检索结果-内蒙古大学图书馆

乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 347-352页

作者：徐维祯谷鸿喜郝美丽马延秀李皓乐汪颖楠哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室 311121 加州大学圣地亚哥分校圣地亚哥92092

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于10^4copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。

关键词：乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系

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致凋亡的声动力疗法诱导巨噬细胞线粒体钙升高的机制研究

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现代生物医学进展 2019年第7期19卷 1212-1217页

作者：高维伟盛思琪曹正宇谭凡成田野哈尔滨医科大学附属第一医院心血管疾病研究所黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院心内科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学病理学与病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的:研究致凋亡的声动力疗法诱导巨噬细胞线粒体钙升高的机制。方法:应用佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞进行实验研究。选用5-氨基酮戊酸(ALA)作为声敏剂,进行声动力治疗(SDT)。应用流式细胞术证实SDT显著促进了细胞凋亡... 详细信息

目的:研究致凋亡的声动力疗法诱导巨噬细胞线粒体钙升高的机制。方法:应用佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞进行实验研究。选用5-氨基酮戊酸(ALA)作为声敏剂,进行声动力治疗(SDT)。应用流式细胞术证实SDT显著促进了细胞凋亡;应用Rhod 2/AM实时监测线粒体Ca^(2+)水平;通过蛋白质免疫印迹对全细胞蛋白中的Bax、Cleaved-caspase3、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)和三磷酸肌醇Ⅲ型受体(IP3R-Ⅲ)进行检测;应用VDAC1抗体进行免疫共沉淀,检测VDAC1和IP3R-Ⅲ之间的相互作用;实时监测线粒体Ca^(2+)水平,检测VDAC抑制剂DIDS和IP3Rs抑制剂2-ABP对SDT效果的影响。结果:与对照组相比,仅SDT组出现了显著的细胞凋亡(P<0.001)。与对照组相比,ALA对线粒体Ca^(2+)水平无明显影响,超声诱导了线粒体Ca^(2+)水平的明显升高,SDT诱导了线粒体Ca^(2+)水平快速且大幅度的升高,且去除超声后仍维持在较高水平。与对照组相比,超声对Bax、Cleaved-caspase3、VDAC1和IP3R-Ⅲ的表达无明显影响,ALA诱导了VDAC1(P<0.01)和IP3R-Ⅲ表达量的增加(P<0.05),SDT诱导了Bax(P<0.001)、Cleaved-caspase3(P<0.001)、VDAC1(P<0.01)和IP3R-Ⅲ(P<0.05)表达量的增加,VDAC1和IP3R-Ⅲ的增加幅度与ALA组接近;ALA和SDT均诱导了VDAC1和IP3R-Ⅲ之间相互作用的显著增强(P<0.05)。DIDS和2-ABP均明显抑制了SDT诱导的线粒体Ca^(2+)增加。结论:在致凋亡的SDT作用于THP-1巨噬细胞的过程中,ALA诱导了线粒体外膜Ca^(2+)转运通道VDAC1和内质网重要Ca^(2+)转运通道IP3R-Ⅲ的表达量增加与二者间相互作用的增强,在内质网和线粒体之间建立了大量的Ca^(2+)转运通道,超声的作用则在于触发这些Ca^(2+)转运通道的开放,进而引发线粒体钙的迅速增加。这是后续线粒体凋亡通路启动的重要机制之一。

关键词： SDT 巨噬细胞 VDAC1 IP3R-Ⅲ Ca2+

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钙敏感受体表达变化对实验性糖尿病大鼠心肌超微结构的影响

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临床医学进展 2019年第2期9卷 116-120页

作者：白淑芝吴昊姜哓姝吴昱哈尔滨医科大学病理生理学教研室黑龙江哈尔滨黑龙江省森工总医院黑龙江哈尔滨哈尔滨医科大学附属第二临床医院黑龙江哈尔滨

目的:观察钙敏感受体(CaSR)表达变化对实验性糖尿病大鼠心肌超微结构的影响。方法:Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病4周组和糖尿病8周组。通过高糖高脂饮食喂养联合腹腔注射STZ (30 mg/kg)建立糖尿病模型。通过透射电镜观察各组大鼠心... 详细信息

