检索结果-内蒙古大学图书馆

农业大数据学报 2020年第4期2卷 55-62页

作者：王世达魏丽丽王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150069 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 国家动物疫病数据中心哈尔滨150069

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率... 详细信息

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率、候鸟与家禽有效接触概率、免疫覆盖率及免疫保护效率7个因素为主要风险节点构建了新城疫病毒通过候鸟途径传入我国家禽的风险评估模型。针对情景树中的关键风险节点进行数据采集及评估,以县级行政区划为空间单元、月份为时间单元对新城疫病毒通过候鸟途径引入风险进行了定量分析。分析结果表明,每年1—2月以及11—12月相对高风险区域主要集中在我国南部沿海地区,3—4月以及9—10月,处于候鸟迁徙路线上的中部东部地区家禽感染新城疫病毒的相对风险较高;5—6月我国东北地区以及中部地区为家禽通过候鸟途径感染新城疫病毒的相对高风险地区,7—8月,在我国华东地区出现了一个集中的相对高风险区域。整体而言,我国东部及中部地区风险高于西部地区。敏感性分析显示疫苗免疫是降低候鸟将新城疫病毒传播至家禽风险的主要因素。该研究为以风险评估为基础的疫病监测提供技术方案,为基于风险预警的新发新城疫疫情防控提供了理论依据。

关键词：风险评估新城疫候鸟病毒

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黑龙江某规模化牛场副结核分枝杆菌的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1177-1180页

作者：蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳崔子寅宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为检测黑龙江某规模化牛场副结核病的感染情况,本研究采集了35头副结核分枝杆菌(MAP)抗体阳性牛(有腹泻表现)的直肠刮取物,采用IS900-PCR鉴定样品中的MAP,将该PCR扩增为阳性的样品通过细菌分离培养、菌落形态学观察、多重PCR鉴定MAP的亚... 详细信息

为检测黑龙江某规模化牛场副结核病的感染情况,本研究采集了35头副结核分枝杆菌(MAP)抗体阳性牛(有腹泻表现)的直肠刮取物,采用IS900-PCR鉴定样品中的MAP,将该PCR扩增为阳性的样品通过细菌分离培养、菌落形态学观察、多重PCR鉴定MAP的亚型,通过IS1311基因序列同源性比对并对分离菌进行遗传进化分析,同时对其进行多态性分型鉴定,进一步确定分离株的亚型。结果显示,35份直肠刮取物样本中,31份经IS900-PCR扩增阳性,分离培养得到的3株分离菌菌落形态与分枝杆菌相似,多重PCR的鉴定谱型均与MAP K-10参考株一致,其在遗传进化上与多株MAP具有高度的亲缘性,经IS1311多态性分型鉴定3株分离菌均为牛型MAP,分别命名为MAP-HLJB160、MAP-HLJB175、MAP-HLJB177。本研究为黑龙江地区副结核病的预防和流行病学调查提供数据支撑。

关键词：牛副结核分枝杆菌 IS1311 亚型鉴定

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金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因敲除菌株的构建及生长特性分析

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1104-1108页

作者：刘文宇祝瑶王长珍杨亲栾天王凌利刘思国周学章张万江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021

为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)基因敲除的菌株,本研究以pBT2温敏型质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因敲除质粒pBT2-ΔPVL,并经酶切鉴定。将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中,在3... 详细信息

为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)基因敲除的菌株,本研究以pBT2温敏型质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因敲除质粒pBT2-ΔPVL,并经酶切鉴定。将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中,在30℃和42℃多次交替传代并经红霉素抗性筛选,构建PVL基因敲除菌株,经PCR和测序鉴定后命名为ΔPVL。以pLI50穿梭质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因回补质粒pLI50-PVL,按照同样方法将其转化至敲除菌株ΔPVL中,构建PVL基因回补菌株CΔPVL。将ΔPVL在TSB培养基中连续传代培养后,经PCR检测敲除菌株体外的遗传稳定性;分别绘制敲除菌株ΔPVL和回补菌株CΔPVL的生长曲线,检测其体外生长特性。结果显示,正确构建了两种质粒pBT2-ΔPVL、pLI50-PVL和两种菌株ΔPVL、CΔPVL。敲除菌株ΔPVL连续传代未发生回复突变,具有良好的遗传稳定性。生长特性结果显示敲除菌株生长速率显著低于野生菌株,表明PVL基因在金黄色葡萄球菌的生长调节中发挥着一定的作用。本研究为进一步研究金黄色葡萄球菌PVL的功能及致病机制奠定了基础。

关键词：杀白细胞素同源重组遗传稳定性

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抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 632-636页

作者：薛雨佳宋彩玲赵爽爽李彤彤王文静张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质... 详细信息

为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55ku、轻链为25ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。

关键词：基因工程嵌合抗体猫细小病毒昆虫杆状病毒表达系统

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H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究

