检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2020年第22期 67-70,76,166页

作者：王宁王涛郭奎姜桂苗赵付伟王晓钧郭巍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒病研究团队哈尔滨150069 东阿阿胶股份有限公司国家胶类中药工程技术研究中心山东东阿252201

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试... 详细信息

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试验和Balb/c小鼠的感染试验。结果表明:特异性PCR方法初步筛选到可能含有马链球菌马亚种的样品。分离纯化后将初步分离的菌株命名为SD2018,染色镜检可见典型的链球菌菌落形态。分离菌株SD2018精氨酸、蔗糖及溶血试验结果均为阳性,其余生化试验结果均为阴性。分离菌株SD2018 16S rRNA基因测序鉴定结果与马链球菌马亚种(JQ726496.1)序列同源性超过99%,判定为马链球菌马亚种。该菌株对苯唑西林、头孢曲松、红霉素、替考拉宁、利福平敏感,10 d内感染小鼠的最小完全致死剂量为1×103 cfu。说明分离菌株SD2018对小鼠致死性强,该规模化养驴场驴腺疫的病原体为马链球菌马亚种。

关键词：驴腺疫马链球菌马亚种分离鉴定耐药性感染力

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细菌鞭毛蛋白免疫佐剂活性作用机制及应用研究进展

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 850-855页

作者：庞胜美吴文文丁雪燕刘思国王晓钧段强德朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patter... 详细信息

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),能激活细胞表面Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)[1]和/或细胞溶质NOD样受体蛋白4(NLR family CARD domain-containing protein 4,NL⁃RC4)[2],发挥免疫佐剂活性[3-4]。

关键词：免疫佐剂鞭毛蛋白 Toll样受体5 细胞溶质结构成分细菌鞭毛蛋白免疫 TLR5

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新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

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中国家禽 2020年第11期42卷 27-32页

作者：罗丹杨伏春高立李凯祁小乐高玉龙刘长军张艳萍崔红玉潘青王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为制备新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特异性抗原σB的多克隆抗体,研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western... 详细信息

为制备新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特异性抗原σB的多克隆抗体,研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,NDRV群特异性抗原σB获得高效表达,重组蛋白分子量约55 ku,该重组蛋白具有良好的免疫活性,能与His-标签抗体及NDRV阳性血清发生特异性结合反应。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价多克隆抗体,效价1∶12 800以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能特异性识别多株NDRV毒株,具有较好的免疫反应活性。研究为建立NDRV血清学诊断方法提供了材料,同时为探究σB蛋白生物学功能奠定了基础。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白 σB 多克隆抗体

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表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热病毒Snyder Hill株的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 12-17页

作者：李翠霞王喜军赵丹丹帅磊步志高葛金英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN... 详细信息

为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN、p CI-CDVP和p CI-CDVL,将重组质粒和辅助质粒共转染BSR细胞,拯救获得了表达RV G蛋白的重组犬瘟热病毒(rCDV-RVG),将该重组病毒在Vero细胞中传代,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定。结果显示RV G基因能够在r CDV-RVG中稳定存在并正确表达。病毒生长动力学曲线显示,重组病毒在Vero细胞中的增殖效率与拯救的亲本病毒r CDV无显著差异(p>0.05)。本研究表明CDV Snyder Hill株作为载体表达外源基因的潜力,为研制高效、安全、廉价的CDV-RV二联活载体疫苗奠定基础。

关键词：重组犬瘟热病毒狂犬病病毒 G蛋白鉴定

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AP2M1在狂犬病病毒侵入中的作用研究

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 6-11页

作者：马骁王翀王金良王子龙王鑫鑫帅磊王喜军葛金英温志远步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等... 详细信息

本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等方法分析AP2M1对RABV感染率的影响。结果显示:敲低AP2M1,RABV感染率显著下降;过表达AP2M1,RABV感染率上升。酸绕过实验显示AP2M1在RABV感染过程中发挥作用。激光共聚焦观察显示RABV G蛋白与AP2M1无共定位。免疫共沉淀实验显示AP2M1与RABV G蛋白无直接相互作用。本研究结果表明,AP2M1基因在RABV感染过程中发挥作用,但不是通过与RABV G蛋白的直接作用影响病毒的感染。本研究为阐明AP2M1在RABV生命周期中具体作用奠定了基础。

