检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 427-430页

作者：李伟马乐郭立平王晓磊步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型西尼罗病毒(WNV),本研究参考NY99株WNV基因组序列,分段合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列,以及插入缺失的结构蛋白基因位置的gfp报告基因序列,并按WNV基因组顺序克隆于pCI-neo载体中,构建含... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型西尼罗病毒(WNV),本研究参考NY99株WNV基因组序列,分段合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列,以及插入缺失的结构蛋白基因位置的gfp报告基因序列,并按WNV基因组顺序克隆于pCI-neo载体中,构建含有GFP基因的WNV复制子重组质粒pWNVrep-GFP;同时构建表达WNVC蛋白的重组质粒pCAG-WNV-C。将pWNVrep-GFP和pCAG-WNV-C共转染稳定表达WNVprM-E蛋白的W-92细胞系进行WNV粒子包装及病毒粒子拯救。结果显示转染细胞能够表达GFP,将转染细胞培养液接种BHK-21细胞后,能感染细胞并且表达GFP,westernblot可以检测到分子质量为42ku的NS1蛋白条带。然而,感染BHK-21细胞的培养液不能再感染BHK-21细胞,表明拯救的病毒只具有一次感染能力,为复制缺陷型病毒。WNV阳性血清能中和拯救病毒对BHK-21细胞的感染,该复制缺陷型病毒为WNV中和抗体检测和疫苗评价提供了相关的技术平台。

关键词：西尼罗病毒复制子细胞系复制缺陷型病毒中和抗体

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2016年国际马传染病疫情动态

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 248-250页

作者：马建孙君帅王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

根据世界动物卫生组织（OIE）官方发布的疫情通报，主要参考疫病信息周报（Weeklydiseaseinformation）、及时通报和跟踪报告（Immediatenotificationsandfollow-ups）检索项中的信息，并参考2015年国际马传染病疫情动态，对收入疫病目... 详细信息

根据世界动物卫生组织（OIE）官方发布的疫情通报，主要参考疫病信息周报（Weeklydiseaseinformation）、及时通报和跟踪报告（Immediatenotificationsandfollow-ups）检索项中的信息，并参考2015年国际马传染病疫情动态，对收入疫病目录中的马传染性疾病在2016年的疫情动态进行了回顾，并按病毒、细菌和寄生虫性传染病做分类总结。

关键词：疫情动态传染病国际世界动物卫生组织疫情通报传染性疾病寄生虫性信息

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中国H5亚型禽流感病毒流行现状

中国H5亚型禽流感病毒流行现状

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：邓国华施建忠崔鹏飞陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

引言H5亚型高致病性禽流感病毒不仅对养禽业的危害巨大,而且还严重威胁着人类生命健康。为全面了解和掌握我国H5亚型高致病性禽流感病毒的生态学和变异情况,国家禽流感参考实验室自2008年开始在全国范围内对重点家禽养殖区域系统开展了... 详细信息

引言H5亚型高致病性禽流感病毒不仅对养禽业的危害巨大,而且还严重威胁着人类生命健康。为全面了解和掌握我国H5亚型高致病性禽流感病毒的生态学和变异情况,国家禽流感参考实验室自2008年开始在全国范围内对重点家禽养殖区域系统开展了禽流感流行病学调查研究工作。材料与方法采集家禽的咽喉拭子和泄殖腔拭子,接种9～11日龄鸡胚进行病毒分离。提取血凝抑制鉴定为H5

关键词：禽流感病毒流行现状

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猪δ冠状病毒M蛋白的原核表达、纯化与鉴定

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黑龙江八一农垦大学学报 2018年第5期30卷 41-45页

作者：魏姗石达陈建飞冯力孙东波黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

δ冠状病毒是一种可以感染哺乳动物和鸟类的新型冠状病毒,其中,猪δ冠状病毒可以引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成了巨大的损失。为了获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)M基因重组蛋白,试验克隆了PDCoV... 详细信息

