检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 1-8页

作者：史鑫琪季朝阳陈晓彤张子博张鑫郭慧娟田璐王洪峰陈洪岩王靖飞冯力夏长友孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV... 详细信息

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

关键词：猪氨基肽酶N 猪传染性胃肠炎病毒 CRISPR/Cas9 ST细胞

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一种制备细菌菌影的方法

一种制备细菌菌影的方法

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作者：王春来刘思国于申业李刚 150069 黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号

本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2... 详细信息

标准号: CN108410785B

本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。

关键词：裂解盒制备基因工程亚单位疫苗表达外源基因表达载体外源基因细菌菌影信号序列重组细菌基因菌影细菌疫苗克隆转化应用

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黑龙江省Ⅰ群4型禽腺病毒分离鉴定及致病性试验

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动物医学进展 2019年第10期40卷 39-43页

作者：朱庆贺王爽张莎张鹏宇陈曦杨旭东王观悦史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161005 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150000

为鉴定一种以鸡心包积液、肝炎为主要临床症状疾病的病原,采集3份发病鸡肝脏组织,接种9日龄SPF鸡胚分离病毒,并进行PCR鉴定及序列分析。结果表明,鸡胚尿囊液中检测出大小约1 032 bp的目的片段,序列比对分析显示,分离的病毒与禽腺病毒C种... 详细信息

为鉴定一种以鸡心包积液、肝炎为主要临床症状疾病的病原,采集3份发病鸡肝脏组织,接种9日龄SPF鸡胚分离病毒,并进行PCR鉴定及序列分析。结果表明,鸡胚尿囊液中检测出大小约1 032 bp的目的片段,序列比对分析显示,分离的病毒与禽腺病毒C种4型同源性最高,达98.30%~98.80%。理化特性分析表明,病毒无血凝性,对BUDR敏感,对氯仿、乙醚不敏感。中和试验证实,4型禽腺病毒阳性血清能够有效中和病毒的感染,分离病毒攻毒SPF雏鸡后能够完全复制出与临床自然感染鸡相同的症状,病理组织学结果显示肝脏组织切片出现大量嗜碱性核内包涵体,心肌纤维间隙炎性细胞浸润。说明分离得到的病毒为禽腺病毒Ⅰ群4型。

关键词：禽腺病毒心包积水综合征分离病理生物学特性鉴定

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禽重要免疫抑制病防控关键技术创制写应用

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中国科技成果 2019年第4期20卷 32-33页

作者：王笑梅高玉龙刘长军祁小乐张艳萍高宏雷王永强王牟平李海燕张连祥高立中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨国生生物科技股份有限公司北京华都诗华生物制品有限公司北京市兽医生物药品厂

我国家禽年饲养量超过100亿只,养禽业已成为“乡村振兴战略”跨入新时代的重要支柱。然而,传染性法氏囊病(IBD),马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)等重要禽病毒性免疫抑制病严重威胁养禽业的健康发展。禽免疫抑制病常呈混合感染,IBD民间俗... 详细信息

我国家禽年饲养量超过100亿只,养禽业已成为“乡村振兴战略”跨入新时代的重要支柱。然而,传染性法氏囊病(IBD),马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)等重要禽病毒性免疫抑制病严重威胁养禽业的健康发展。禽免疫抑制病常呈混合感染,IBD民间俗称鸡的“艾滋病”,MD是禽类最重要的肿瘤病,AL同时还是重要的种源性遗传病,在我国广泛流行,导致大型种禽场倒闭,给我国养禽业造成严重危害,同时也严重威胁我国家禽品种安全,是国家指定优先防治的重要禽病。

关键词：病毒性免疫抑制病家禽传染性法氏囊病应用技术防控马立克氏病养禽业

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基于辅助质粒和PCR产物的蓝舌病病毒反向遗传拯救方法及其应用

基于辅助质粒和PCR产物的蓝舌病病毒反向遗传拯救方法及其应用

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作者：徐青元葛金英孙恩成步志高 150069 黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

本发明公开了一种蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)的反向遗传方法和应用。本发明将辅助质粒和蓝舌病病毒PCR产物分两次转染BHK‑21细胞从而拯救病毒。本发明的蓝舌病病毒反向遗传拯救方法可用于BTV的致病机制研究、免疫机制研究以及重... 详细信息

标准号: CN109321598A

本发明公开了一种蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)的反向遗传方法和应用。本发明将辅助质粒和蓝舌病病毒PCR产物分两次转染BHK‑21细胞从而拯救病毒。本发明的蓝舌病病毒反向遗传拯救方法可用于BTV的致病机制研究、免疫机制研究以及重组疫苗的制备。

关键词：蓝舌病病毒遗传辅助质粒免疫机制致病机制重组疫苗可用转染制备病毒细胞研究应用

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识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用

识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样...