关键词： AP2M1 狂犬病病毒病毒侵入 G蛋白

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基于RNAscope^(■)原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 40-45页

作者：马泽林张永莉刘强胡守萍张卓何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为扩大RNAscope~?原位杂交技术(RNAscope~?ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术。经检测不同病毒感染的组织切片... 详细信息

为扩大RNAscope~?原位杂交技术(RNAscope~?ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术。经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性。采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制。利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致。综上,本研究建立的RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope~?ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测。经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段。

关键词： RNAscope^(■)原位杂交免疫组织化学细胞凋亡猪繁殖与呼吸综合征病毒

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绵马酚抑制多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1的机制研究

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 427-433页

作者：贾月华欣刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

mcr-1是近几年发现的一种多粘菌素耐药基因,该基因可随质粒在不同菌株间快速传播,目前已在多个国家及地区被检出,本研究团队前期筛选发现联合使用绵马酚与多粘菌素时可以抑制mcr-1阳性大肠杆菌的生长。为了评价两者联合使用时的抑菌效果... 详细信息

mcr-1是近几年发现的一种多粘菌素耐药基因,该基因可随质粒在不同菌株间快速传播,目前已在多个国家及地区被检出,本研究团队前期筛选发现联合使用绵马酚与多粘菌素时可以抑制mcr-1阳性大肠杆菌的生长。为了评价两者联合使用时的抑菌效果,本研究采用棋盘稀释法对mcr-1阳性大肠杆菌进行了绵马酚与多粘菌素联合药敏实验,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时相比单独使用多粘菌素时,多粘菌素的MIC由8μg/m L降低至1μg/m L,FIC指数小于0.5,二者属于协同作用。以终浓度为32μg/m L绵马酚与10μg/m L多粘菌素联合使用,进一步通过平板计数和透射电镜检测其杀菌效果和大肠杆菌菌体的破损程度,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时,大肠杆菌在2 h^8 h逐渐全部死亡,大肠杆菌菌体破损最严重;但不管是单独使用绵马酚还是多粘菌素,大肠杆菌均不能被彻底杀灭。采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法分别提取mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株和含有16μg/m L的绵马酚的mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株中类脂A,利用质谱仪检测类脂A的结构,结果显示在绵马酚存在的情况下,MCR-1蛋白的作用受到抑制,发生转移的酰基键含量大大减少。采用双酶切法构建PET-28a-mcr-1重组表达载体,经诱导表达后通过镍柱亲和层析纯化得到MCR-1蛋白,利用Biacore大分子作用仪验证绵马酚与重组MCR-1蛋白的相互作用,结果显示绵马酚与MCR-1蛋白之间的亲和力为1.47μmol/L,属于直接结合。表明单独使用绵马酚对mcr-1阳性大肠杆菌无效,但其与多粘菌素联合时则产生了良好的抑菌及杀菌效果,绵马酚是MCR-1的小分子抑制剂。本研究首次确认了绵马酚是MCR-1的小分子抑制剂,对于开发新型抗多粘菌素耐药菌的药物具有重要意义。

关键词：大肠杆菌多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1 绵马酚抑制剂大分子互作

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关于高致病性禽流感灭活疫苗的认知和应用误区

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畜牧兽医科技信息 2021年第10期37卷 7-9页

作者：麻琦宋守生任殿新戈永军田国彬曾显营中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古赤峰市敖汉旗农牧局内蒙古赤峰024300 敖汉惠丰种禽有限责任公司内蒙古赤峰024300

养禽业是农业、农村发展和农民增收的重要组成部分。近20年来,H5和H7N9亚型高致病性禽流感先后对我国家禽养殖业造成严重危害,同时威胁人类健康,引起重大公共卫生关注。疫苗免疫联合扑杀的措施是我国有效控制禽流感的重要策略。国家禽... 详细信息

