检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 I0015-I0015页

作者：王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期... 详细信息

为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点,经酶切、PCR鉴定出,命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(bovine testes,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,而且在BT细胞和羔羊睾丸(lamb testes,LT)细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物,为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。

关键词：重组山羊痘病毒标记疫苗胸苷激酶基因(TK) β-半乳糖苷酶基因(LacZ)

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山羊干扰素-γ的克隆、原核表达及其抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 I0061-I0061页

作者：金标刘胜旺海岗王芳陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

应用RT-PCR方法从免疫过山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊干扰素-γ(IFN-γ)基因,经序列测定,其开放阅读框架共有501bp,推测其分子质量(MW)为19.327KD。该基因与GenBank发表的山羊干扰素-γ基因序列(U34232)比较,核苷酸序列同源性为99.4... 详细信息

应用RT-PCR方法从免疫过山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊干扰素-γ(IFN-γ)基因,经序列测定,其开放阅读框架共有501bp,推测其分子质量(MW)为19.327KD。该基因与GenBank发表的山羊干扰素-γ基因序列(U34232)比较,核苷酸序列同源性为99.4%。经SignalP3.0分析表明,前23个氨基酸为信号肽序列。将信号肽序列去除并克隆到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果表明该基因在大肠杆菌中以包涵体形式融合表达。用ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化并免疫新西兰兔,制备了兔抗山羊IFN-γ多克隆血清。经WesternBlot鉴定,多克隆抗血清可与纯化的山羊IFN-γ蛋白发生特异性反应,说明该重组蛋白具有抗原活性,为我们进一步研究其在疾病诊断和免疫评价方面的应用奠定了基础。

关键词：山羊干扰素γ 原核表达抗血清

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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原S1基因的分子克隆、序列分析及其DNA免疫的初步

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生物工程学报 1999年第3期15卷 305-305页

作者：江国托步志高刘思国康丽娟祁贤卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

RT-PCR扩增QD毒株的S1基因,将其5'和3'端分别进行分子修饰后插入克隆载体pUC18的BamHI/HindIII位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆;利用英国IBV毒株S1全基因核酸探针与QD毒株S1基因的重组克隆质粒分子杂交后,采用HaeIII,Pv... 详细信息

RT-PCR扩增QD毒株的S1基因,将其5'和3'端分别进行分子修饰后插入克隆载体pUC18的BamHI/HindIII位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的克隆;利用英国IBV毒株S1全基因核酸探针与QD毒株S1基因的重组克隆质粒分子杂交后,采用HaeIII,PvuII和XbaI等限制酶对此流行毒株S1基因cDNA进行了酶切分析。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒免疫原S1基因分子克隆序列分析 DNA免疫

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马传染性贫血病毒株LTR的克隆及序列分析

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中国兽医学报 1998年第1期18卷

作者：王柳于力张绍杰仇华吉王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

从马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒性感染的驴胎皮肤(FDD)细胞中提取前病毒DNA,以其为模板,通过PCR扩增出EIAV弱毒株的LTR,并将其克隆到载体质粒pUC19中。经酶切分析,PCR及Southern杂交筛选、鉴定,获得含有EIAV弱毒株LTR片段的重组质粒--pLT... 详细信息

从马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒性感染的驴胎皮肤(FDD)细胞中提取前病毒DNA,以其为模板,通过PCR扩增出EIAV弱毒株的LTR,并将其克隆到载体质粒pUC19中。经酶切分析,PCR及Southern杂交筛选、鉴定,获得含有EIAV弱毒株LTR片段的重组质粒--pLTR。对该质粒的序列分析发现,在中国EIAV弱毒株LTR的U3区含有4个与细胞转录因子结合的位点,其中有3个PU.1位点和1个AP-1位点,U3区还存在1个TATATAA启动子序列;R区长为81bp,含有1个帽位点GG和1个Poly(A)信号序列AATAAA;在帽位点下游是1个病毒Tat蛋白结合位点,即TAR位点;U5区长为39bp。

关键词：马传染性贫血病毒弱毒株长末端重复序列核酸序列分析

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鸭RIG－1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究

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中国畜牧兽医文摘 2014年第10期30卷 192-192页

作者：张雅春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（... 详细信息

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（＋）中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG—1，应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平；并将pcDNA—RIG-1转染DF-1细胞，通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。

关键词：禽流感病毒基因蛋白组织表达金定鸭活性 pcDNA3.1(+) 体外组织特异性表达

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猪带绦虫六钩蚴重组蛋白TSOL18与BSA偶连蛋白的制备

