检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2025年第1期45卷 30-38页

作者：董奕彤王晓萌岳凤娇王淑杰王春生东北林业大学生命科学学院中国农业科学院哈尔滨市兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒（mink enteritis virus, MEV）在细胞内的感染过程，为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记，经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾... 详细信息

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒（mink enteritis virus, MEV）在细胞内的感染过程，为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记，经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细胞（CRFK）。CRFK细胞膜经DiO染色后用量子点标记的MEV进行侵染，利用活细胞工作站系统GE Dleta vision观测病毒进入细胞膜的过程；对CRFK细胞转染pEGFP-Rab5和pEGFP-Rab7载体来标记早期内体和晚期内体，当细胞感染量子点标记的MEV后观测MEV病毒粒子与早期内体和晚期内体的相互作用。为了进一步验证内体与病毒感染的关系，利用氯喹（chloroquine, CQ）和NH4Cl两种内体酸性抑制剂来抑制内体的酸性环境，对加入抑制剂的感染后的细胞提取细胞内总RNA和蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量；MEV在胞内的转运与细胞骨架相关，为了探究MEV转运与哪种细胞骨架相关，对CRFK细胞分别转染GFP-lifeact和EGFP-MAP4质粒，经GE Dleta vision观测MEV与细胞骨架的关系。选择微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制CytoD剂对感染MEV的CRFK细胞提取细胞内RNA及总蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量。活细胞成像显示MEV首先附着在细胞膜上，并通过内吞作用进入细胞；成像结果显示MEV与Rab5和Rab7在宿主细胞中共定位，用内体酸化抑制剂NH4Cl或CQ预处理宿主细胞后，病毒感染被抑制，表明MEV感染需要内体的酸性环境；活细胞图像显示量子点（QD）-MEV沿着微管运动，使用微管抑制剂Nocodazole抑制了病毒感染，而微丝抑制剂CytoD的加入对感染没有影响。研究结果表明，MEV是通过内吞作用进入CRFK细胞膜，随后进入早期内体及晚期内体，在细胞内的转运过程依赖于微管。

关键词：水貂肠炎病毒量子点单病毒示踪侵染机制

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肽类添加剂在反刍动物生产中的应用研究进展

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动物营养学报 2025年第1期37卷 115-125页

作者：钟新皇张振斌蔡青和王梦芝扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 上海欧耐施生物技术有限公司上海201613 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000

肽是由氨基酸组合连接的活性物质,不仅具有营养性作用,而且具备特定的生物活性功能。肽对机体的活性作用表现在促进养分吸收和代谢、抗炎、抗氧化、免疫调节和维护肠道健康等方面。在动物生产中,肽能够促进动物生长、提高生产力、维持健... 详细信息

肽是由氨基酸组合连接的活性物质,不仅具有营养性作用,而且具备特定的生物活性功能。肽对机体的活性作用表现在促进养分吸收和代谢、抗炎、抗氧化、免疫调节和维护肠道健康等方面。在动物生产中,肽能够促进动物生长、提高生产力、维持健康,具有广阔的应用前景,因此成为21世纪的研究热点。本文聚焦于肽和反刍动物,旨在综述各种肽类物质尤其是活性小肽的作用及其在反刍动物生产中的应用研究进展,以期为反刍动物生产中肽的应用提供参考。

关键词：肽反刍动物应用研究进展

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SARS冠状病毒S蛋白受体结合结构域的表达及其表位作图

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1030-1037页

作者：华荣虹童光志王云峰周艳君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的人类传染病,该病的病原是SARS冠状病毒(SARS-CoV).S蛋白是SARS冠状病毒的一种主要结构蛋白,它在病毒与宿主细胞受体结合以及诱导机体产生中和抗体中起重要作用.研究表明S蛋白与受体结合的核心区... 详细信息

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的人类传染病,该病的病原是SARS冠状病毒(SARS-CoV).S蛋白是SARS冠状病毒的一种主要结构蛋白,它在病毒与宿主细胞受体结合以及诱导机体产生中和抗体中起重要作用.研究表明S蛋白与受体结合的核心区域为第318￣510氨基酸残基的片段.首先克隆并用pGEX-6p-1载体融合表达了该受体结合结构域,并且通过蛋白质印迹分析表明,该受体结合结构域融合蛋白能被SARS康复患者血清和S蛋白特异的单克隆抗体所识别.为了对这一区域进行抗原表位作图,进一步设计了一套23个覆盖受体结合结构域的长16个氨基酸残基的部分重叠短肽,并进行了GST融合表达.用免疫动物血清和单克隆抗体D3D1对23个融合蛋白进行蛋白质印迹和ELISA免疫反应性分析,结果鉴定出两个抗原表位SRBD3(F334PSVYAWERKKISNCV349)和表位D3D1(K447LRPFERDI455).其结果对进一步分析S蛋白结构与功能以及诊断试剂和基因工程疫苗的研究有一定意义.