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作者：蔡雪辉孙明霞涂亚斌王淑杰 150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号

本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验... 详细信息

标准号: CN109536456A

本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。

关键词：单克隆抗体病毒样颗粒特异性识别定性间接免疫荧光实验猪圆环病毒2型非特异性蛋白杂交瘤细胞株定量分析病毒粒子定量检测粒子结构保藏包被分泌破碎检测应用

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焦亡相关蛋白GSDMD在制备菌蜕疫苗中的应用

焦亡相关蛋白GSDMD在制备菌蜕疫苗中的应用

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作者：于申业刘思国曹俊 150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号

本发明公开了焦亡相关蛋白GSDMD在制备菌蜕疫苗中的应用。本发明构建了含有焦亡相关蛋白GSDMD编码基因的溶菌质粒，将其转入肠炎沙门氏菌中，在阿拉伯糖诱导下使细菌裂解，成功获得了沙门氏菌新型菌蜕疫苗。实验证明，GSDMD介导的溶菌... 详细信息

标准号: CN109303916A

本发明公开了焦亡相关蛋白GSDMD在制备菌蜕疫苗中的应用。本发明构建了含有焦亡相关蛋白GSDMD编码基因的溶菌质粒，将其转入肠炎沙门氏菌中，在阿拉伯糖诱导下使细菌裂解，成功获得了沙门氏菌新型菌蜕疫苗。实验证明，GSDMD介导的溶菌具有极长的持续期，裂解率达到99.9985％以上。采用本发明制备得到的新型菌蜕免疫小鼠后，可以刺激机体产生强烈的体液免疫和细胞免疫，诱导了保护性免疫应答并且能够保护实验动物抵抗沙门氏菌感染，说明本发明制备得到的沙门氏菌菌蜕疫苗具有良好的免疫保护效果。

关键词：制备沙门氏菌疫苗溶菌诱导蛋白体液免疫和细胞免疫保护性免疫应答肠炎沙门氏菌免疫保护效果沙门氏菌感染阿拉伯糖编码基因免疫小鼠实验动物细菌裂解持续期构建介导裂解质粒转入抵抗刺激应用成功

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重新认识牛流行热及其疫苗

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中国奶牛 2018年第5期 47-49页

作者：杨金雨李赞王丹哈尔滨兽医研究所哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨150069 徐州中牧畜禽门诊部徐州221000

牛流行热对我国的养牛业造成很大经济损失,但目前并未引起牧场的足够重视。本文着重分析了养殖生产中对牛流行热及其危害的认识误区,并对牛流行热疫苗作用及使用认识误区进行分析阐述,以期达到指导养牛业健康发展的作用。

关键词：牛流行热牛流行热疫苗认识误区

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猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用

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作者：冯力时洪艳陈建飞佟有恩张鑫王牟平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨国生生物科技股份有限公司

生猪产业事关国计民生，是全面实现小康社会的重要支柱产业。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)感染是哺乳仔猪死亡的“第一杀手”，7日龄以内仔猪感染死亡率可高达100%,每年经济损失超过100亿元。2... 详细信息