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 7-11页

作者：张少华李克生景志忠杜惠芬骆学农才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省医学科学研究院医学生物技术中心甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

应用异型双功能连接剂MBS(间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯)将猪带绦虫六钩蚴18ku重组蛋白(TSOL18)和载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)进行连接,制备连接蛋白BSA-TSOL18,用以增强TSOL18的免疫原性.连接蛋白利用快速脱盐柱分离技术进... 详细信息

应用异型双功能连接剂MBS(间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯)将猪带绦虫六钩蚴18ku重组蛋白(TSOL18)和载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)进行连接,制备连接蛋白BSA-TSOL18,用以增强TSOL18的免疫原性.连接蛋白利用快速脱盐柱分离技术进行纯化;纯化后应用醋酸纤维薄膜电泳证明二者的结合情况;并用间接ELISA法检测不同摩尔比连接产物中抗原部分的活性.结果表明:TSOL18与BSA偶连摩尔比为1∶3时连接有效,且对抗原活性影响小,可满足进一步免疫的要求.

关键词：猪带绦虫 MBS TSOL18 BSA 蛋白连接

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绵羊原核注射转基因胚胎生产与移植

绵羊原核注射转基因胚胎生产与移植

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第五次全国动物生物技术学术研讨会

作者：刘国世史文清崔茂盛李运生冯建忠李宁连正兴张璐张运海韩红兵邓守龙田秀芝徐静张效生张金龙中国农业大学动物科技学院，北京 100193 北京市畜牧兽医总站，北京 100107 安徽农业大学动物科技学院，合肥天津市畜牧兽医研究所，天津中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京 100193

动物转基因是目前生物领域的研究热点之一，其基本特征是改变了动物的遗传组成，使动物按照人们的意愿进行改造。本研究旨在通过优化超数排卵技术和基因注射方案以提高原核注射转基因绵羊的生产效率。

关键词：超数排卵原核注射转基因绵羊胚胎移植生产效率

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山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备

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中国比较医学杂志 2007年第8期17卷 I0060-I0060页

作者：海岗刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重... 详细信息

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。

关键词：山羊IL-2 融合蛋白原核表达抗血清

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鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

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中国科技成果 2009年第21期10卷 8-8页

作者：王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本课题的研究起始于1996年，得到“九五”国家高技术研究发展计划（863计划）课题（课题名称：鸡传染性喉气管炎、马立克氏病和新城疫二价、三价基因工程疫苗的研究）的支持（1996～2000年）。后来，该成果又得到了“十五”国家863计划... 详细信息

本课题的研究起始于1996年，得到“九五”国家高技术研究发展计划（863计划）课题（课题名称：鸡传染性喉气管炎、马立克氏病和新城疫二价、三价基因工程疫苗的研究）的支持（1996～2000年）。后来，该成果又得到了“十五”国家863计划课题（课题名称：鸡痘病毒载体多价基因工程疫苗及禽流感等亚单位疫苗的研制）的支持（2001～2005年）和农业科技成果转化资金项目课题（课题名称：传染性喉气管炎重组鸡痘病毒二价疫苗）（2001年～2003年）的资助。

关键词：鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗重组鸡痘病毒农业科技成果转化资金项目国家863计划马立克氏病亚单位疫苗病毒载体

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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医文摘 2014年第11期30卷 66-66页

作者：姜莉莉祁小乐高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒（REV）长末端重复序列（LTR）的特异性引物作为检测引物，对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖，进行病毒的分离，经PCR和间接免疫荧光（IFA）方法鉴定，确定分... 详细信息

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒（REV）长末端重复序列（LTR）的特异性引物作为检测引物，对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖，进行病毒的分离，经PCR和间接免疫荧光（IFA）方法鉴定，确定分离到2株REV，分别来自于针尾鸭和绿头鸭，将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90，并进行序列分析。结果显示，2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99．5％；DBYR1101gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95．7％、94．2％和98．2％；DBYR1102gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95．2％、93．7％和97．7％；与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94．7％和94．2％；与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99．2％-100％。核苷酸遗传进化分析表明，2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近，趋于形成1个北方分离群；与SNV株亲缘关系最远；与170A株亲缘关系较远；与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离NREV，丰富了REV流行病学资料，同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色，为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒分离株鉴定鸭源 gp90基因序列相似性间接免疫荧光 PCR检测

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