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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张志慧危艳武吴洪丽黄立平李胜斌刘建波张辉王一平刘丹刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属,为单股环状共价闭合DNA病毒,基因组为1766～1768nt。该病毒被证实是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,主要危害7～15周龄仔猪,临床表现为渐... 详细信息

1引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属,为单股环状共价闭合DNA病毒,基因组为1766～1768nt。该病毒被证实是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,主要危害7～15周龄仔猪,临床表现为渐进性消瘦,淋巴肿大,被毛粗乱,皮肤苍白等。临床上PCV2通常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染,引起严重的临床疾病[1]。对该病控制的有效手段是通过疫苗预防接种,这一策略已被广泛采用,并取得了良好效果[2]。随着P

关键词：猪圆环病毒 PCV ELISA 抗体检测试剂盒抗体效价

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猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：刘建波张辉刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言自1991年加拿大西部首次确认断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)爆发以来,该病被认为是危害全球养猪业最严重的传染病之一。在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中,PMWS和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是最常见的临床表现形式。到目前为止,PMWS... 详细信息

1引言自1991年加拿大西部首次确认断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)爆发以来,该病被认为是危害全球养猪业最严重的传染病之一。在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中,PMWS和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是最常见的临床表现形式。到目前为止,PMWS仍是最重要的经济性疾病。但是,PCVAD疾病的形式发生了轻微变化,PMWS的发生率有所降低而PRDC的发生率却有所升高。在P

关键词： PCVAD 沙门氏菌养猪业支原体防控对策猪圆环病毒 PRRSV 肺炎支原体感染流行趋势相关疾病

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与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张辉唐青海危艳武黄立平张志慧刘建波吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 详细信息

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,序列分析确认。本实验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆,经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究为进一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型茎环结构宿主细胞互作蛋白

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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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第二届免疫学博士生论坛

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细... 详细信息

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细胞因子与抗原组合的策略研制PCV2新型亚单位疫苗,以验证这3种细胞因子对PCV2-Cap蛋白的免疫增强作用。方法 :采用杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、猪IFN-γ(Po IFN-γ)、猪IL-2(Po IL-2)、猪GM-CSF(Po GM-CSF)及这3种细胞因子与PCV2-Cap蛋白的融合蛋白Cap-Po IFN-γ、Cap-Po IL-2和Cap-Po GM-CSF,制备几种不同形式的PCV2亚单位疫苗,并经鼠体模型鉴定其免疫原性;采用IPMA和阻断ELISA方法测定免疫及攻毒后PCV2特异性抗体滴度,通过监测淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌水平评价细胞免疫应答;采用常规PCR检测PCV2病毒血症,并经定量PCR检测攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒载量。结果 :采用杆状病毒表达系统成功地表达了PCV2-Cap蛋白、Po IFN-γ及CapPo IFN-γ融合蛋白,制备了3种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IFN-γ疫苗、PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗能诱导产生更高水平的PCV2特异性IPMA抗体和中和抗体滴度,明显提高T淋巴细胞的增殖能力,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。以杆状病毒表达系统成功地表达了Po IL-2、Po GM-CSF、Cap-Po IL-2融合蛋白及Cap-Po GM-CSF融合蛋白,制备了5种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IL-2疫苗、PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗、PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗和PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗均可明显提高T淋巴细胞的增殖能力,刺激淋巴细胞分泌更高水平的IFN-γ和IL-2,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。结论 :研究表明,用Po IFN-γ与PCV2-Cap蛋白混合免疫时,Po IFN-γ能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力,但以Cap-Po IFN-γ融合蛋白免疫时,Po IFN-γ对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用Po IL-2或Po GM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-Po GM-CSF融合蛋白免疫时,Po IL-2和Po GM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用,但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变,从而增强疫苗的免疫保护效力,然而以Cap-Po IL-2融合蛋白免疫时,Po IL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗 IFN-γ、IL-2及GM-CSF 免疫增强

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β-actin与猪瘟囊膜蛋白E2相互作用并参与病毒复制

β-actin与猪瘟囊膜蛋白E2相互作用并参与病毒复制

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：贺番凌理军廖亚金李素韩文赵碧波孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪瘟囊膜蛋白E2介导病毒感染并诱导机体产生中和抗体,但尚未有关E2蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的报道。为了研究猪瘟病毒复制过程中与其相互作用的宿主细胞蛋白,将猪瘟E2蛋白作为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到一种与E2存在相互作用的宿... 详细信息

猪瘟囊膜蛋白E2介导病毒感染并诱导机体产生中和抗体,但尚未有关E2蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的报道。为了研究猪瘟病毒复制过程中与其相互作用的宿主细胞蛋白,将猪瘟E2蛋白作为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到一种与E2存在相互作用的宿主细胞蛋白-β-actin。通过免疫共沉淀、GST pulldown、激光共聚焦以及双分子荧光互补试验验证了E2蛋白与β-actin的相互作用。利用RNA干扰技术沉默β-actin的表达以及用细胞松弛素D在猪瘟感染后4h破坏感染细胞β-actin蛋白的丝状结构,均能显著降低培养上清中的病毒滴度与RNA拷贝数。综上所述,本研究表明β-actin在病毒复制周期的早期参与猪瘟病毒的生长调节。

关键词：猪瘟病毒酵母双杂交 E2蛋白 β-actin 细胞松弛素D

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猪γ-干扰素对猪圆环病毒2型Cap蛋白的免疫增强作用

猪γ-干扰素对猪圆环病毒2型Cap蛋白的免疫增强作用

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病现已波及世界各地,给全球养猪业造成了重大经济损失。PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属,是一种共价闭合、单股环状负链DNA病毒,呈二十面体对称,无囊膜。PCV2... 详细信息

