检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第5期30卷 334-338页

作者：海岗韩宗玺邵昱昊王芳陈洪岩刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

将山羊IFN-γ基因插入到含有口蹄疫病毒(FMDV)vp1基因的山羊痘病毒(GPV)转移载体PTK-vp1中,获得含有FMDVvp1基因和山羊IFN-γ基因的重组转移载体pTK-vp-IFNγ,以本实验室构建的表达β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的山羊痘重组病毒rAV41-LacZ... 详细信息

将山羊IFN-γ基因插入到含有口蹄疫病毒(FMDV)vp1基因的山羊痘病毒(GPV)转移载体PTK-vp1中,获得含有FMDVvp1基因和山羊IFN-γ基因的重组转移载体pTK-vp-IFNγ,以本实验室构建的表达β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的山羊痘重组病毒rAV41-LacZ为亲本毒,与转移载体pTK-vp-IFNγ共同转染犊牛睾丸细胞进行同源重组,通过7轮反向蓝白斑筛选,产生重组山羊痘病毒rAV41-VP-IFNγ,通过PCR和间接免疫荧光实验证实获得了能够稳定表达FMDVvp1和山羊IFN-γ的重组山羊痘病毒。

关键词：重组山羊痘病毒山羊IFN-γ基因 β-半乳糖苷酶基因

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禽网状内皮组织增生病病毒gp90基因在杆状病毒中的表达及其产物的活性分析

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中国兽医科学 2009年第11期39卷 973-977页

作者：高立祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷邓小芸王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭... 详细信息

以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体Bacmidgp90。通过脂质体介导将其转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp90。抗gp90蛋白小鼠超免疫血清介导的Western-blot分析和间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,gp90蛋白被正确表达,分子质量约为45 ku;gp90蛋白在变性和自然状态下均能够被识别,具有良好的生物活性。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 gp90基因 sf9细胞杆状病毒生物活性

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表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 423-427页

作者：闫帅崔红玉李巧玲赵妍石星明赵晓岩胡顺磊王玫高明李越王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。

关键词：马立克氏病毒转移载体重组病毒 F基因

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鸡马立克氏病病毒LMS分离株基因组重复区的测定及分析

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中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 492-494页

作者：成云张艳萍李志杰郑永胜谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,... 详细信息

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,预测存在43个ORF,与参考病毒株序列相比存在5个变异较大的ORF。重复区的遗传进化分析表明,LMS分离株与国内814株和欧洲pC12-130株亲缘关系较近。LMS分离株在短重复区潜伏相关转录本(LATs)编码序列的预测转录起始位点位置存在缺失;LMS分离株在α样序列内存在一个新的短重复序列。

关键词：鸡马立克氏病病毒序列测定与分析重复区 α样序列

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NDV La Sota株三个病毒克隆株间生物学特性的比较研究

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 668-671页

作者：张晓东刘怀然刘培欣刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为比较新城疫病毒(NDV)La Sota株不同克隆株之间的生物学特性,本研究通过挑取细胞病变区对LaSota株病毒进行纯化,并获得了3个病毒克隆株。通过血凝素热稳定性试验、病毒复制动力学试验和免疫原性试验,对3个病毒克隆株进行分析比较。结... 详细信息

为比较新城疫病毒(NDV)La Sota株不同克隆株之间的生物学特性,本研究通过挑取细胞病变区对LaSota株病毒进行纯化,并获得了3个病毒克隆株。通过血凝素热稳定性试验、病毒复制动力学试验和免疫原性试验,对3个病毒克隆株进行分析比较。结果显示,不同的病毒克隆株间在这些生物学特性上存在着不同程度的差异,表明为了获得性质均一、稳定的病毒,有必要进行病毒的纯化,并根据实验目的进行比较取舍。

关键词：病毒克隆株新城疫病毒生物学特性

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白研究进展

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 656-660页

作者：祁小乐王笑梅高玉龙高宏雷中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的一种急性、高度接触性传染病，主要危害3～6周龄的雏鸡。该病于1957年首次发现于美国Gumboro地区。50年... 详细信息

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的一种急性、高度接触性传染病，主要危害3～6周龄的雏鸡。该病于1957年首次发现于美国Gumboro地区。50年来，IBD一直威胁着养禽业的发展。免疫抑制、抗原变异，特别是超强毒株（vvIBDV）的出现，使得该病的防控形势更加严峻。国际兽疫局（OIE）已将IBD列为“影响社会经济的重要疾病”。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 VP2蛋白接触性传染病 virus 国际兽疫局免疫抑制抗原变异超强毒株

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表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 81-85页

作者：冯军科朱远茂任宪刚祖立闯李娇史鸿飞高欲燃童光志薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BH... 详细信息

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。

关键词：牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白基因牛疱疹病毒Ⅰ型磷酸钙-DNA沉淀法

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鸡马立克氏病强弱病毒株PCR鉴别检测方法在诊断中的应用评价

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 567-571页

作者：吕红超张艳萍孙国荣高玉龙李志杰郑惠文包珂岩王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检... 详细信息

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检测方法。特异性试验和敏感性试验表明该PCR方法特异性强,敏感性高,132 bpr和meq基因两对引物对阳性重组质粒的检测下限分别为1.0×103拷贝/μL和1.0×102拷贝/μL。通过对近10年的1057份临床样品的检测对该PCR方法进行应用评价。结果表明病毒分离与PCR检测结果的符合率为100%,PCR检测结果可信度高;琼脂扩散试验(AGP)对MDV PCR检测阳性样品的检测阳性率为86.25%,PCR法检测敏感性明显高于AGP法。此外,对分离病毒株meq基因序列分析结果表明,所有分离株均具有中国野毒株特征,即突变主要出现于其编码蛋白的6个氨基酸中(K77E、D80 Y、V115 A、T139 A、P176 R或P217A),表明该PCR检测方法具有良好的特异性。本研究建立的MDV PCR检测方法特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,可以用于MD的临床诊断。

关键词：鸡马立克氏病 PCR检测 meq基因 132 bp重复序列临床诊断

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禽网状内皮组织增生病病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2010年第11期40卷 1137-1141页

作者：李凯高宏雷高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×... 详细信息

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×108copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10copies/μL,是常规PCR方法的100倍,该方法与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。用REV HLJR0901株人工感染1日龄SPF雏鸡,定期剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在肝、脾、法氏囊、胸腺和腺胃中均可检测到病毒,其病毒载量并无明显差异。本研究结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于REV的定量检测,为该病毒的诊断及致病性的研究提供了技术手段。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针

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山羊IL-2的体外表达及其多克隆抗血清的制备

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中国预防兽医学报 2007年第9期29卷 685-689页

作者：海岗刘胜旺韩宗玺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondT... 详细信息

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。纯化产物经3次免疫新西兰白兔,制备出山羊IL-2抗血清。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2,并制备出兔抗山羊IL-2抗血清,为下一步开展山羊IL-2重组蛋白的应用研究奠定了基础。

关键词：山羊IL-2 融合蛋白原核表达抗血清

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