检索结果-内蒙古大学图书馆

1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

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疱疹病毒潜伏相关转录体的生物学特性

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 855-860页

作者：高俊刘荻萩马月王晓钧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

疱疹病毒是能够对人类和动物健康造成严重危害的烈性病原，其不同成员在生物学、致病性和分子特征上有很大的相似性。疱疹病毒共同的生物学特征就是可以发生潜伏感染，并且这种潜伏感染在应激和药物等刺激后发生再激活。

关键词：生物学特性疱疹病毒转录潜伏感染生物学特征动物健康分子特征相似性

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上海市某奶牛场一起破伤风疫情的紧急流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第6期35卷 1-4,7页

作者：杨德全陈冈杨显超鞠厚斌沈莉萍卢军徐锋周锦萍刘春国王靖飞上海市动物疫病预防控制中心上海201103 金山区动物疫病预防控制中心上海201500 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2017年7月,上海市金山区某奶牛场出现未知原因的奶牛死亡病例。为查明疫病发生原因,分析可能的风险因素,以便及时提出防控建议,采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方式,对该起疫情进行了调查。调查结果显示:该奶牛场陆续有10头... 详细信息

2017年7月,上海市金山区某奶牛场出现未知原因的奶牛死亡病例。为查明疫病发生原因,分析可能的风险因素,以便及时提出防控建议,采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方式,对该起疫情进行了调查。调查结果显示:该奶牛场陆续有10头奶牛出现牙关紧闭、流涎、全身肌肉紧张等症状,袭击率为4.7%(10/211);6头奶牛死亡,死亡率为2.8%(6/211)。根据发病情况和"木马样"特异性症状,结合有断尾伤口以及破伤风抗毒素干预有效,确定患病奶牛为断尾引起的破伤风感染。追溯调查发现:牛场牛粪清理不及时,牛舍消毒频次低,再加上发病前及发病期间适宜的气候条件,导致牛舍环境中的破伤风梭菌大量繁殖;而奶牛断尾前未严格消毒,以及高温、断尾对奶牛产生了应激,使其抵抗力下降,导致断尾奶牛感染了破伤风梭菌。通过对发病奶牛注射破伤风抗毒素,同时加强生物安全,改善环境卫生,减少奶牛应激反应,最终疫情得到了有效控制。

关键词：破伤风紧急流行病学调查奶牛断尾伤口

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等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用

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动物医学进展 2017年第8期38卷 103-109页

作者：高瑶孟星宇罗玉子胡永浩仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸... 详细信息

等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)、链置换等温扩增(SDA)、交叉引物扩增(CPA)5种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍,为该技术在病原检测的实际应用提供参考。

关键词：等温扩增技术原理病原检测

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犬Serinc5对HIV-1复制能力影响的研究

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 182-185页

作者：林玉美时静高雪张险峰郑永辉中国农科院哈尔滨兽医研究所-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

丝氨酸整合因子5(Serinc5)是最新报道能够被携带到病毒粒子中的宿主限制性因子,具有抵抗人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性的作用。与人Serinc5(hSerinc5)具有高度同源性的犬Serinc5存在两种形式,一种为全长基因组编码的犬Serinc5(cSeri... 详细信息

丝氨酸整合因子5(Serinc5)是最新报道能够被携带到病毒粒子中的宿主限制性因子,具有抵抗人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性的作用。与人Serinc5(hSerinc5)具有高度同源性的犬Serinc5存在两种形式,一种为全长基因组编码的犬Serinc5(cSerinc5),另一种为转录剪接体(cSerinc5X2),该剪接体在N端缺少1~37位氨基酸。为鉴定这两种犬Serinc5是否具有抑制HIV-1的复制能力,本研究从犬肾细胞系MDCK中提取犬总RNA,经RT-PCR分别扩增两种犬Serinc5的cDNA,并克隆到pcDNA3.1载体中,构建编码两种犬Serinc5的重组质粒。将这两种重组质粒分别与编码HIV-1野生型或Nef缺失型的质粒共转染293T细胞,收获所产生的HIV-1病毒粒子,通过ELISA方法检测到这两种犬Serinc5对HIV-1病毒粒子的产量无影响。进一步将病毒粒子分别感染TZM-bl细胞,通过荧光强度检测结果显示,与对照组相比,cSerinc5X2对HIV-1感染性无显著抑制作用,而携带cSerinc5的HIV-1感染性与携带cSerinc5X2的病毒和对照组相比降低约9倍(p<0.01),表明cSerinc5的N端对于病毒感染活性的抑制具有关键作用。本研究为鉴定Serinc5抗病毒的功能区提供实验依据。

关键词： HIV-1病毒犬Serinc5 跨膜蛋白Nef 感染性限制性因子

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与结核分枝杆菌PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的宿主蛋白的筛选

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 504-507页

作者：李田田陈利苹刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(... 详细信息

为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(在5'端引入了以编码烟草蚀纹病毒蛋白酶切位点的序列连接的ZZ和Flag标签序列),构建诱饵重组质粒pcDNA-PE25-PPE41和pc DNA-PE35-PPE68。分别将构建的诱饵重组质粒转染293T细胞后提取细胞总蛋白,经ZZ和Flag标签蛋白两步串联亲和层析钓取宿主蛋白,SDS-PAGE电泳分离后切取差异蛋白胶条进行质谱分析,结果显示,PE25/PPE41鉴定到15个差异蛋白,PE35/PPE68鉴定到29个差异蛋白,并分别挑选了与PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的3个和7个差异蛋白,为进一步验证与PE25/PPE41和PE35/PPE68直接作用的宿主蛋白及研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 PE25/PPE41 PE35/PPE68 宿主互作蛋白串联亲和纯化