δ冠状病毒是一种可以感染哺乳动物和鸟类的新型冠状病毒,其中,猪δ冠状病毒可以引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成了巨大的损失。为了获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)M基因重组蛋白,试验克隆了PDCoV NH毒株的M基因,并连接至pET-32a原核表达载体,构建了PDCoV M基因重组质粒(pET-32a-M),将pET-32aM重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)后,利用1 mM浓度IPTG进行诱导表达,进一步对表达的PDCoV重组M蛋白进行纯化与鉴定。结果显示,以PDCoV NH毒株病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出约654 bp的M基因,与预期大小相符;SDSPAGE电泳结果显示,PDCoV M基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功获得表达,表达的重组M蛋白大小为42 kD,与预期大小相符;通过western blot进行鉴定,结果显示,纯化的重组M蛋白能与PDCoV阳性血清发生反应,具有良好的抗原性。研究成功表达了PDCoV M蛋白,为PDCoV的进一步研究奠定了基础。

关键词：猪δ冠状病毒 M蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹

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兽用疫苗中替代方法的研究进展

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实验动物科学 2018年第1期35卷 67-71页

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。

关键词：兽用疫苗安全性检验效力检验替代

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兔出血症病毒特异性核酸适配体的筛选

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中国动物传染病学报 2017年第2期25卷 9-13页

作者：焦美会刘家森姜骞陆涛峰胡小亮蒋艳妹曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶... 详细信息

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为"一抗",以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为"二抗",对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列。随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体。

关键词：兔出血症病毒适配体 SELEX技术

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禽呼肠孤病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立及病毒组织分布比较研究

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中国动物传染病学报 2017年第2期25卷 56-60页

作者：钟丽孙美玉高立刘永振李凯祁小乐高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据本实验室分离禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已发布ARV标准毒株σC基因序列比对结果,在保守区域设计1对引物和1条特异性TaqMan探针。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的Real-time RT-PCR在1×10~1~1×... 详细信息

根据本实验室分离禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已发布ARV标准毒株σC基因序列比对结果,在保守区域设计1对引物和1条特异性TaqMan探针。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的Real-time RT-PCR在1×10~1~1×10^(10) copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10 copies/μL,是常规PCR方法的100倍。本研究建立的RTPCR与其他禽病病原无交叉反应,且批间与批内重复性试验变异系数分别小于1%和2%,表明该方法具有良好的特异性和重复性。将本实验室分离流行毒株MS01和标准毒株S1133感染SPF鸡后,利用建立的Real-time RT-PCR对ARV在鸡体内组织脏器的分布及病毒载量进行比较研究,结果表明,毒株MS01及S1133对SPF鸡的致死率分别为80%和46.7%,两株病毒均能在肝脏、脾脏、肺脏中有效复制,毒株MS01病毒载量明显高于毒株S1133,但与毒株S1133不同,毒株MS01在肾脏组织中也能有效复制。本研究不仅为禽呼肠孤病毒的诊断提供了技术手段,也有利于进一步探索流行毒株MS01高致病性的分子机制。

关键词：禽呼肠孤病毒 σC基因 Taqman RT-PCR 组织分布致病性

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猪伪狂犬病病毒流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力试验

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 713-720页

作者：夏德利黄立平危艳武王一平杜文娟谢永兴吴洪丽冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了阐明猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力,对来自不同年代分离的6株PRV流行毒株进行了gC基因分子变异特征分析,通过接种BALB/c小鼠检验毒株的毒力。对临床病例分离的6株PRV和30个Gen Bank下载的gC基因序... 详细信息

