检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2018年第9期40卷 795-800页

作者：王莉莉于艳超周长平赵雅芝潘巧张琳郝文君王秀梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒p ET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行wes... 详细信息

为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒p ET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行western blot分析,结果显示r DnaK与MG的阳性血清发生特异性反应,与MG的阴性血清无反应条带,表明r DnaK具有较好的免疫反应原性。将其作为包被抗原包被酶标板,用HRP标记的兔抗鸡Ig G作为酶标二抗,分别对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度及工作时间等反应条件进行了优化,建立了一种稳定检测MG抗体的间接ELISA方法。对该方法进行评估,灵敏性试验结果显示该方法与进口试剂盒相当;特异性试验结果显示包被抗原r DnaK不与NDV、IBV、ILTV等几种常见的禽呼吸道疾病的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为1.6%～5.15%,批间变异系数为2.9%～5.98%;符合率试验结果显示该方法与进口试剂盒的总体符合率为90.4%;抗体持续期试验结果显示该方法最早能在鸡群免疫MG疫苗后一周检测到MG抗体,表明该诊断方法适用于MG感染的早期检测。采用该方法检测了来自全国5个省份的568份临床样品,其结果显示MG的感染率在23%～51%,对我国MG的流行状况做了初步的调查。

关键词：鸡毒支原体 DnaK 免疫原性间接ELISA

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HIV-1 Nef蛋白最新功能及其增强病毒感染性分子机理的研究进展

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病毒学报 2018年第1期34卷 113-120页

作者：时静张险峰郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 美国密歇根州立大学微生物和分子遗传系天然免疫实验室东兰辛48824

Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理... 详细信息

Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理解这一附属蛋白的功能和其分子作用机制具有重要意义。Nef蛋白通过三个主要活性调节宿主细胞环境,增强病毒复制。下调细胞表面分子如CD4,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ等的表达,使病毒逃逸宿主的免疫应答;通过调节T细胞的信号通路降低T细胞的活化,从而营造有利于病毒复制的环境;直接增强新生子代病毒粒子的感染性。这一功能的分子机制直到最近宿主限制性因子丝氨酸转运蛋白（SERINC5）的发现才得以明晰。本文总结了Nef的功能及其增强病毒感染性的最新研究进展,同时也归纳了SERINC5蛋白与Nef蛋白的相互作用的研究报道,为深入了解病毒复制机理,改善HIV-1防治方案提供新的理论线索。

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) Nef SERINC5 感染性

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鹅源星状病毒衣壳蛋白的原核表达

鹅源星状病毒衣壳蛋白的原核表达

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：蒲路莎苏世博陈肖韩赵丽丽陈洪岩黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆158308 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.We... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别.本实验利用原核表达系统成功高效地表达了 GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在.

关键词：星状病毒原核表达鹅

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具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平张忠伟蒲路莎赵丽丽陈洪岩吉林省松原市宁江区畜牧业管理局吉林松原 138001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间... 详细信息

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了 1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3.鉴定结果显示,该MAb为IgM亚类,ELISA效价可达到1∶105以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western Blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性.本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株,为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持.

关键词：鸭肠炎病毒单克隆抗体中和活性

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鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建...

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平孙畅赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江 157011

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)和禽非致病性大肠杆菌(Avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善了方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本鉴定和分群。结果显示：该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107 cfu/mL;对其他种属的4株革兰氏阳性菌和5株革兰氏阴性菌无扩增。检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株。初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性。结果表明：APEC检出率为100％,ANPEC的检出率亦为100％。以上结果充分说明本研究建立的多重PCR方法特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC和ANPEC快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查。

关键词： APEC ANPEC 多重PCR

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高通量测序一株天鹅源H5N8亚型流感病毒遗传演化分析

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中国预防兽医学报 2018年第9期40卷 771-774页

作者：赵璐刘建文李月辉昝亚楠李玉磊刘丽娜刘丽玲田国彬曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 天津市动物疫病预防控制中心天津300400

为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clad... 详细信息

为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clade 2.3.4.4分支高致病禽流感病毒(HPAIV);BLAST分析显示该分离株的NP基因与H3N8亚型AIV的NP基因具有较高同源性,而其它基因节段则分别与来自其它国家的H5N8亚型AIV的相应基因节段同源性较高,进一步选取与各基因节段核苷酸同源性较高的病毒株作参考序列构建其系统进化树,推测该分离株为一株重组病毒株。特殊氨基酸位点分析显示,其具有典型的禽型受体结合位点和典型的人型受体结合位点。并且M1蛋白、NS1蛋白和PB2蛋白具有H5N1亚型AIV对鼠致病性增强的分子标志,提示该株野鸟源流感病毒可能具备感染哺乳动物的能力。本研究对H5N8亚型AIV的综合防控具有一定的指导意义。

关键词：禽流感病毒 H5N8亚型高通量测序进化分析

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湖南省2015～2017年主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒监测情况