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS—CoV) 纤突蛋白(S蛋白) 表位

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马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析

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中国兽医学报 1998年第1期18卷 1-6页

作者：王柳于力张绍杰仇华吉王玫童光志哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、... 详细信息

从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、鉴定，获得含有ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ片段的重组质粒ｐＬＴＲ。对该质粒的序列分析发现，在中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ的Ｕ３区含有４个与细胞转录因子结合的位点，其中有３个ＰＵ．１位点和１个ＡＰ－１位点，Ｕ３区还存在１个ＴＡＴＡＴＡＡ启动子序列；Ｒ区长为８１ｂｐ，含有１个帽位点ＧＧ和１个Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列ＡＡＴＡＡＡ；在帽位点下游是１个病毒Ｔａｔ蛋白结合位点，即ＴＡＲ位点；Ｕ５区长为３９ｂｐ。中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ序列与国外发表的其他毒株序列相比，在ＬＴＲ的一些调控部位有变异发生，中国ＥＩＡＶ弱毒株与美国ＥＩＡＶ原型株（Ｗｙｏｍｉｎｇ株）ＬＴＲ区核苷酸序列有１８．７２％的差异。

关键词：马传染性贫血克隆病毒弱毒株序列分析

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应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

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病毒学报 1998年第2期14卷 144-150页

作者：童光志李弘哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４），对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＭＣ... 详细信息

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４），对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊，以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外，其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性，其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ，未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中，除２头牛外，其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析，对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外，敏感性实验表明，四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此，本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异。

关键词：恶性卡他热病毒磁式PCR 变异

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重组牛白细胞介素-2的高效表达及其生物学活性的测定

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中国免疫学杂志 1998年第4期14卷 313-315页

作者：金红李祥瑞李涛于康震卢景良哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果... 详细信息

以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果表明，表达的重组牛白细胞介素２占总菌体蛋白的２２％以上，比原来提高２倍。活性测定结果表明，表达的重组牛白细胞介素２具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性，重组牛白细胞介素２的分子量约为１５４８８。

关键词：牛 rBOIL-2 白细胞介素2 高效表达 MTT比色法

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马传染性贫血病毒弱毒株感染驴胎皮肤细胞(FDD)的前病毒DNA整合动态

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病毒学报 1997年第3期13卷 235-239页

作者：王柳于力荣骏弓童光志贾斌张绍杰王玫卢景良兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨兽医研究所

马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检... 详细信息

马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检出前病毒ＤＮＡ，证明ＥＩＡＶ弱毒株对感染细胞具有整合作用。在感染后第６天，整合的前病毒的量达到高峰，其含量与病毒的致细胞病变作用（ＣＰＥ）相对应。前病毒的存在形式为整合形式，未检出非整合形式的前病毒，在健康的ＦＤＤ细胞中未检出前病毒，说明ＥＩＡＶ属于外源性病毒。ＥＩＡＶ弱毒株基因组两端的ＬＴＲ序列之中各存在一个限制酶ＭｌｕⅠ位点，这与美国强毒株相同，但弱毒株基因组的３端ＭｌｕⅠ位点上游２ｋｂ位置可能存在另一个ＭｌｕⅠ位点。

关键词：马病毒马传染性贫血病毒弱毒株驴胎皮肤细胞

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鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定

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中国免疫学杂志 2001年第1期17卷 45-47页

作者：刘胜旺陈洪岩刘思国孔宪刚卢景良哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的 :从接种新城疫F48E9病毒的LaSota疫苗免疫鸡体外有丝分裂原刺激的脾淋巴细胞中克隆鸡干扰素基因。方法 :应用逆转录多聚酶链式反应技术扩增 ,常规平端连接、转化及序列测定技术进行验证。结果 :研究表明克隆得到的基因与国外报道... 详细信息

目的 :从接种新城疫F48E9病毒的LaSota疫苗免疫鸡体外有丝分裂原刺激的脾淋巴细胞中克隆鸡干扰素基因。方法 :应用逆转录多聚酶链式反应技术扩增 ,常规平端连接、转化及序列测定技术进行验证。结果 :研究表明克隆得到的基因与国外报道的鸡胚成纤维细胞干扰素基因。结论

关键词：鸡干扰素基因分子克隆序列测定

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表达猪瘟病毒E2蛋白的BacMam病毒的构建及其免疫原性分析

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生物化学与生物物理进展 2009年第7期36卷 916-922页

作者：李淼王宇飞王煜高辉李娜孙元梁冰冰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合... 详细信息

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合症病毒(WSSV)ie1启动子控制下的猪瘟病毒E2基因表达盒插入此载体中,构建了BacMam病毒BacMam/G-ie1-E2,以其感染Sf9细胞和转导HeLa细胞,通过间接免疫荧光试验和Western blot分析检测E蛋白的表达,同时用BacMam病毒直接免疫小鼠,用检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体,用基于CFSE和WST-8的淋巴细胞增殖试验评价其细胞免疫应答.结果显示,BacMam/G-ie1-E2能同时在昆虫细胞和哺乳动物细胞中高效表达E2蛋白,免疫小鼠能诱导产生针对猪瘟病毒的特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经猪瘟病毒刺激后能诱导特异性的淋巴细胞增殖.这表明,由BacMam病毒介导的基因转移有望用于开发针对猪瘟病毒的非复制型载体疫苗.

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒免疫原性

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马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

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中国农业科学 2020年第10期53卷 2112-2121页

作者：郭奎王宁王金慧初晓雨赵语婷郭巍刘荻萩胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进... 详细信息

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断。利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析。【结果】各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1—17。因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致。利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL。其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性。利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行检测,阳性率分别为28.6%、42.9%和27.3%,西北3个无疫情区阳性率均为0%。此外,利用两种方法对相同的30份临床血清进行检测,微量凝集和试管凝集方法阳性份数分别为10份和3份,阳性率分别为33.3%和10%。与试管凝集相比,微量凝集诊断敏感性为100%,诊断特异性为74.1%,总体符合率为76.7%。【结论】分离鉴定获得了17株马流产沙门氏菌,建立了马流产沙门氏菌微量凝集抗体检测方法,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,简便、快速、高通量,可以广泛应用于马属动物中马流产沙门氏菌抗体的检测,是该病诊断及疫苗评估的重要依据之一。

关键词：马流产沙门氏菌分离鉴定微量凝集应用马

来源：评论

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