为了阐明猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力,对来自不同年代分离的6株PRV流行毒株进行了gC基因分子变异特征分析,通过接种BALB/c小鼠检验毒株的毒力。对临床病例分离的6株PRV和30个Gen Bank下载的gC基因序列进行分析表明,这6株PRV与2012年以后流行的毒力增强的变异毒株处于同一分支;这些毒株的氨基酸同源性为98.7%~100%,而与经典的PRV-SC毒株的氨基酸同源性仅为93.2%~94.0%。PRV毒株g C蛋白第52~70位氨基酸为高变区,尤其第64~70位出现7个氨基酸(AAASTPA)插入。对gC蛋白糖基化位点分析表明,PRV变异毒株较经典毒株增加了6个O-连接糖基化位点,且gC蛋白B细胞表位出现3处突变,分别为P69R、P80Q和N83G。gC蛋白上硫酸乙酰肝素结合域(HBD)出现2处突变,分别为HBD1第5位氨基酸由经典毒株的P突变为Q,HBD3的第3位氨基酸由Y突变为C。用分离的6株PRV接种BALB/c小鼠试验显示,PRV-HRB和PRV-SH毒株半数致死量(LD50)均为1×10^(3.21)/mL,PRV-DL、PRV-JL及PRV-GZL的LD50为1×10^(3.75)/mL,PRV-JF的LD50为1×10^(4.32)/mL。上述结果阐明了PRV流行毒株g C基因的分子特征及其对小鼠的毒力,为该病毒的致病机制研究提供了科学依据。

关键词：伪狂犬病病毒流行毒株 gC基因分子特征毒力

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4型禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立

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中国兽药杂志 2018年第8期52卷 7-11页

作者：朱庆贺张鹏宇崔红玉王观悦王爽陈曦刘力威史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150000

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5... 详细信息

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。

关键词： 4型禽腺病毒 hexon蛋白原核表达间接ELISA

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H7N9 IAV PB1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1188-1196页

作者：王婉冰曾艳汪亮韩璐王正祥陈化兰李郁朱启运安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

H7N9 A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是对公共卫生安全危害严重的新发人兽共患病病原。为了初步解析H7N9 IAV介导的天然免疫反应的分子机制,本研究将聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)基因克隆至p RK真核表达载体,... 详细信息

H7N9 A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是对公共卫生安全危害严重的新发人兽共患病病原。为了初步解析H7N9 IAV介导的天然免疫反应的分子机制,本研究将聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)基因克隆至p RK真核表达载体,并利用定点突变技术对PB1基因的第96位和第129位核苷酸分别进行定点突变,使其移框编码的PB1-F2基因不表达,排除PB1-F2基因对PB1后续研究的影响。随后,利用双荧光素酶报告基因系统和q RT-PCR分析PB1蛋白对Ⅰ型干扰素(interferons,IFNs)信号通路活化的影响;进而,通过免疫共沉淀实验确定PB1蛋白在维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(retinoic-acidinducible geneⅠ(RIG-Ⅰ)-like receptors,RLRs)信号通路中的作用靶点,最后在293T细胞中分别过表达PB1蛋白和线粒体抗病毒信号分子(mitochondrial antiviral signaling,MAVS)或RIG-Ⅰ,检测PB1对MAVS或RIG-Ⅰ表达量的影响。结果表明,PB1可以显著抑制IFN-β、干扰素刺激反应元件(IFN stimulated response element,ISRE)和核调节因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)报告基因的活性,并下调IFN-β和干扰素诱导基因56(interferon stimulated gene 56,ISG56)、ISG15和CXC趋化因子配体10基因(C-X-C motif chemokine 10,CXCL-10)的表达;PB1可以特异性地和RLRs信号通路中的MAVS相互作用,并且随着PB1蛋白表达的增加,MAVS的表达呈下降趋势,但RIG-Ⅰ的表达不受影响。因此,本研究的实验数据初步表明,H7N9 PB1蛋白可特异性结合RLRs信号通路中重要接头分子MAVS,并能够降低其表达量,从而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其发挥作用的下游信号通路。本研究结果明确了H7N9 IAV PB1蛋白在天然免疫信号通路中的作用靶点,为防控H7N9流感提供理论依据。

关键词： H7N9 聚合酶碱性蛋白1(PB1) Ⅰ型干扰素(IFNs) 线粒体抗病毒信号分子(MAVS)

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