检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 435-438页

作者：林欢么帅脱添蓓王永强高祥韩春燕高宏雷高玉龙祁小乐刘长军张艳萍王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为分离鉴定一株鸡传染性贫血病毒(CAV),以及了解其基因组特征,本实验利用MDCC-MSB1细胞对黑龙江某鸡场疑似患病鸡的肝脏组织进行病毒分离,经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离得到一株CAV,命名为HLJ16069。克隆该病毒株全基因组,... 详细信息

为分离鉴定一株鸡传染性贫血病毒(CAV),以及了解其基因组特征,本实验利用MDCC-MSB1细胞对黑龙江某鸡场疑似患病鸡的肝脏组织进行病毒分离,经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离得到一株CAV,命名为HLJ16069。克隆该病毒株全基因组,测序拼接后获得全长序列,将该病毒株序列与国内外已发表的其它病毒全基因组序列进行同源比对和进化分析,结果显示同源性达96.0%以上,亲缘关系最远的是中国分离株SD1403,而与日本分离株C369亲缘关系最近(99.1%);氨基酸序列分析显示,HLJ16069在VP1的75、89、141和394位氨基酸存在有意义的突变。本研究发现了一些与CAV毒力相关的分子特征,为CAV的毒力变化提供了数据支持。

关键词： CAV 病毒分离全基因组毒力

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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 167-171页

作者：张杰罗维玉周圆王广文赵玉辉周陈陈黄山雨李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病... 详细信息

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。

关键词：酵母双杂交 Co-IP NP蛋白 SNRPA蛋白相互作用

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鸭致病性大肠杆菌研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2017年第8期 72-77页

作者：孙畅牛银杰尹海畅徐丽晶陈洪岩弥春霞赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

近年来,由禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的禽大肠杆菌病给全球的养禽行业造成了重大的经济损失,并且APEC引起的禽大肠杆菌病在中国是最主要的家禽细菌病。越来越多的证据显示,APEC是人源尿路感染大肠杆... 详细信息

近年来,由禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的禽大肠杆菌病给全球的养禽行业造成了重大的经济损失,并且APEC引起的禽大肠杆菌病在中国是最主要的家禽细菌病。越来越多的证据显示,APEC是人源尿路感染大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)和致脑膜炎大肠杆菌(neonatal meningitis Escherichia coli,NMEC)的毒力基因储藏库,甚至可能会直接导致两种疾病的发生。因此,如何有效地控制APEC不仅是一个紧迫的问题,更是一个巨大的挑战。对APEC的分离鉴定、流行病学特征、药物敏感性等内容的研究对APEC引起的禽大肠杆菌病的控制具有指导意义。为了更好地防控大肠杆菌病,文章主要从临床症状、病理变化、毒力因子、致病机理和诊断方法几个方面对鸭致病性大肠杆菌进行了综述,以期为进一步研究提供参考。

关键词：鸭大肠杆菌病毒力因子致病机理诊断方法

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鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备

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江苏农业科学 2018年第17期46卷 175-177页

作者：孙芬芬高玉龙潘伟王笑梅徐州医科大学形态学实验教学中心江苏徐州221004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004

通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a... 详细信息

通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a(+)载体连接,获得阳性重组子p ET-28a-VP1Nd129,将其转化入*** BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达出VP1Nd129蛋白;后者通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示,CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达,并主要以包涵体形式存在;纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达,制备的兔抗血清反应性好,为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白原核表达纯化兔抗血清

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表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白重组LaSota疫苗株的构建

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中国预防兽医学报 2017年第5期39卷 407-411页

作者：赵雯刘瑞菊孙军峰刘怀然韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150069 山东省寿光市畜牧兽医局山东寿光262700

基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技术,将LaSota的F基因编码区(CDS)替换为基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH... 详细信息

基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技术,将LaSota的F基因编码区(CDS)替换为基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因CDS,并将替换后的F蛋白的裂解位点突变为LaSota的裂解位点,构建重组质粒pNDFLsp-mF。将pNDFLsp-mF与表达NP、P和L蛋白的辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞,拯救获得表达基因Ⅶ型NDV F蛋白的重组病毒(rLaSota-mF)。生长曲线结果显示,与LaSota相似,rLaSota-mF能够在鸡胚中有效复制,病毒滴度EID50为109.375/0.1 mL。生物学特性测定结果显示rLaSota-mF的MDT为144.6 h,表明其为低毒力病毒株。将拯救获得的病毒连续传15代后所替换的基因及突变的位点能够在r LaSota-mF中稳定存在。本研究为研究与开发针对NDV不同基因型流行病毒株的疫苗奠定基础。

关键词：新城疫病毒基因VII型 F蛋白裂解位点

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猪传染性胃肠炎病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验原位检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 237-239页

