检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2009年第1期36卷 65-71页

作者：刘春国刘明张云刘大飞潘蔚绮孙恩成杜金玲李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病实验室哈尔滨150001 中国科学院广州生物医药与健康研究院广州510663 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 东北农业大学动物医学院哈尔滨150030

分离到一株鹅源H5N2亚型高致病性禽流感病毒,SPF鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后不致病,但能够在肺内有效复制,表明其具有感染哺乳动物的潜在风险.血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点上插入有多个连... 详细信息

分离到一株鹅源H5N2亚型高致病性禽流感病毒,SPF鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后不致病,但能够在肺内有效复制,表明其具有感染哺乳动物的潜在风险.血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点上插入有多个连续的碱性氨基酸(-RRRKKR-),从分子上证实这是一株高致病性禽流感病毒.核酸序列比较分析表明,分离的流感病毒HA基因与A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)同源率达到99.4%,神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因与A/chicken/Jilin/53/01(H9N2)同源率达到99.8%;氨基酸水平上,HA与2004年分离到的A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)、A/swan/Guangxi/307/2004(H5N1)、A/wildduck/Guangdong/314/2004(H5N1)和A/chicken/Henan/210/2004(H5N1)同源率均为99.3%,NA与A/chicken/Jilin/53/01(H9N2)同源率为99.6%.进化树分析结果表明,该流感病毒分离株可能是由H5N1和H9N2两个亚型病毒重排而来.

关键词：鹅禽流感病毒 H5N2亚型致病性序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒病的流行趋势与防控对策

引用

动物医学进展 2014年第1期35卷 111-115页

作者：刘建波张辉刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,... 详细信息

自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,此后以PCV-2b基因亚型为优势,且流行毒株毒力有明显增强趋势。近年来,PCVAD的流行形式发生了一定变化,PMWS发生率降低,而PRDC发生率明显上升。PMWS症状与感染沙门菌、猪细小病毒、猪肺炎支原体等病原体有关。与PCV-2相关的PRDC主要由PCV-2与PRRSV、猪肺炎支原体混合感染造成。尽管当前通过疫苗免疫接种对本病得到了有效遏制,但PCVAD流行新特点应引起研究者关注。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒病流行趋势防控对策

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立

引用

中国兽医杂志 2014年第6期50卷 6-8页

作者：李长龙陈建飞张鑫时洪艳冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

开放阅读框3（Open reading frame 3,ORF3）是猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）可以对P... 详细信息

开放阅读框3（Open reading frame 3,ORF3）是猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）可以对PEDV野毒株和疫苗株进行鉴别诊断,野毒株扩增产物为319 bp,疫苗株扩增产物为270 bp。用该鉴别诊断方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖和呼吸综合征病毒的cDNA进行扩增均无特异性条带,说明该方法特异性强。现地病料的检测结果表明,该鉴别诊断方法能够区分PEDV野毒和疫苗株,而且可以排除其他病毒的影响,有助于减少免疫猪被淘汰的可能,降低经济损失。

关键词：猪流行性腹泻病毒 ORF3 RT-PCR 鉴别诊断

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

引用

中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 856-860,895页

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪细环病毒流行病学与遗传变异研究进展

引用

动物医学进展 2012年第3期33卷 89-93页

作者：刘建波刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但... 详细信息

猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但仍没有找到合适的细胞系适于病毒的体外培养。论文主要围绕其流行病学和遗传变异情况进行了综述,简要介绍了该病毒的多种检测方法,这对进一步研究该病毒的分布和致病性及防控有重要意义。

关键词：猪输血传播病毒流行病学遗传变异

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流行性腹泻病毒蛋白对Vero E6核蛋白B23.1的影响

引用

中国兽医杂志 2012年第4期48卷 21-23,I0003页

作者：石达吕茂杰陈建飞时红艳张志榜冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化。结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散。这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白 VeroE6细胞核蛋白B23.1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于人ANP32A蛋白的C型流感病毒聚合酶纯化及PB2蛋白单克隆抗体的高效制备

引用

生物工程学报 2022年第8期38卷 3041-3048页

作者：屈玉杏郭兴韩佳岐张振宇王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室马传染病与慢病毒病创新团队黑龙江哈尔滨150069

C型流感病毒是感染人的重要呼吸道病原,也可感染猪、狗等动物。聚合酶是C型流感病毒复制的核心,是研究病毒复制机制的重要靶标。然而目前没有商品化针对C型流感病毒聚合酶的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),一定程度制约了相关研... 详细信息

