检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 5-9页

作者：谷琳琳马勇包红梅徐海峰孙佳善王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot... 详细信息

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot的方法检测细胞自噬体及自噬流情况。自噬体检测结果表明,AIVM2蛋白能够诱导转染细胞内自噬体积累。通过LC3-IIturnover试验、mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统以及pEGFP-LC3与LAMP1的共定位检测进一步证明,M2蛋白通过阻断自噬体与溶酶体融合,抑制溶酶体对自噬体的降解从而诱导自噬体积累。本研究揭示AIVM2蛋白对细胞自噬的发生具有重要作用,为深入研究自噬在A型流感病毒复制中的调节作用奠定基础。

关键词：细胞自噬 AIV M2蛋白

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一株H6N6亚型野鸟禽流感病毒全基因组序列分析以及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 431-434页

作者：陈思崔鹏飞关立峥谷文丽施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位... 详细信息

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为^(339)PQIETR↓GL^(346),仅有1个碱性氨基酸,具有低致病性AIV的分子特征。此外,分离株表面基因HA、NA均与一株H6N6亚型猪流感病毒A/swine/Guangdong/K6/2010高度同源,而内部基因均与H6N6亚型AIV A/pigeon/Guangxi/161/2014(H6N6)高度同源,提示该分离株基因来源的多样性。小鼠的感染性试验结果显示:该病毒可在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,病毒滴度分别为5.33 log_(10) EID_(50)/mL、4.50 log10EID50/m L,提示其具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究结果为H6亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。

关键词：禽流感病毒 H6N6 生物学特性

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具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 220-224页

作者：沈旦枫王睿郭佃磊霍琳琳刘永刚郭龙军王玉娥李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA... 详细信息

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒原核表达猪源化重组抗体

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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H5N1禽流感病毒NS1蛋白调控I型干扰素应答的分子机制

H5N1禽流感病毒NS1蛋白调控I型干扰素应答的分子机制

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：曾艳王俊勇徐帅王婉冰钟波舒红兵陈化兰雷曹琦朱启运中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室武汉大学生命科学学院医学研究院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

引言高致病性禽流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,常发生重组引起跨种间传播导致人和动物发病或死亡。自2003年以来,H5N1亚型禽流感病毒（AIV）已经在16个国家和地区引起超过800人的感染病例,死亡率达53%。AIV的非结构蛋白NS1不仅是... 详细信息

引言高致病性禽流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,常发生重组引起跨种间传播导致人和动物发病或死亡。自2003年以来,H5N1亚型禽流感病毒（AIV）已经在16个国家和地区引起超过800人的感染病例,死亡率达53%。AIV的非结构蛋白NS1不仅是重要的毒力因子,还可以通过多种途径拮抗干扰素的产生。前期研究结果表明,两株H5N1亚型AIVNS1效应区的5个氨基酸不同导致其抑制I

关键词：禽流感病毒 AIV 干扰素应答 NS1 分子机制

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一株鸽子源的H4N8亚型禽流感病毒的部分生物学特性

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公共卫生与预防医学 2018年第3期29卷 13-17页

作者：刘驰煌谷文丽崔鹏飞邓国华熊涛长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

目的实验室2017年对我国四川省遂宁船山区蜀中食品城进行流行病学调查时从鸽子体内分离鉴定出的一株H4N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/Pigeon/Sichuan/S1185/2017(H4N8)(缩写为PG/SC/S1185/2017)。方法为了解此株从鸽... 详细信息

目的实验室2017年对我国四川省遂宁船山区蜀中食品城进行流行病学调查时从鸽子体内分离鉴定出的一株H4N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/Pigeon/Sichuan/S1185/2017(H4N8)(缩写为PG/SC/S1185/2017)。方法为了解此株从鸽子体内分离到的H4N8亚型AIV的遗传进化特点,对此株病毒进行了全基因组的测序并画出基因进化树来探索其毒株来源,还探究了该株病毒对哺乳动物的感染能力。结果遗传演化分析数据表明,这株病毒株的各个基因节段分别来自于不同亚型流感病毒,基因来源复杂,是一株重组病毒,其具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果表明,该毒株仅能够在小鼠肺脏和鼻甲中产生微弱复制,在小鼠感染病毒3d后并未出现明显临床症状,小鼠活力没有明显的下降,与对照组相比体重变化其实基本相同。结论为今后的流行病学调查中对H4亚型流感病毒的全面监测和综合预防防控提供了数据支持。

关键词：禽流感病毒 H4N8 感染性遗传演化分析

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猪戊型肝炎病毒黑龙江分离株SWHLJ-BXBX全基因组序列的测定与分析

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黑龙江畜牧兽医 2017年第6期 176-178页

作者：李海王刚张交儿何希君刘永刚姜成刚王淑杰涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心哈尔滨150001

为了研究猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)黑龙江分离株SWHLJ-BXBX的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析,试验采用RT-n PCR、5'-RACE、3'-RACE方法和Megalign、MEGA 6等生物学软件对SWHLJ-BXBX的全基因组序... 详细信息