作者：朱蕴暖张鑫朱向东陈建飞时洪艳石达冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为... 详细信息

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为0.5 ng/μL,二抗的最佳稀释倍数为1∶2 000倍,经AEC显色,TGEV感染的阳性细胞呈红棕色;对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好特异性;同时该方法能够在普通显微镜下观察到病毒在细胞中的分布情况。本研究建立的方法为TGEV的实验室鉴定及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供有效的检测手段。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白过氧化物酶单层试验

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2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第2期35卷 5-8页

作者：黄建龙王昌建邓国华何世成宁华杰张朝阳林源湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410013

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3... 详细信息

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3、H5、H6、H7、H9和H10等6种亚型禽流感病毒。其中,H9和H5亚型禽流感病原阳性率较高,分别为8.7%和3.8%。调查结果表明,长沙市活禽批发市场中的禽流感病毒污染面较广。建议加强活禽市场管理,特别要做好市场的清洗消毒工作。

关键词：活禽批发市场禽流感病毒分离流行病学调查长沙市

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我国类NADC30猪蓝耳病的流行现状

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中国猪业 2017年第11期12卷 24-25页

作者：安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

自2012年以来,我国猪群中出现PRRSV的一种新亚型毒株,因其与美国PRRSV NADC30株具有较高的同源性,因此被称为类NADC30 PRRSV。目前类NADC30 PRRSV已在我国16个省份相继分离到,并且在近年来我国PRRSV中占据相当大的比例。类NADC30 PRRSV... 详细信息

自2012年以来,我国猪群中出现PRRSV的一种新亚型毒株,因其与美国PRRSV NADC30株具有较高的同源性,因此被称为类NADC30 PRRSV。目前类NADC30 PRRSV已在我国16个省份相继分离到,并且在近年来我国PRRSV中占据相当大的比例。类NADC30 PRRSV的出现,不仅增加了我国PRRSV流行毒株的复杂性,而且增加了猪蓝耳病防控的难度。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征类NADC30毒株流行病学

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猫细小病毒HH-1/86株理化性质鉴定及全基因组测序

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中国兽医学报 2017年第5期37卷 818-822页

作者：程楠赵永坤于永乐希冀王化磊冯娜张渭蛟高玉伟杨松涛刘维全夏咸柱中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100093

本试验对HH-1/86株细小病毒进行了理化性质鉴定和全基因组序列分析。研究结果表明,电镜下可见少量直径20nm左右的立体对称细小病毒粒子。该病毒对热、酸、乙醚具有一定的耐受性,pH在5.8~6.8的0.015mol/L PBS均能凝集0.1%猪红细胞,其中pH... 详细信息

本试验对HH-1/86株细小病毒进行了理化性质鉴定和全基因组序列分析。研究结果表明,电镜下可见少量直径20nm左右的立体对称细小病毒粒子。该病毒对热、酸、乙醚具有一定的耐受性,pH在5.8~6.8的0.015mol/L PBS均能凝集0.1%猪红细胞,其中pH6.5血凝活性最佳。HH-1/86株细小病毒的全基因长5 123nt。其中,A+T含量63.65%,C+G的含量为36.35%。3′末端反向重复序列(inverted terminal repeats,ITR)形成Y型结构,长126nt;5′末端ITR形成U型结构,长198nt。利用MEGA 6.0软件的邻接法(Neighbor-Joining,Replication=1 000)对NS1和VP2基因编码氨基酸进行的种系发生树分析表明,VP2蛋白归于FPV分支,VP2蛋白10个决定抗原性、血凝性和宿主范围的关键氨基酸位点与FPV参照株一致;而NS1蛋白相对保守,归于独立的分支。

关键词：猫细小病毒血凝两端反向重复序列序列分析

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Leachii支原体PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 912-915页

作者：陈嘉常继涛王建发杨颗粒武瑞于力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立一种leachii支原体的检测方法,本研究根据leachii支原体LPPA外膜蛋白编码基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。结果显示,该方法仅对leachii支原体扩增出539 bp的目的片段,而与牛支原体、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体... 详细信息

为建立一种leachii支原体的检测方法,本研究根据leachii支原体LPPA外膜蛋白编码基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。结果显示,该方法仅对leachii支原体扩增出539 bp的目的片段,而与牛支原体、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、丝状支原体丝状亚种小菌落型、山羊支原体山羊肺炎亚种等其它支原体无交叉反应,具有良好的特异性;该方法对leachii支原体的最低检测浓度为105 ccu/m L,敏感性较高。采用该方法可以在乳汁和关节液等病料样品中检测到leachii支原体,与分离培养的结果相符。上述结果表明,本研究建立的leachii支原体PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,可实现准确、高效检测leachii支原体的目的。

关键词： leachii支原体 PCR 检测

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