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中国预防兽医学报 2019年第9期41卷 935-939页

作者：梁真洁潘俊慧于晓菲陈普成曾显营柳金雄施建忠邓国华姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为检测H7N9禽流感病毒(AIV) DNA疫苗的免疫保护效力,本研究将H7N9禽流感疫苗株A/Chicken/Guangxi/SD098/2017 (H7N9)[CK/GX/SD098/17 (H7N9)]的HA基因密码子优化后,定向克隆至载体pCAGGS中构建重组质粒pCA-SD098。将pCA-SD098转染至293T细胞后,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot检测,结果显示,HA蛋白可以在293T细胞中正确表达。分别利用15μg和20μg重组质粒pCA-SD098免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量和方式加强免疫,加强免疫一周后通过鼻腔分别感染105EID50的同源高致病性AIV (HPAIV)CK/GX/SD098/17 (H7N9)和异源低致病性AIV (LPAIV) A/Chicken/Chongqing/SD057/2017 (H7N9)[CK/CQ/SD057/17 (H7N9)],攻毒10 d内记录免疫鸡发病和死亡情况,检测免疫鸡HI抗体水平,并于攻毒后第3 d、第5 d和第7 d无菌采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,采用红细胞凝集试验(HA)检测病毒的滴度。结果显示,重组质粒pCA-SD098免疫后可以诱导SPF鸡产生较高水平的HI抗体,15μg pCA-SD098剂量免疫鸡后能够完全抵御H7N9 HPAIV的致死性攻击,20μg pCA-SD098剂量可以有效阻断H7N9 LPAIV的感染。攻毒后,所有免疫鸡无发病、无死亡、无排毒,本研究为质粒pCA-SD098作为防控H7N9禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据。

关键词： H7N9禽流感 DNA疫苗免疫保护效力

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猪IL-21的真核表达及其与CD40L共刺激抗体分泌的活性研究

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中国预防兽医学报 2019年第5期41卷 501-504,533页

作者：杨贝贝符芳薛美冯力刘平黄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为研究猪白介素21(IL-21)的生物学功能,本研究在猪IL-21基因(456 bp)的3’端加上猪Ig G Fc标签序列后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组质粒pcDNA-IL-21-Fc。将该重组质粒转染293T细胞瞬时表达后,利用protein A亲和纯化介... 详细信息

为研究猪白介素21(IL-21)的生物学功能,本研究在猪IL-21基因(456 bp)的3’端加上猪Ig G Fc标签序列后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组质粒pcDNA-IL-21-Fc。将该重组质粒转染293T细胞瞬时表达后,利用protein A亲和纯化介质纯化转染上清中的目的蛋白,并检测其纯度与生物学活性。结果显示,构建的重组质粒pcDNA-IL-21-Fc能够在293T细胞中表达相对分子量约为44 ku的猪IL-21融合蛋白;亲和纯化后的猪IL-21融合蛋白能够与CD40L协同呈剂量依懒性地刺激猪外周血淋巴细胞(PBMCs)分泌Ig G。本研究为进一步探究猪IL-21在适应性免疫应答中的作用提供依据。

关键词：猪IL-21 真核表达蛋白纯化抗体分泌

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免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫脑炎中的作用研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1159-1163页

作者：张永莉胡薇刘强马泽林胡守萍张卓张险峰贾洪林何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工... 详细信息

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工感染第2 d分别对实验组小鼠腹腔注射PBS(RH+PBS组)和PR-957(RH+PR-957组,免疫蛋白酶体亚基LMP7特异性抑制剂),分别于感染后第10 d和第23 d随机迫杀6只小鼠采集脑组织,western blot结果显示,RH+PR-957组小鼠的免疫蛋白酶体亚基LMP7在感染后第23 d时未见其表达被抑制;该组小鼠LMP10和LMP2表达量与RH+PBS组对比变化不大。小鼠存活率结果显示,RH+PR-957组小鼠存活率为67.7%,高于RH+PBS组和PBS组;脑组织病理学结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织内有明显的血管套现象,RH+PR-957组小鼠脑组织有胶质细胞浸润和轻微的血管套现象;免疫组化结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织中小胶质细胞的数量相比于RH+PR-957组增多,细胞突起变长、变粗,呈现高分枝状;荧光定量PCR结果显示,RH+PR-957组小鼠脑组织的促炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的RNA转录水平明显低于RH+PBS组。上述结果表明抑制免疫蛋白酶体亚基LMP7的表达可减弱弓形虫感染引起的小鼠脑部炎症。本研究为免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫性中枢神经系统疾病致病机理的研究奠定基础。

关键词：小鼠弓形虫免疫蛋白酶体亚基LMP7抑制剂PR-957 促炎性细胞因子

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鼠伤寒沙门氏杆菌slrP基因缺失株的构建及其对细胞存活率的影响

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中国预防兽医学报 2019年第7期41卷 677-681页

