７８年首次发现于南非，可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症，至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了１株病毒。经鉴定，该病毒分离株缺乏血凝活性，具有典型的副粘... 详细信息

禽肺病毒（ＡＰＶ）于１９７８年首次发现于南非，可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症，至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了１株病毒。经鉴定，该病毒分离株缺乏血凝活性，具有典型的副粘病毒形态特征，可诱导特异性抗ＡＰＶ抗体的产生。因此可认定该病毒为１个ＡＰＶ分离株（命名为ＡＰＶ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃｈｉｎａ／１／９８）。

关键词：禽肺病毒分离鉴定

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鸡IL-2基因的克隆及序列测定

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中国兽医科技 1999年第7期29卷 5-7页

作者：陈洪岩刘胜旺陈奖励张宝山卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已发表的鸡白细胞介素２（ＩＬ２）基因序列设计引物，用ＲＴＰＣＲ方法从新城疫病毒感染的雏鸡脾淋巴细胞培养物中扩增出鸡的ＩＬ２基因ｃＤＮＡ，并进行序列测定，为进一步表达鸡ＩＬ２并深入研究其功能奠定了基础。

关键词：鸡IL-2基因克隆序列测定

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