检索结果-内蒙古大学图书馆

新疆农业大学学报 2020年第4期43卷 270-274页

作者：田璐张子博史鑫琪郭慧娟陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的s... 详细信息

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的sgRNA和Cas9质粒的体外转录产物显微注射至C57BL/6近交系小鼠的受精卵中,8只F0代首建鼠中5号小鼠为MDA5基因敲除纯合小鼠;将其与野生型(WT)小鼠合笼繁育出MDA5^(+/-)小鼠,再通过全同胞合笼交配的方式获得纯合子小鼠。基因组PCR后检测显示F2代小鼠中有4只纯合小鼠,进一步RT-PCR结果显示MDA5敲除小鼠各脏器中MDA5基因均未表达,表明基于CRISPR/Cas9技术的MDA5基因敲除小鼠模型构建成功。为进一步研究MDA5在天然免疫应答机制和抗病毒感染等方面提供有价值的模型。

关键词： MDA5 CRISPR/Cas9 基因敲除动物模型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索

引用

中国兽医杂志 2019年第7期55卷 3-7页

作者：杨丽君张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染过程中的作用,采用STAT3特异性siRNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和Western Blot试验显示,其能够明显降低STAT3的mRNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR试验,显示当STAT3的mRNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,Western Blot试验结果也证实抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性siRNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因MxA、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的mRNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了试验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

实验用SPF大白猪和长白猪母系遗传结构分析

引用

农业生物技术学报 2019年第1期27卷 97-107页

作者：辛畅高彩霞权金强马璐璐陈洪岩东北农业大学生命科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

无特定病原体(specific pathogen free, SPF)大白猪(Sus scrofa)和长白猪作为重要的实验动物,其遗传学质量控制研究十分必要。为分析实验用SPF大白猪、长白猪的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)控制区(displacement-loop region, D-loop区)遗传多样性,揭示其母系遗传结构,本研究提取SPF大白猪和长白猪基因组DNA,同时以我国地方品种巴马小型猪和融水小型猪为对照,应用PCR技术扩增其mtDNA D-loop区,进行测序比对。结果显示,107个样本中共检测到40个多态位点,分为13个单倍型,与地方品种相比,大白猪和长白猪单倍型数较少,分别含有3种和2种特有单倍型,只有1个共享单倍型H4。两猪群中各存在1个优势单倍型。单倍型多样度(Hd)分析,融水小型猪单倍型多样度最高(0.767),长白猪最低(0.429),大白猪和巴马小型猪分别为0.566和0.503。此外,中介网络关系图和系统进化树发现大白猪和长白猪与欧洲猪种亲缘关系较近。本研究表明实验用SPF大白猪和长白猪种群的单倍型数较少,各存在1个优势单倍型,遗传多样性低,具有清晰的母系遗传结构。研究结果有利于进一步的实验动物标准化以及遗传质量控制研究。

关键词：无特定病原体(SPF)猪 mtDNA 控制区母系遗传结构

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用信息肽诱导和Cre/LoxP系统构建猪链球菌基因缺失株

引用

中国预防兽医学报 2019年第2期41卷 125-130页

作者：刘冉陈福广陈平黄萌萌朱金鲁谢芳孟庆文刘思国刘建华张跃灵新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐8300522 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种高效的猪链球菌(Streptococcus suis)基因缺失方法,本研究利用信息肽诱导DNA片段转化和Cre/LoxP系统去除抗性基因这两种技术,通过在*** 05ZYH33的ssu05_1921基因上、下游片段和壮观霉素抗性基因(spc)片段之间引入LoxP位点,采... 详细信息

为建立一种高效的猪链球菌(Streptococcus suis)基因缺失方法,本研究利用信息肽诱导DNA片段转化和Cre/LoxP系统去除抗性基因这两种技术,通过在*** 05ZYH33的ssu05_1921基因上、下游片段和壮观霉素抗性基因(spc)片段之间引入LoxP位点,采用信息肽GE9诱导构建的DNA片段转化***并发生重组,经抗性筛选快速获得spc替代ssu05_1921基因的缺失株;进一步引入pSET6s/P_(tufA-cre)质粒表达Cre重组酶作用于LoxP位点,去除spc基因,产生无痕ssu05_1921基因缺失株,经测序和RT-PCR验证缺失正确。本研究建立的该方法简单、快捷、阳性率高,为构建***基因缺失株、研究***致病机制提供了新的选择。