作者：邵增玉毕彩鸿李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为研究鼠伤寒沙门氏杆菌(ST)E3泛素连接酶SlrP对细胞存活率的影响,本研究利用λ-Red介导的同源重组技术,构建了STCVCC542株slrP基因缺失株(CVCC542ΔslrP),同时得到回补株CVCC542ΔslrP/pslrP。通过测定野生菌、缺失株和回补株的生长曲... 详细信息

为研究鼠伤寒沙门氏杆菌(ST)E3泛素连接酶SlrP对细胞存活率的影响,本研究利用λ-Red介导的同源重组技术,构建了STCVCC542株slrP基因缺失株(CVCC542ΔslrP),同时得到回补株CVCC542ΔslrP/pslrP。通过测定野生菌、缺失株和回补株的生长曲线及其对HeLa细胞存活率的影响,探究SlrP蛋白在ST感染过程中的作用。生长曲线显示,slrP基因的缺失和回补对CVCC542的生长无影响;细胞存活率试验结果显示缺失菌株与野生菌株相比细胞存活率明显升高(p<0.05),而回补株与缺失株相比细胞存活率明显下降(p<0.01)。本研究为进一步阐释ST引起细胞死亡机制和该病疫苗开发奠定基础。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌 λ-Red slrP E3泛素连接酶细胞存活率

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抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究

抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究

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第22届中国科协年会--公共卫生安全与生物技术论坛

作者：李彤彤宋彩玲杨凯越王文静陈慧宇刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨 150069

为了减轻鼠源单克隆抗体(McAb)异源性引起的宿主免疫排斥反应,同时克服生产McAb成本高及费时费力等缺点,利用原核表达制备具有抗犬细小病毒(CPV)鼠源抗体可变区基因的单链抗体(single chain antibody fragment,ScFv).提取实验室前期制... 详细信息

为了减轻鼠源单克隆抗体(McAb)异源性引起的宿主免疫排斥反应,同时克服生产McAb成本高及费时费力等缺点,利用原核表达制备具有抗犬细小病毒(CPV)鼠源抗体可变区基因的单链抗体(single chain antibody fragment,ScFv).提取实验室前期制备筛选的分泌具有良好中和活性抗CPV VP2 蛋白McAb 的杂交瘤细胞株总 RNA,从反转录cDNA 中扩增抗体重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因并克隆到表达载体中,构建重组质粒pOPE101-ScFv;将重组质粒转化大肠杆菌进行诱导表达,通过蛋白免疫印迹(Western blot)实验、酶联免疫吸附试验(en-zyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)证明,利用大肠杆菌表达系统获得的ScFv具有和CPV特异性结合的能力,且具有中和活性,效价为 1∶20(0.028μg/ml),为CPV的临床免疫治疗提供基础.

关键词：犬细小病毒单链抗体原核表达

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人源和禽源H7N9亚型禽流感病毒遗传进化分析及对小鼠的毒力评估

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动物医学进展 2020年第12期41卷 40-46页

作者：郭晶夏瑜杨佳欣张晓璇高鑫鑫刘成李旭勇聊城大学农学院山东聊城252000 苏州市疾病预防控制中心江苏苏州215000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

新型禽源A型H7N9禽流感病毒一直威胁着人类健康,对病毒的遗传进化和生物学特性进行持续研究对于H7N9禽流感的防控十分重要。为了解导致禽类和人类感染的H7N9病毒的进化、突变及其生物学特性,2014年和2015年从中国江苏分离出1株禽源和2... 详细信息

新型禽源A型H7N9禽流感病毒一直威胁着人类健康,对病毒的遗传进化和生物学特性进行持续研究对于H7N9禽流感的防控十分重要。为了解导致禽类和人类感染的H7N9病毒的进化、突变及其生物学特性,2014年和2015年从中国江苏分离出1株禽源和2株人源H7N9病毒,分别对这3株病毒的进化进行了评估。序列分析显示,HA基因在核苷酸水平上有98.7%至99.5%的同源性,并聚集成两个系统发育群。3株病毒的6个内部基因在核苷酸水平上具有96.8%至99.6%的同源性。在2株人源分离株的PB2中有E627K氨基酸位点突变,且在血凝素(HA)切割位点无连续碱性氨基酸插入。动物试验表明,人源分离株SZ19在小鼠中的毒力比禽源分离株CK/SZ141高,接种了SZ19病毒的小鼠体重下降了18%。此外,在观察期间2株试验病毒均未致死小鼠。病理学研究结果显示,与禽源病毒相比,人源H7N9病毒更容易感染小鼠的上呼吸道和下呼吸道。试验结果提示对禽类和人类进行H7N9禽流感系统监测的重要性以及在哺乳动物模型中对H7N9病毒的复制和致病性进行系统评估的必要性。

关键词： H7N9禽流感病毒进化毒力小鼠

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