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实验用SPF大白猪和长白猪SLA-1基因特征分析

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农业生物技术学报 2017年第5期25卷 770-780页

作者：权金强江新杰李昌文路小野陈洪岩赵生国高彩霞甘肃农业大学动物科学技术学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室牡丹江师范学院生命科学与技术学院

猪(Sus scrofa)白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)基因是引起异种移植细胞性免疫排斥的遗传因素之一。为丰富经典实验动物模型,解决异种器官移植模型缺乏问题,本研究采取实验用无特定病原体(specific pathogen free,SPF)大白猪... 详细信息

猪(Sus scrofa)白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)基因是引起异种移植细胞性免疫排斥的遗传因素之一。为丰富经典实验动物模型,解决异种器官移植模型缺乏问题,本研究采取实验用无特定病原体(specific pathogen free,SPF)大白猪和长白猪抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,反转录c DNA,设计特异性引物进行PCR扩增测序,获得SLA-1基因,并进行特征分析。本研究共鉴定了16个SLA-1等位基因,各含有一个全长1 086 bp的完整开放阅读框,核苷酸多样度(nucleotide diversity,Pi)为0.045 59,单倍型多样度(haplotype diversity,Hd)为0.000 49,平均核苷酸差异数(average number of nucleotide differences,K)为49.508,G+C含量高达60.9%。150个核苷酸变异位点中简约信息位点(nucleotide parsimony informative sites,NPi)远高于单一多态位点(nucleotide singleton variable sites,NS);共编码361个氨基酸,产生82个突变,非同义突变(non-synonymous mutation sites,NSS)远高于同义突变(synonymous mutation sites,SS)。SLA-1等位基因多态性集中在第2和3外显子,33个关键氨基酸有9个保守位点,与人白细胞抗原-A(human leukocyte antigen-A,HLA-A)基因相同的位点有8个。HLA-A与β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)结合的19个氨基酸中,11个氨基酸与SPF大白猪和长白猪保持一致;人(Homo sapiens)和SPF大白猪、长白猪CD8分子与主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)结合的关键氨基酸位点高度保守,只有225(Thr/Ser)和228(Thr/Met)位点不同。系统进化树表明,SPF大白猪和长白猪与Yucatan、韩国本地猪和梅山猪亲缘关系较近。本研究成功鉴定了16个SLA-1等位基因,高度多态,且SLA保留了HLA的部分功能位点。研究结果为构建动物模型以及相关的抗原递呈和免疫应答反应提供遗传学参考依据。

关键词：无特定病原体(SPF)大白猪 SPF长白猪猪白细胞抗原(SLA)基因特征

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ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 667-672页

作者：王鑫石达董慧曹丽艳陈建飞时洪艳张鑫冯力东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART... 详细信息

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×108 CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000bp,平均大小约为500bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。

关键词：猪细小病毒酵母双杂交 ST细胞 cDNA文库

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应用酵母双杂交系统筛选与流感病毒PB2蛋白相互作用的宿主蛋白

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 15-19页

作者：孙楠梁立滨王金光李俊平罗维玉赵玉辉朱鹏阳姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA转录起始阶段,辅助病毒mRNA引物的合成,并能够影响病毒的宿主范围,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂... 详细信息

流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA转录起始阶段,辅助病毒mRNA引物的合成,并能够影响病毒的宿主范围,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选由Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞构建的cDNA文库,筛选到多个与PB2蛋白相互作用的宿主蛋白。针对其中筛选到的一种宿主蛋白FHL2,进行免疫共沉淀(Co-IP)和激光共聚焦(Confocal)试验,证实了PB2蛋白和FHL2蛋白二者之间存在相互作用,并且转染瞬时过表达FHL2发现该蛋白可以负调控流感病毒复制,为进一步研究PB2蛋白与FHL2蛋白互作及影响病毒复制的分子机制奠定了基础。

关键词：流感病毒 PB2蛋白酵母双杂交免疫共沉淀激光共聚焦 FHL2

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鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2914-2922页

作者：王曼曼赵妍张雪梅刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员。FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用。重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入... 详细信息

【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员。FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用。重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入位点的前提。因此,鉴定可供外源基因插入的复制非必需位点将为重组病毒的构建提供更多选择。本研究拟鉴定FPV NX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒复制中的必要性。【方法】以TK基因作为靶基因,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记构建转移载体,FPV NX10株为亲本病毒,通过同源重组筛选重组病毒r FPV-ΔTK-EGFP。通过在CEF细胞培养物中添加5-溴脱氧尿苷(BUd R)验证TK基因在FPV复制中的作用。【结果】构建了转移载体p UC19-TK AB-EGFP。在转染后重组病毒克隆纯化过程中,蚀斑克隆中绿色荧光病变所占的比例逐渐增加,但在荧光蚀斑的边缘能观察到不带荧光病变的存在。对第9-15轮随机选取的蚀斑克隆的Western blot分析表明,重组病毒中插入的EGFP基因均能够正确表达,但PCR结果显示在重组病毒中始终存在野生型病毒。在细胞培养液中添加BUd R后,重组病毒不能继续生长。【结论】FPV NX10毒株TK基因在该病毒的复制中不是完全非必需的。

关键词：鸡痘病毒 TK基因重组病毒复制非必需基因

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