1引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病现已波及世界各地,给全球养猪业造成了重大经济损失。PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属,是一种共价闭合、单股环状负链DNA病毒,呈二十面体对称,无囊膜。PCV2病毒粒子直径为17nm,基因组约1.7kb,是迄今发现的最小的动物病毒。PCV2有2个主要的开放阅读框(ORFs),其中ORF1编码与病毒复制相关的蛋白Rep和Rep',ORF2编码病毒的结构蛋白Cap。Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋

关键词： PCV 抗体检测免疫增强作用 Cap 攻毒试验中和抗体滴度病毒血症猪圆环病毒淋巴细胞增殖试验免疫保护效力重组杆状病毒反应原性特异性反应

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猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：刘建波张辉刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

文章介绍了猪圆环病毒2型的相关疾病，如断奶仔猪多系统衰竭综合征和猪呼吸道疾病综合征等及其流行趋势，指出对PCV2及PCVAD的防控，除了强化生物安全、加强饲养管理、改善猪场环境、控制营养结构等这些基本措施外，重要的是接种猪圆环... 详细信息

文章介绍了猪圆环病毒2型的相关疾病，如断奶仔猪多系统衰竭综合征和猪呼吸道疾病综合征等及其流行趋势，指出对PCV2及PCVAD的防控，除了强化生物安全、加强饲养管理、改善猪场环境、控制营养结构等这些基本措施外，重要的是接种猪圆环病毒2型疫苗及引起PCVAD其他相关病原的疫苗。

关键词：猪圆环病毒2型流行病学分析疫苗研发疾病防控

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2不同免疫途径的效力评价

腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2不同免疫途径的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：孙元秦华洋袁晋王春花赵碧波李素罗玉子仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

猪瘟是一种非常重要的猪传染病,对养猪业危害极大。具有标记特性的新型猪瘟疫苗及相应的鉴别诊断方法将会对猪瘟的防控起到重要的作用。先前证实,构建的表达猪瘟病毒E2基因的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体病毒rAdV-SFV-E2在猪体上可诱导... 详细信息

猪瘟是一种非常重要的猪传染病,对养猪业危害极大。具有标记特性的新型猪瘟疫苗及相应的鉴别诊断方法将会对猪瘟的防控起到重要的作用。先前证实,构建的表达猪瘟病毒E2基因的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体病毒rAdV-SFV-E2在猪体上可诱导高水平的猪瘟特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,免疫攻毒的保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗C株相当。系统评价显示,该疫苗初步具备了理想猪瘟疫苗的特征。本研究对该腺病毒/甲病毒复制子嵌合病毒rAdV-SFV-E2以三种免疫途径(肌肉、皮下、滴鼻)在猪体上的免疫效果进行了比较。选取21头5周龄左右猪瘟抗体及抗原均为阴性的健康仔猪,将所有仔猪随机分成A、B、C和D四组,其中A、B、C三组分别经肌肉、皮下和滴鼻方式注射5×106 TCID50 rAdV-SFV-E2,D组分别经三种途径免疫5×106 TCID50 rAdV-SFV-empty.免疫后3周以同种疫苗、同样途径和剂量进行加强免疫。加强免疫后4周,所有猪用猪瘟病毒石门株进行攻毒。研究结果显示,皮下免疫组诱导的体液免疫水平较其他途径免疫组较高。在攻毒前,A组、B组和C组免疫猪的平均抗体阻断率分别为46.28％、51.66％和31.94％。皮下免疫组与滴鼻免疫组在攻毒前的抗体水平比较上差异显著(p＜0.05).攻毒后3 d,A组、B组和C组免疫猪的平均抗体阻断率分别为54.28％、62.39％和39.35％。皮下免疫组与肌肉免疫组、滴鼻免疫组间差异显著(p＜0.05).在细胞免疫方面,皮下免疫组诱导了高水平的特异性的淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-4的分泌,与rAdV-SFV-empty免疫组及肌肉和滴鼻免疫组之间差异显著(p＜0.05).本研究进一步证实了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗作为一种理想猪瘟疫苗的可能性,将会对猪瘟的防控起到重要的作用。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗免疫途径效力评价

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东北地区野生鸟类B亚群禽白血病的分子流行病学调查及env基因的序列分析

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中国兽医科学 2013年第2期43卷 208-212页

作者：李德龙刘婉思杨波高奇曾祥伟秦立廷高宏雷刘思当高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性... 详细信息

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性样品的env基因与原型毒株RAV-2的同源性为99.1%～99.4%,与美国的另外2株代表毒株Schmidt-Ruppin B和Prague subgroup B的同源性为93.3%～98.4%,而与2株中国蛋鸡分离株SDAU09C2和SDAU09E3的同源性为90.2%～90.6%。以上结果表明,目前我国野生鸟类已经存在禽白血病。env基因序列分析结果表明,这4份阳性样品的env基因部分位点发生了变异,并且在多处位点存在突变。

关键词：野生鸟类 B亚群禽白血病流行病学调查序列分析

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我国东北地区野生鸟类A亚群禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 245-247页

作者：杨波高玉龙高宏雷秦立廷刘婉思李德龙高奇曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV... 详细信息

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV(ALV-A)的同源性最高,为91.1%～100%,而与已发表的鸡的B、C、D、E、J亚群ALV的gp85编码序列的同源性仅在28.0%～80.3%之间。遗传进化树分析也表明这两份ALV阳性样品的gp85编码序列属于ALV-A。本实验在我国野生鸟类群体中首次分离和鉴定出ALV-A,表明目前我国野生鸟类已经存在A亚群ALV的感染。

关键词：野生鸟类 A亚群禽白血病 gp85 序列分析

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