检索结果-内蒙古大学图书馆

我国农村电子商务发展探究

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黑龙江科学 2017年第15期8卷 20-21页

作者：李赞彭永刚石星明杨金雨中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

介绍我国农村电子商务的发展现状,对农村电子商务发展中存在的问题进行深入分析,并建议政府加大支持力度、扩大农村电子商务发展规模、完善农村物流体系。

关键词：农村电子商务发展现状存在的问题建议

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HN蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及鉴定

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 671-679页

作者：齐甜铭赵文钧陈玉秋孙军峰马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC... 详细信息

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC标记的重组病毒La Sota-HN-NTC,经鉴定La Sota-HN-NTC能够在鸡胚中有效复制,生长曲线与亲本病毒La Sota相似。Western-blot结果显示,La Sota-HN-NTC中HN蛋白的表达量与La Sota相比无明显变化。La Sota-HN-NTC的毒力稍低于La Sota,并且TC标签能够在重组病毒中稳定存在。La Sota-HN-NTC感染的细胞中能够观察到明显的绿色荧光,表明TC标记的HN蛋白能够正常表达并被双砷染料特异性染色。NDV吸附试验表明,La Sota-HN-NTC吸附细胞受体的能力没有因为TC标签发生改变。激光共聚焦监测到了La Sota-HN-NTC感染细胞中HN蛋白的动态分布。本研究为监测HN蛋白在NDV感染过程中的动态分布,阐明HN蛋白在NDV感染中的作用机制提供了工具和基础。

关键词：新城疫病毒 TC标签 HN蛋白

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表达EGFP蛋白新型重组新城疫病毒疫苗载体的构建

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中国兽医科学 2017年第7期47卷 843-849页

作者：赵冉齐甜铭孙军峰刘怀然韩宗玺杨孝朴刘胜旺甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达... 详细信息

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达外源蛋白,在p NDFLSP-m F的P基因与M基因之间引入PmeⅠ酶切位点,并将EGFP基因编码区克隆至构建好的p NDFLSP-m F载体中,构建含有EGFP基因的重组质粒p NDFLSP-m F-EGFP。将p NDFLSP-m F-EGFP以及辅助质粒p CI-NP-K、p CI-P-K、p CI-LK共转染表达T7 RNA聚合酶的重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,拯救获得了重组病毒La Sota-m FEGFP。通过RT-PCR证明,被拯救的重组病毒中含有插入的外源基因EGFP。荧光观察和Western-blot分析结果表明,EGFP蛋白能在重组病毒中稳定表达。生物学特性测定结果显示,La Sota-m F-EGFP具有低毒力毒株特征,MDT为144 h,能够在鸡胚上有效地复制,EID50为1×108.75/0.1 m L。上述研究结果为研制和开发新型NDV载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型绿色荧光蛋白

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猪伪狂犬病病毒HeN1株gE蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 143-147页

作者：吴桐彭金美田志军王倩陈志宝赵蕊黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点猪病实验室黑龙江哈尔滨150069

为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E(gE)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达PRV HeN1株截短的gE(aa127~aa232)蛋白(rgE),并对表达的rgE进行纯化免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,以该病毒... 详细信息

为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E(gE)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达PRV HeN1株截短的gE(aa127~aa232)蛋白(rgE),并对表达的rgE进行纯化免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,以该病毒感染的Vero E6细胞及真核表达的gE蛋白为检测抗原,采用IFA检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗PRV gE的MAb杂交瘤细胞系(mgE185)。该MAb亚型鉴定为Ig G1型,轻链为Κ链。该MAb不具有中和病毒的活性,其细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶80和1∶2 560。Western blot试验显示mgE185可以特异性识别gE蛋白,表明其针对的抗原表位为线性表位。通过截短表达gE蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为^(151)IGDYL^(155),该抗原表位在PRV中高度保守。本研究制备的MAb为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRV gE-ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：伪狂犬病病毒 g E蛋白原核表达单克隆抗体

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SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒与宿主细胞互作分子网络的影响

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中国预防兽医学报 2017年第8期39卷 605-610页

作者：高琦李海闻晓波刘胜旺冉旭华黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探索SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的影响及调控机制,本研究应用鸡LMH细胞系感染ILTV LJS09株作为实验模型,测定了SU6656对ILTV增殖和毒力的影响,通过高通量RNA测序技术(RNA-Seq)在全基因组范围内检测宿主细胞基因转录谱表... 详细信息