养禽业是农业、农村发展和农民增收的重要组成部分。近20年来,H5和H7N9亚型高致病性禽流感先后对我国家禽养殖业造成严重危害,同时威胁人类健康,引起重大公共卫生关注。疫苗免疫联合扑杀的措施是我国有效控制禽流感的重要策略。国家禽流感参考实验室创制出一系列防控疫苗并应用,有效控制了我国H5和H7亚型禽流感,保障养禽业健康发展,稳定了禽蛋产品的供应,并成功从家禽源头阻断了人感染H7N9流感病毒,产生巨大经济和社会效益。但在临床应用中,对疫苗的认知和应用还存在一些误区,成为形成家禽免疫防控薄弱环节的重要因素。本文简要总结和分析了对疫苗的相关认知和应用误区,并提出科学建议,以期为高致病性禽流感防控实践提供参考。

关键词：高致病性禽流感疫苗认识和使用误区

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H146-like鹅嵌杯病毒TaqMan-MGB PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2020年第10期42卷 1019-1024页

作者：郑敏张世忠王劭谢开春江丹丹肖世峰陈少莺邓国华福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建省南平市延平区畜牧兽医水产局福建南平353000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立检测H146-like鹅嵌杯病毒(GCV)的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank已登录的H146-like GCV基因组(KY399947)的NS基因保守区序列,设计合成一对能够特异性扩增134 bp片段的特异性引物(GCV-QP3/GCV-QP4)和TaqMan-MGB探针(GCV-Probe),经过反应体系和条件优化,建立了检测H146-like GCV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。当质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL^5.07×10^9拷贝/μL时,荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.995。特异性试验结果显示,该方法对水禽常见病毒(如鹅星状病毒、鹅副粘病毒、鹅细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒与鸭坦布苏病毒等)的检测均为阴性,仅对H146-like GCV检测为阳性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法可以检测到的最低质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL,而常规PCR方法检测该质粒标准品最低为5.07×10^4拷贝/μL,敏感性高;批内和批间的变异系数均小于1.6%,重复性良好。对福建省62份疑似临床组织样品进行检测,结果显示TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法阳性检出率为93.5%(58/62),而常规PCR方法的阳性检出率为72.6%(45/62),两种方法的符合率为77.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏性高,重复性好,在H146-like GCV的快速检测中具有良好的应用前景。

关键词：鹅嵌杯病毒 RNA病毒荧光定量PCR TaqMan探针病毒检测

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鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白的真核表达及其免疫保护效力分析

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 58-62页

作者：周陈陈梁立滨赵青青黄山雨李奇兵王广文李俊平赵玉辉曾显营施建忠李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为进行鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力分析,本研究以鸭源流感病毒A/Duck/Fujian/S4170/2014 (H7N9)HA基因为模板,PCR扩增后将HA片段克隆至昆虫细胞表达载体p Fast Bac1中。将构建的重组质粒p FBacH7HA转化DH10Bac... 详细信息

为进行鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力分析,本研究以鸭源流感病毒A/Duck/Fujian/S4170/2014 (H7N9)HA基因为模板,PCR扩增后将HA片段克隆至昆虫细胞表达载体p Fast Bac1中。将构建的重组质粒p FBacH7HA转化DH10Bac感受态细胞,提取PCR鉴定为阳性的重组杆粒Bacmid-H7HA,转染SF9昆虫细胞。结果显示重组Bacmid-H7HA表达HA蛋白,并装配成重组杆状病毒,将该病毒感染High Five细胞,大量表达H7-HA蛋白。免疫荧光试验、SDS-PAGE及western blot分析结果表明H7-HA蛋白正确表达且纯度达90%以上,血凝试验表明表达蛋白具有良好的生物活性。利用纯化的H7-HA蛋白免疫SPF鸡后进行攻毒保护试验,评价该蛋白作为免疫原对SPF鸡的免疫保护效力,结果显示HA蛋白免疫组鸡只得到100%保护。以上结果表明本研究表达纯化的H7-HA蛋白可以作为防控H7亚型禽流感的候选亚单位疫苗。

关键词： H7N9 HA蛋白杆状病毒表达免疫保护

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