为了研究猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)黑龙江分离株SWHLJ-BXBX的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析,试验采用RT-n PCR、5'-RACE、3'-RACE方法和Megalign、MEGA 6等生物学软件对SWHLJ-BXBX的全基因组序列进行了研究。结果表明:SWHLJ-BXBX全基因组序列去除poly A后全长为7 240 bp,5'UTR有25个碱基,3'UTR全长为70 bp,ORF1编码1 707个氨基酸,ORF2编码674个氨基酸,ORF3编码114个氨基酸,进化树分析表明SWHLJBXBX属于HEVⅣd基因亚型。

关键词：猪戊型肝炎病毒(HEV) Ⅳd基因亚型序列分析全基因组测序序列特征进化树

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结核分枝杆菌三基因融合表达的亚单位疫苗研究

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中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 927-931页

作者：王磊党光辉李鹤宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,... 详细信息

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,将其分别与弗氏不完全佐剂及沙门氏菌菌蜕混合,共分成7组,通过皮下注射的方式免疫小鼠,共免疫3次。每次免疫后两周检测其血清抗体分型与效价、脾脏淋巴细胞的分化及其细胞因子的分泌。结果表明,这些融合蛋白均能够刺激机体产生高滴度的抗体,具有较强的免疫原性,其中融合蛋白Rv0199-Rv0394c-Omp A在一免后2周即可以刺激机体产生较高滴度的抗体。抗体分型结果显示,除阴性对照组外,其余组小鼠血清中Ig G1的滴度均高于Ig G2a。并且机体的免疫反应倾向于体液免疫。其中,沙门氏菌菌蜕的佐剂作用与商品化的弗氏不完全佐剂免疫效果一致。本研究为研制结核分枝杆菌亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗佐剂免疫反应

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RCAS(J)-Luciferase重组病毒拯救及其相关生物学功能鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 177-181页

作者：管晓璐张瑶刘永振祁小乐王永强刘长军崔红玉张艳萍李凯高立王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069

RCAS载体系列是基于A型罗斯肉瘤病毒(RSV-A)所改造而成的反转录病毒感染性克隆,转染易感细胞后,能够产生高滴度的RSV-A病毒。同时,RCAS载体可携带外源基因进入靶细胞,从而进行蛋白的高效表达。为了获取滴度高且易于检测的RSV,进行ALV-J... 详细信息

RCAS载体系列是基于A型罗斯肉瘤病毒(RSV-A)所改造而成的反转录病毒感染性克隆,转染易感细胞后,能够产生高滴度的RSV-A病毒。同时,RCAS载体可携带外源基因进入靶细胞,从而进行蛋白的高效表达。为了获取滴度高且易于检测的RSV,进行ALV-J受体方面的研究,本研究将RCAS(A)-GFP载体中RSV-A的囊膜蛋白基因替换为ALV-J的囊膜蛋白基因,并将绿色荧光蛋白报告基因(gfp)替换为海参荧光素酶(luciferase)报告基因,构建带有luciferase报告基因的囊膜蛋白为ALV-J囊膜蛋白的RSV重组病毒。经验证,本研究所构建的重组病毒,与传统的ALV-J株相比,具有复制能力强,病毒滴度高等优点,而且能够通过ALV-J特异性受体ch NHE1感染ALV-J非允许细胞系,有利于病毒感染初期的检测和定量,为病毒与其受体之间相互作用的研究奠定了基础。

关键词： RCAS Luciferase 重组病毒受体

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J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的真核表达纯化及其生物学活性分析

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 815-819页

作者：张瑶任超琪于蒙蒙高祥管晓璐祁小乐王永强刘长军王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069

gp85蛋白是禽白血病病毒(ALV)的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,通过识别和结合受体介导病毒侵入宿主细胞。为表达具有正确构象和生物学活性的J亚群ALV(ALV-J)gp85蛋白并对其生物活性进行分析,本研究以pCAGGS为载体,构建N端带有信号... 详细信息

gp85蛋白是禽白血病病毒(ALV)的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,通过识别和结合受体介导病毒侵入宿主细胞。为表达具有正确构象和生物学活性的J亚群ALV(ALV-J)gp85蛋白并对其生物活性进行分析,本研究以pCAGGS为载体,构建N端带有信号肽编码序列、C端融合Fc编码序列的gp85重组表达质粒pCAGGS-s-gp85-Fc,将其转染293T细胞进行瞬时表达,收集细胞培养液。SDS-PAGE结果表明,gp85-Fc蛋白高效表达,并且经Protein A亲和层析纯化得到高纯度的gp85-Fc蛋白。利用HRV 3C蛋白酶切除Fc标签并且进行分子筛纯化,得到纯度高于90%的gp85蛋白单体。经过流式细胞仪检测,表达的可溶性gp85蛋白能够与ALV-J受体特异性结合。病毒感染阻断试验结果显示,gp85蛋白能够通过封闭受体阻断ALV-J进入DF-1细胞,并且呈现剂量依赖性,在100μg/mL时仍能阻断70%以上的病毒侵入。本研究可溶性的、具有生物学活性的gp85蛋白的制备为体外研究病毒感染宿主细胞机制奠定了的基础。

关键词： J亚群禽白血病病毒 gp85 表达纯化生物学活性

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