关键词：猪链球菌信息肽诱导 Cre/LoxP系统基因缺失

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡毒支原体GroEL蛋白通过NF-κB信号通路诱导DF-1细胞释放IL-1β的研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第3期41卷 223-228页

作者：张琳陈莹朱可蒙赵雅芝潘巧郝文君于颖辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

鸡毒支原体(MG)脂质相关膜蛋白(LAMPs)在刺激宿主细胞天然免疫中起重要作用,GroEL蛋白是本实验室前期利用质谱鉴定筛选出的LAMPS中的关键组分。为研究GroEL蛋白诱导宿主细胞炎性反应的信号通路,本研究通过原核表达系统表达出MG的GroEL蛋... 详细信息

鸡毒支原体(MG)脂质相关膜蛋白(LAMPs)在刺激宿主细胞天然免疫中起重要作用,GroEL蛋白是本实验室前期利用质谱鉴定筛选出的LAMPS中的关键组分。为研究GroEL蛋白诱导宿主细胞炎性反应的信号通路,本研究通过原核表达系统表达出MG的GroEL蛋白,利用激光共聚焦试验、荧光定量PCR和western blot方法分别检测GroEL蛋白的粘附特性、p65入核、磷酸化水平及IL-1β分泌情况。激光共聚焦试验结果显示,GroEL蛋白能够黏附于DF-1细胞表面并刺激DF-1细胞中p65从胞浆转入细胞核;western blot检测显示GroEL蛋白能够激活NF-κB信号通路促进p65磷酸化水平提高;荧光定量PCR检测显示GroEL蛋白能够促进IL-1β释放,当NF-κB信号通路被抑制后,IL-1β的释放显著下降(p<0.01)。本研究结果表明MG GroEL蛋白能够粘附于宿主细胞表面并通过激活NF-κB信号通路诱导宿主细胞IL-1β的释放,从而在炎症反应中发挥作用。本研究为深入研究MG致病机制提供了实验依据。

关键词：鸡毒支原体 GroEL蛋白 IL-1β p65 NF-κB

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

甲型流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白eIF3f相互作用促进病毒复制的研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第10期41卷 999-1003页

作者：林朝辉张振宇徐菱任会玲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队

甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白1(NS1)是一种重要的毒力因子,其通过与多种宿主细胞因子相互作用抑制宿主细胞天然免疫反应和调控流感病毒复制。为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白,本研究利用H1N1亚型流感病毒NS1蛋白作为“诱饵”蛋白,经过Fla... 详细信息

甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白1(NS1)是一种重要的毒力因子,其通过与多种宿主细胞因子相互作用抑制宿主细胞天然免疫反应和调控流感病毒复制。为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白,本研究利用H1N1亚型流感病毒NS1蛋白作为“诱饵”蛋白,经过Flag pull-down联合质谱分析筛选得到4个与NS1可能相互作用的宿主蛋白eIF3f、ENO1、CCAR2和PSB2。对筛选得到的宿主蛋白评分分析后,针对宿主蛋白eIF3f进行双分子荧光互补分析(BiFC)试验验证NS1蛋白与eIF3f蛋白的相互作用,结果显示eIF3f蛋白与NS1蛋白存在相互作用,并且在HEK293T细胞中瞬时过表达的eIF3f促进了H1N1亚型流感病毒的复制。本研究为进一步探究eIF3f蛋白在流感病毒复制中发挥的生物学功能奠定了基础。

关键词：甲型流感病毒 NS1蛋白 eIF3f蛋白蛋白相互作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 333-337页