标准号: 1900010456

生猪产业事关国计民生，是全面实现小康社会的重要支柱产业。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)感染是哺乳仔猪死亡的“第一杀手”，7日龄以内仔猪感染死亡率可高达100%,每年经济损失超过100亿元。2010年后猪病毒性腹泻疫情再次爆发，使生猪产业遭受重创，引起我国政府高度关注。疫苗是防控该类疫病的最有效手段。针对我国这三种病毒混合感染日趋严重的现实问题，该项目组历经12年科学攻关，发明了我国首个安全高效猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒(G5型)三联活疫苗(以下简称猪病毒性腹泻三联活疫苗)，攻克了三种病毒混合感染无疫苗可用的难题，实现了猪病毒性腹泻精准高效防控。主要发明创造如下： 1.发明了适应传代细胞系的安全性高、免疫原性好，具有独特分子标记的TGEV、PEDV和PoRV(G5型)弱毒株，攻克了三种猪腹泻病毒难以适应细胞、致弱过程中免疫原性减弱、强弱毒株难以区分的世界性难题。通过筛选敏感传代细胞系，优化添加胰酶、二甲基亚砜(DMSO)等辅助因子使病毒成功适应细胞。在病毒致弱过程中，采用敏感细胞系和未吃初乳仔猪交替继代，结合固相病毒蚀斑克隆及全基因组测序等技术，优选安全性高、免疫原性好的克隆株，独创了猪腹泻病毒分离致弱体系，发明了安全、稳定、免疫原性好并具有独特分子标记的TGEV华毒株、PEDV CV777株和PoRV G5型NX株三种弱毒株，为三联活疫苗的创制及产业化奠定了关键性基础。 2.创制了我国首个安全离效的猪病毒性腹泻三联活疫苗，主、被动免疫保护率分别高达96.15%和88.67%,实现了一针防三病。创建了传代细胞系替代原代细胞的生产新工艺，降低约2/3的生产成本，突破了原代细胞培养过程中外源病毒污染难以控制的技术瓶颈。制定了疫苗制造与检验规程及质量标准。利用发明的三种弱毒株及新工艺，创制了我国首个猪病毒性腹泻三联活疫苗，主动免疫保护率96.15%,被动免疫保护率88.67%，对哺乳仔猪、妊娠母猪在内的所有猪只均安全。该疫苗的发明填补了我国无猪病毒性腹泻三联活疫苗、无猪轮状病毒疫苗可用的空白，对单一感染与混合感染均有效，实现了一针防三病。 3.创立了与疫苗配套应用的检测和监测技术体系，实现了猪病毒性腹泻精准高效防控。根据疫苗毒株独特的分子标记，独创了与该疫苗完全匹配的强、弱毒株鉴别诊断方法，实现了疫苗株与野毒株的鉴别；建立了敏感特异的抗原、抗体检测和监测技术；制订了猪病毒性腹泻诊断行业标准；创立了以疫苗为核心、以诊断为支撑的猪病毒性腹泻精准高效防控技术体系。获国家发明专利2项、国家二类新兽药证书1项，制订行业标准2项；获黑龙江省技术发明一等奖1项、中国专利优秀奖1项；发表文章81篇(SCI 23篇)。疫苗转让含4家上市公司在内的7家生产企业，金额1.10亿元。疫苗在全国累计应用2560万头份，免疫覆盖仔猪1.54亿头，实现销售收入2.01亿元。经测算经济效益为38.94亿元，社会生态效益显著。

关键词：猪三联活疫苗鉴别诊断方法

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一株鹌鹑源禽流感病毒A/quail/Jilin/7/2015(H9N2)的遗传进化分析和致病性研究

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中国预防兽医学报 2017年第12期39卷 957-962页

作者：刘慧敏蒋烈戈王时李雪孙项南唐雷刘景利哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 新疆兵团第九师畜牧科学研究所新疆额敏834601

为探究从死亡鹌鹑肺脏分离鉴定出的1株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)A/quail/Jilin/7/2015(简称QA/JL/7/15)在流感病毒生态分布中的进化关系,本研究对QA/JL/7/15株进行了全基因序列测定,并结合Gen Bank中登录的代表性H9N2亚型流感病毒的基因... 详细信息

为探究从死亡鹌鹑肺脏分离鉴定出的1株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)A/quail/Jilin/7/2015(简称QA/JL/7/15)在流感病毒生态分布中的进化关系,本研究对QA/JL/7/15株进行了全基因序列测定,并结合Gen Bank中登录的代表性H9N2亚型流感病毒的基因组序列及其它参考株序列进行了遗传进化分析。结果显示,QA/JL/7/15为一株重组病毒,血凝素基因(HA)来自A/chicken/Jiangsu/1/00类病毒株;神经氨酸酶(NA)来自A/chicken/Guangxi/KMIII/1999类病毒株;PB2基因来自A/duck/Shantou/163/2004类病毒株;PB1、PA、NP和NS基因来自A/chicken/Shanghai/F/98类病毒株;M基因来自A/Quail/Hong Kong/G1/97类病毒株。HA基因与近年中国湖北分离株A/chicken/Hubei/R386/2012(H9)的核苷酸序列同源性最高(98.5%),HA裂解位点推导氨基酸序列为"-RSSR-",为典型低致病性AIV的特征序列,动物实验也显示该病毒株对鸡和小鼠呈现低致病性。本研究首次证实H9N2重组病毒株在我国鹌鹑中出现,为AI防控提供了实验依据。

关键词：禽流感病毒鹌鹑 H9N2亚型

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