为探索SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的影响及调控机制,本研究应用鸡LMH细胞系感染ILTV LJS09株作为实验模型,测定了SU6656对ILTV增殖和毒力的影响,通过高通量RNA测序技术(RNA-Seq)在全基因组范围内检测宿主细胞基因转录谱表达,并利用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证。进一步的GO功能分析显示,在宿主细胞应答ILTV感染过程中,SU6656所调控基因主要涉及氢离子跨膜运输、辅酶Q的结合、Fe^(2+)和S^(2+)聚集等功能。KEGG通路分析表明,氧化磷酸化通路在SU6656调控ILTV感染的过程中可能发挥重要作用。本研究为进一步解析ILTV感染及致病机制提供了重要依据。

关键词：传染性喉气管炎病毒 RNA-seq SU6656 病毒与宿主互作

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鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1094-1099页

作者：徐丽晶陆涛峰王怡平陈洪岩赵丽丽东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况。本试验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代至第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴... 详细信息

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况。本试验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代至第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID_(50))。结果显示,第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现。初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒。F1~F10代DPV均能扩增出大小为416 bp的UL6基因片段。间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色。连续测定了10代的病毒滴度(TCID_(50))均不低于10^(-6.43),且在DEUCMSC上测定的DPV TCID_(50)明显高于DEF的。说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖。

关键词：鸭瘟病毒鸭胚脐带间充质干细胞生物学特性

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传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析

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中国畜牧兽医 2017年第7期44卷 2096-2102页

作者：高祥李辉张礼洲卢珍王永强高立吴甜甜高玉龙刘长军王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心扬州225009

为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta(DE3)工程菌中优化条件进行I... 详细信息

为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta(DE3)工程菌中优化条件进行IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达,运用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤两种技术串联的方法进行蛋白纯化,运用单克隆抗体介导的Western blotting技术鉴定纯化蛋白的特异性,免疫SPF鸡鉴定纯化蛋白的免疫活性。结果显示,在冷休克条件下,IBDV衣壳蛋白VP2在Transetta(DE3)工程菌中实现了可溶性表达;通过纯化获得了高纯度的VP2,浓度为542μg/mL;该蛋白不仅能与VP2单克隆抗体特异性反应,还能刺激鸡产生特异性免疫应答,具有良好的免疫活性。本研究在IPTG为1mmol/L,15℃、120r/min,诱导时间为24h的条件下,实现了有免疫活性的IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达和纯化。高纯度、可溶、具有功能活性的衣壳蛋白的制备,为深入开展IBDV致病机制研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白可溶性表达纯化

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新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2773-2781页

作者：刘亮亮王娟李慧昕刘胜旺马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd ... 详细信息

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。

关键词：禽腺病毒 La Sota疫苗分离鉴定

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禽腺病毒血清4型的分离鉴定及遗传演化分析

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 755-761页

作者：王娟刘亮亮李慧昕韩宗玺刘胜旺东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究从辽宁发病鸡群采集的病料经SPF鸡胚接种传代分离病毒,并其进行了PCR和测序分析鉴定。结果,从病料中经SPF鸡胚接种传代分离出一株禽腺病毒,经PCR和测序分析鉴定确定该分离株为禽腺病毒C种、血清4型,命名为LN160130;通过对52 k和he... 详细信息

本研究从辽宁发病鸡群采集的病料经SPF鸡胚接种传代分离病毒,并其进行了PCR和测序分析鉴定。结果,从病料中经SPF鸡胚接种传代分离出一株禽腺病毒,经PCR和测序分析鉴定确定该分离株为禽腺病毒C种、血清4型,命名为LN160130;通过对52 k和hexon基因同源性比对,LN160130与我国近年报道的禽腺病毒血清4型同源性最高,52 k和hexon基因的同源性均为100%;与国外流行的血清4型毒株相比,LN160130的52k基因同源性99.3%~100%,hexon基因同源性98.7%~99.8%。遗传演化分析结果表明,LN160130分离株与我国禽腺病毒血清4型流行毒株在同一分支内,而与国外禽腺病毒血清4型毒株不在同一分支,存在遗传差异,说明中国流行的血清4型禽腺病毒有自身地域特点。

关键词：禽腺病毒血清4型病毒分离鉴定分子特征遗传演化分析

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鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 28-33页

作者：周长平陈莹李媛高利萍王显兵王莉莉于艳超辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株gr... 详细信息

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。

关键词：鸡毒支原体热休克蛋白Grp E 粘附鉴定

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