作者：孙君帅林朝辉徐菱马建王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救H... 详细信息

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。

关键词： HIV-1 前病毒DNA 转录调控 JunD蛋白 Jurkat细胞系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单抗的制备

引用

中国实验动物学报 2019年第2期27卷 200-207页

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELIS... 详细信息

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELISA技术筛选特异性单抗分泌杂交瘤细胞株。将阳性细胞株制备小鼠腹水,作为一抗,与多次截短表达TAP蛋白肽结合区进行蛋白免疫印迹试验,鉴定单抗针对的抗原表位。通过间接免疫荧光试验比较该单抗对实验鸭和鸡外周血淋巴细胞的反应性,利用免疫组织化学技术检测对SPF鸡、SPF鸭、鹌鹑、鹅和SPF猪的特异性。结果获得一株鸭TAP单抗1A6,抗原表位位于^(297)NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI^(322),对鸡和鸭外周血淋巴细胞具有免疫荧光反应性;在鸡和鸭的肠黏膜固有层检测到大量特异性信号,在猪、鹌鹑和鹅没有检测到信号。结论获得了一株具有鸡和鸭反应性的抗原转运相关体特异性的单抗,可运用于禽类实验动物在禽病学和禽免疫学方面的研究。

关键词：主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体特异性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫效力研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 611-615页

作者：吴姣姣曾显营陈晓涵臧金凯包红梅施建忠邓国华郭兴福刘景利毛胜刚杨帆陈志宇孙项楠路通陈化兰田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7... 详细信息

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究将该疫苗按照现地免疫程序分别接种10日龄白羽肉鸡和14日龄黄羽肉鸡,疫苗接种前和接种后每周采血,分离血清,检测H5亚型Re-8株和H7亚型H7-Re1株禽流感病毒(AIV)HI抗体滴度,并在初次免疫后3周和出栏时以鼻腔感染方式分别进行攻毒试验。结果显示,免疫前,所有肉鸡血清中H7亚型H7-Re1株AIV HI抗体滴度均低于1log2,H5亚型Re-8株AIV平均HI抗体滴度分别为5.3log2(白羽肉鸡)和4.1log2(黄羽肉鸡);一次免疫的白羽肉鸡在免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度在6.0log2~6.7log2;2次免疫的黄羽肉鸡在初次免疫后3周至出栏时,2种亚型AIV平均HI抗体滴度均在6.0log2以上。在一次免疫后3周时和出栏时,采用高致病性H5、H7亚型AIV攻毒后,对照组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均全部死亡,免疫组白羽肉鸡和黄羽肉鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。本研究结果表明,重组AIV二价灭活疫苗对商品肉鸡具有良好的免疫效果,为该疫苗的现地应用提供了参考依据。

关键词：禽流感灭活疫苗 H5+H7 商品肉鸡免疫效力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

马CD63分子的克隆与可溶性表达

引用

黑龙江畜牧兽医 2019年第23期 65-68,169页

作者：孙金辉胡哲初晓雨郭奎王晓钧崔焕忠吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

CD63是巨噬细胞表面的跨膜蛋白,已经证实其对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ)在人巨噬细胞中的复制有重要作用。为了探讨马传染病病毒与巨噬细胞的相互作用,对马巨噬细胞的表面蛋白(CD63)进行体外表达,通过跨膜区分析软件分析CD63蛋白的... 详细信息

CD63是巨噬细胞表面的跨膜蛋白,已经证实其对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ)在人巨噬细胞中的复制有重要作用。为了探讨马传染病病毒与巨噬细胞的相互作用,对马巨噬细胞的表面蛋白(CD63)进行体外表达,通过跨膜区分析软件分析CD63蛋白的跨膜结构,利用分子克隆技术构建不同片段大小的重组质粒,并进行原核表达及诱导条件的优化。结果表明:全长CD63在原核系统中不表达,截短CD63蛋白为包涵体表达,当低温诱导时截短CD63可获得可溶性表达,大小约为20 ku。说明成功获得CD63可溶性表达蛋白。

关键词：巨噬细胞 CD63 跨膜蛋白原核表达可溶性表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：