检索结果-内蒙古大学图书馆

猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位区的鉴定

病毒学报 2007年第3期23卷 224-229页

作者：孙东波冯力陈建飞时洪艳佟有恩刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明：PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96.97%、96.87%、96.41... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明：PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96.97%、96.87%、96.41%、94.02%和93.93%,氨基酸序列的同源性分别为96.17%、95.88%、96.10%、92.36%和92.05%;分子进化树分析结果显示,PEDV CH/JL株S基因与JS毒株S基因亲缘关系最近,处于同一群。利用DNAstar Protean程序预测了PEDV CH/JL株S蛋白一个抗原表位区（83-276aa）,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后转化***21（DE3）感受态细胞,在终浓度1.0mmol/L的IPTG诱导下获得了表达,Western blot结果显示,预测的抗原表位区GST融合蛋白能与猪流行性腹泻病毒多克隆抗血清反应,提示该抗原表位区含有线性抗原表位。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因序列分析线性抗原表位区

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定

引用

病毒学报 2007年第4期23卷 305-311页

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用肽扫描技术对4株IBDV VP3的单克隆抗体（HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E）的抗原表位进行了研究。通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于VP3 109-119aa（位于IB-DV聚合蛋白的864-874aa）,HRB-7C和HRB-10E的抗原表位定位于VP3 177-190aa（位于IBDV聚合蛋白的932-945aa）。进一步检测其反应原性及免疫原性,结果表明,这两个表位均能与抗IBDV阳性血清反应。将这两个表位短肽免疫BALB/c小鼠,其血清可以和IBDV反应,具有较好的免疫原性。与D6948、HK46和UK661等多株IBDV相应区域的同源性进行了比较,结果显示,这两个表位在多种毒株中同源性为100%。通过IBDV VP3抗原表位的研究,筛出两个新的保守线性表位并进行精确定位,对进一步分析IBDV结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。

关键词： IBDV VP3 抗原表位融合表达 Western blot ELISA 单抗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

引用

中国农业科学 2007年第10期40卷 2343-2349页

作者：祁小乐高宏雷高玉龙邓小芸步志高王晓燕王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001

【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(Ham... 详细信息

【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究。【结果】构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV,且存在分子标签。拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE,且TCID50与亲本毒差异不显著,具有相似的生物学特征。【结论】构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济,且具有良好的细胞普适性。

关键词：传染性法氏囊病病毒感染性分子克隆病毒拯救分子标签核酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型去核定位信号ORF2基因的原核表达与初步应用

引用

中国预防兽医学报 2008年第5期30卷 384-388页

作者：苗丽娟符芳王小武陈微晶鲁晶红李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。... 详细信息

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。Western blot、ELISA鉴定蛋白活性,继而,以重组蛋白为抗原包被ELISA板,对28份临床样品进行检测。结果表明,该蛋白具有良好的抗原活性,可以作为抗原应用于临床样品的检测。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型感染昆明小鼠模型的建立

引用

中国兽医科学 2008年第6期38卷 475-478页

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

将SPF级昆明小鼠随机分为3组,即一次攻毒组(S组)12只、连续攻毒组(M组)3只和对照组(C组)12只。S组和C组小鼠于第1d分别接种RPMI1640培养液和猪圆环病毒2型(PCV2)细胞培养毒,M组小鼠于第1、7、14、28、35d连续进行PCV2接种。S组和C组小... 详细信息

将SPF级昆明小鼠随机分为3组,即一次攻毒组(S组)12只、连续攻毒组(M组)3只和对照组(C组)12只。S组和C组小鼠于第1d分别接种RPMI1640培养液和猪圆环病毒2型(PCV2)细胞培养毒,M组小鼠于第1、7、14、28、35d连续进行PCV2接种。S组和C组小鼠分别在接种后第7、14、28和42d各处死3只,M组小鼠在接种后第42d全部处死,分析其增重、病毒组织分布、抗体水平、病理组织学变化。结果,C组小鼠体重增长速率大于S组和M组,S组又明显高于M组;S组和M组小鼠体内存在病毒复制,而C组小鼠体内无病毒复制;S组和M组小鼠均产生PCV2抗体,但M组小鼠抗体水平明显高于S组,C组小鼠未检测到PCV2抗体;S组和M组小鼠有明显的病理损伤,其中淋巴结损伤最严重,C组未发现病理损伤。结果表明PCV2可以成功感染SPF昆明小鼠。

关键词： SPF昆明小鼠猪圆环病毒2型病理损伤动物模型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

A群猪轮状病毒JS株vp7基因序列分析

引用

中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 359-362页

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,... 详细信息

根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与已知的15个毒株vp7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为74.5%～78.5%和75.2%～83.1%,核苷酸系统发育进化树结果表明,JS毒株与轮状病毒G9型参考毒株ICB2185、O-1亲缘关系较近,分为一个群,表明JS毒株血清型为G9型。目前,我国尚未见猪及其它动物轮状病毒G9型流行株的报道。

关键词：猪轮状病毒 vp7基因序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 854-857页

作者：王伟符芳陈欣李雪松李海忠李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSF... 详细信息

为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。

关键词： SYBRGreenⅠ实时荧光PCR 猪瘟病毒野毒株 C株

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪轮状病毒OSU强毒株vp7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析

引用

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 136-140页

作者：时洪艳冯力陈建飞孙东波吴波平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-vp7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切... 详细信息

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-vp7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示蛋白表达融合量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。

关键词：猪轮状病毒 vp7基因克隆原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组杆状病毒:一种新型哺乳动物细胞基因转移载体

引用

中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 126-130页

作者：彭伍平仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

昆虫杆状病毒表达载体系统已广泛应用于表达重组蛋白。近年来研究显示,含有哺乳动物细胞启动子元件的重组杆状病毒可有效地转导多种哺乳动物原代和传代细胞。借助于杆状病毒载体,已成功实现了外源基因在哺乳动物细胞内的瞬时或稳定表达... 详细信息

昆虫杆状病毒表达载体系统已广泛应用于表达重组蛋白。近年来研究显示,含有哺乳动物细胞启动子元件的重组杆状病毒可有效地转导多种哺乳动物原代和传代细胞。借助于杆状病毒载体,已成功实现了外源基因在哺乳动物细胞内的瞬时或稳定表达。而在体内,杆状病毒可被血清中的补体成份所灭活,从而抑制了转导效率,但是通过对杆状病毒进行修饰(如伪型杆状病毒),可以抵抗补体的灭活作用,杆状病毒转导机制至今尚未完全弄清。杆状病毒基因转移系统的最大特点是,杆状病毒能在昆虫细胞内大量繁殖,而不能在哺乳动物细胞内复制,因而具有很高的生物安全性;同时,此系统还具有操作简便、插入外源基因容量大等优点,使得杆状病毒作为哺乳动物细胞的基因传递载体,具有广泛的应用前景。

关键词：昆虫杆状病毒表达载体非复制型载体基因转移哺乳动物细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

引用

中国免疫学杂志 2009年第2期25卷 159-163页

作者：赵和平孙元袁远仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对C... 详细信息

目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6μg/ml时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5天后进行分析相对较好。结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。

关键词：猪淋巴细胞细胞免疫 CFSE染色淋巴细胞增殖试验

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：