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中国家禽 2018年第23期40卷 70-72页

作者：何世成彭志王卫国唐小明鲁杏华林源邓国华王昌建湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解湖南省主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的流行情况,将采集的拭子样品接种鸡胚培养后,进行病毒分离,并结合血凝抑制试验和RT-PCR鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示:在2015～2017年采样的3 208份拭子中分离出397株低致病性禽流感... 详细信息

为了解湖南省主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的流行情况,将采集的拭子样品接种鸡胚培养后,进行病毒分离,并结合血凝抑制试验和RT-PCR鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示:在2015～2017年采样的3 208份拭子中分离出397株低致病性禽流感病毒,总分离率为12.37%,其中环境拭子中的低致病性禽流感病毒的分离率最高,达22.22%,其次是鸭拭子为11.62%,鸡拭子为10.70%。本试验共分离出H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11共7种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H3亚型分离率分别达到6.51%、2.21%和1.96%。监测表明:湖南省活禽批发市场中低致病性禽流感病毒隐性感染情况普遍存在。

关键词：活禽批发市场低致病性禽流感病毒监测分离率湖南

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非洲猪瘟对我国养猪业的影响与防控建议

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中国兽药杂志 2018年第11期52卷 1-4页

作者：仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种高度接触传染性、广泛出血性猪病毒病,死亡率可高达100%,无商品化疫苗可用。自今年8月初我国爆发首例非洲猪瘟疫情以来,截至11月5日,短短三个月时间里,已有14个省累计爆发58起疫情,扑杀生猪近50万头... 详细信息

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种高度接触传染性、广泛出血性猪病毒病,死亡率可高达100%,无商品化疫苗可用。自今年8月初我国爆发首例非洲猪瘟疫情以来,截至11月5日,短短三个月时间里,已有14个省累计爆发58起疫情,扑杀生猪近50万头,直接经济损失数十亿元,给我国养猪业造成了巨大冲击。面对前所未有的非洲猪瘟疫情,我国政府的应对是果断有力的,但也面临种种挑战。本文对我国非洲猪瘟疫情形势及其对相关行业的影响进行了分析,总结了非洲猪瘟防控的重点和难点,并针对目前的形势,提出了遏制非洲猪瘟疫情进一步蔓延的建议和对策。

关键词：非洲猪瘟养猪业防控

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猪、鸡与貂源肠外致病性大肠杆菌群型、耐药性与致病性分析

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中国预防兽医学报 2018年第5期40卷 386-391页

作者：许腾林邢桂玲姜成刚刘家森刘大飞姜骞李志杰康洪涛郭东春曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150069

为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病... 详细信息

为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病性试验。实验结果显示:分离出53株ExPEC,且至少携带特异性毒力基因pap、sfa/foc、afa/dra、iutA、kpsMTII中的两种基因,并携带fimH、ibeA、hlyA、malX、iss、iroN等其它相关毒力基因。53株ExPEC分离株对氯霉素、卡那霉素、头孢噻吩、四环素、多粘菌素B、氨苄青霉素等呈现不同程度的多重耐药性;O抗原主要分布于O1、O2、O8、O11、O38、O78、O120血清型;系统进化群分析结果显示:28株属于A群,19株属于B1群,1株为B2群,5株属于D群。选取20株ExPEC分离菌株按照6×10~6cfu/只对小鼠进行腹腔注射,验证其致病性;并测定ExPEC6、ExPEC42、ExPEC52、ExPEC53菌株对BALB/c小鼠的LD_(50),其结果分别为3.49×10~6cfu/mL、9.49×10~5cfu/mL、9.48×10~6cfu/mL、2.38×10~7cfu/mL。本研究为动物源性ExPEC的预防诊断提供依据,并为下一步研究其致病机理等奠定基础。

关键词：肠外致病性大肠杆菌分离鉴定耐药性致病性

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猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：闫文卓周洁胡建华刘铁龙张圆圆赵丽丽陈洪岩陆涛峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 上海实验动物研究中心上海201203 河南省济源市动物卫生监督所河南济源454650

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓... 详细信息

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓度进行确定,建立FPV抗体ELISA检测方法,并进行特异性、敏感性、稳定性进行测定.[结果]抗原和二抗的最佳工作浓度分别为5μg/mL和1∶ 6000,批次内和批次间的变异系数分别为8.68％和7.14％,检测临床血清的灵敏度大于1∶5000,且与猫疱疹病毒 1 型(feline herpesvirus 1,FHV-1)和猫杯状病毒(feline calicivurus,FCV)均无交叉反应,与国外试剂盒符合率达到90.7％.结论 ]建立的抗体ELISA方法重复性、稳定性良好,特异性和敏感性良好,可用于猫FPV抗体检测.

关键词：猫细小病毒猫泛白细胞减少综合征 ELISA

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