C型流感病毒是感染人的重要呼吸道病原,也可感染猪、狗等动物。聚合酶是C型流感病毒复制的核心,是研究病毒复制机制的重要靶标。然而目前没有商品化针对C型流感病毒聚合酶的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),一定程度制约了相关研究的开展。为了制备C型流感病毒碱性聚合酶2(polymerase basic protein 2,PB2)的MAb,本研究依据人酸性核磷酸蛋白32A(human acidic nuclear phosphoprotein 32 family member A,huANP32A)与流感病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)相互作用的特性,利用免疫共沉淀技术在真核表达系统中通过融合Flag标签的huANP32A(huANP32A-Flag)纯化并富集C型流感病毒RdRp(PB1、PB2、P3),并以之作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA与Western blotting方法筛选出6株(7B11-5、8A4-5、13D9-6、8D4-1、8D4-3、9F9-4)能稳定分泌识别PB2 MAb的阳性杂交瘤细胞株。经鉴定7B11-5、8A4-5、8D4-1和8D4-3抗体亚型为IgG1型,13D9-6抗体亚型为IgG2a型,9F9-4抗体亚型为IgG3,轻链均为κ链。进一步选取1株效价高的杂交瘤细胞8D4-1来制备腹水,测定收集的小鼠腹水抗体效价为1︰64000。Western blotting结果显示,制备的MAb能够与C型流感病毒PB2发生特异性免疫反应;激光共聚焦试验结果表明,该MAb可准确检测C型流感病毒PB2的亚细胞定位。本研究通过huANP32A蛋白高效富集了C型流感病毒的RdRp,并以该复合物为抗原制备的PB2 MAb具有较好的特异性,为C型流感病毒聚合酶检测、结构分析及机制研究奠定了基础。

关键词： C型流感病毒 PB2 huANP32A 单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析

引用

中国农业科学 2009年第10期42卷 3685-3692页

作者：王瑞琴廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构... 详细信息

【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32kD),对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125μg·ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400μg·ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH3～12条件下处理30min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。

关键词：鸭 AvBD2 遗传进化重组蛋白抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅β-防御素10基因的分离、鉴定与表达

引用

中国农业科学 2012年第5期45卷 999-1009页

作者：周财源张名岳韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10(avianβ-defensin 10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因。根据已发现的禽β-防御素和部分... 详细信息

【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10(avianβ-defensin 10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因。根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建系统进化树,进行遗传进化分析;并应用荧光定量的方法对该基因的组织表达水平进行鉴定。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,并对该重组蛋白进行纯化,测定体外生物学活性。【结果】从鹅肾脏组织中克隆出了鹅AvBD10基因,该基因的cDNA大小为207 bp,编码68个氨基酸。经遗传进化分析表明,该基因推导的氨基酸序列与鸭AvBD10的同源性最高,达92.7%。通过对重组蛋白抗菌活性的检测发现,该蛋白对12种致病性细菌均具有较强抑菌作用,但在高盐离子浓度下活性减弱。并且重组蛋白不具有溶血的特性。【结论】成功克隆并表达了鹅AvBD10基因,原核表达产物具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。

关键词：鹅AvBD10 克隆遗传进化分析组织表达抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组鸡β-防御素5-β-防御素10双分子蛋白的构建及其理化特性分析

引用

农业生物技术学报 2009年第1期17卷 41-46页

作者：马得莹刘胜旺韩宗玺单安山东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

鸡抗菌肽属禽β-防御素(AvBD)类,是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上,构建了AvBD5-pGEX-AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,于37... 详细信息

鸡抗菌肽属禽β-防御素(AvBD)类,是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上,构建了AvBD5-pGEX-AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,于37℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达。结果表明,重组AvBD5-AvBD10双分子融合蛋白的分子量约为36 kD,重组双分子蛋白占菌体总蛋白的35%,重组菌表达产物以包涵体形式存在。重组双分子蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌[BL21(DE3-)株]与致病性链球菌[Streptococcus(CAB株)]为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组双分子蛋白的抗菌活性,结果表明,重组双分子蛋白对这两种细菌都具有抗菌活性。并且对温度和pH有很高的稳定性,在-70～100℃或pH 3～12处理30 min仍具有抗菌活性。

关键词：鸡β-防御素重组双分子蛋白抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：