目的:观察钙敏感受体(CaSR)表达变化对实验性糖尿病大鼠心肌超微结构的影响。方法:Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病4周组和糖尿病8周组。通过高糖高脂饮食喂养联合腹腔注射STZ (30 mg/kg)建立糖尿病模型。通过透射电镜观察各组大鼠心肌超微结构的改变,心肌组织CaSR蛋白的表达通过Western blot检测。结果:与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌CaSR蛋白表达随着病程的延长逐渐降低,心肌结构损伤严重。结论:在大鼠糖尿病心肌病发生发展过程中CaSR的表达逐渐下降,可能导致糖尿病心肌损伤、发生糖尿病心肌病的原因之一。

关键词：钙敏感受体糖尿病心肌

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NLRP3炎症小体及其相关通路与动脉粥样硬化研究进展

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现代生物医学进展 2019年第8期19卷 1587-1590页

作者：李想郭淑媛郭心蕊盛思琪田野哈尔滨医科大学病理学与病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第一医院心脏病研究所黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院超声科黑龙江哈尔滨150001

动脉粥样硬化所导致的心血管病是人类致死致残的重要原因。炎症因素作为重要危险因素已得到研究者共识,越来越多的证据表明炎症参与了从早期内皮功能障碍到晚期斑块破裂的AS形成的各个阶段。CANTOS研究作为测试AS炎症假说的第一个大规... 详细信息

动脉粥样硬化所导致的心血管病是人类致死致残的重要原因。炎症因素作为重要危险因素已得到研究者共识,越来越多的证据表明炎症参与了从早期内皮功能障碍到晚期斑块破裂的AS形成的各个阶段。CANTOS研究作为测试AS炎症假说的第一个大规模临床试验,为寻找IL-1β介导的炎症性AS的潜在治疗靶点提供依据。Nod样受体蛋白3炎症小体作为固有免疫系统的一种识别受体,可引起半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1激活,产生和释放成熟的促炎因子白细胞介素1-β,参与炎症反应发生发展。本文对胆固醇结晶,氧化低密度脂蛋白,血流动力学改变,斑块内细胞代谢方式变化等对NLRP3炎症体激活机制以及NLRP3炎症小体的激活途径和临床治疗方法进行综述,以期通过对NLRP3及其相关通路的研究,为临床动脉粥样硬化治疗提供新思路。

关键词： Nod样受体蛋白3炎症小体半胱天冬氨酶-1 白细胞介素1-β 瓦伯格效应动脉粥样硬化

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声动力疗法通过p38MAPK/SRF通路抑制血管平滑肌细胞表型转化和动脉内膜增生

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哈尔滨医科大学学报 2019年第4期53卷 331-336页

作者：李志韬关羽田振郭媛媛哈尔滨医科大学病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨市平房区农业农村局黑龙江哈尔滨150060 哈尔滨医科大学附属第二医院心内科黑龙江哈尔滨150081

目的研究声动力疗法(SDT)对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和内膜增生的作用及机制。方法通过球囊损伤建立大鼠颈动脉内膜增生模型。应用HE染色、免疫组化、Western blot等方法观察加入p38MAPK抑制剂前后SDT对内膜增生和VSMC... 详细信息

目的研究声动力疗法(SDT)对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和内膜增生的作用及机制。方法通过球囊损伤建立大鼠颈动脉内膜增生模型。应用HE染色、免疫组化、Western blot等方法观察加入p38MAPK抑制剂前后SDT对内膜增生和VSMCs不同表型标记物表达的影响。结果与对照组相比,SDT处理后动脉新生内膜与中膜比值明显减少,免疫组化染色显示PCNA阳性细胞百分比显著减少,Western blot显示收缩型VSMCs标记物SM22α和α-SMA以及磷酸化p38 MAPK和血清应答因子(SRF)表达增加。应用p38MAPK抑制剂逆转了SDT对VSMC表型转化和内膜增生的抑制。结论SDT通过p38MAPK/SRF通路抑制VSMC表型转化和内膜增生。

关键词：声动力疗法血管平滑肌细胞表型转化 p38丝裂原活化蛋白激酶血清应答因子

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优化建立猪多能性细胞及向神经谱系细胞特异性分化

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解剖学报 2019年第1期50卷 24-28页

作者：李雪张犇牛淑冬王玉阁文丽波梁晨齐晓娟李宇雷蕾齐齐哈尔医学院生理学教研室黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔市第一医院心内科黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医学院第三附属医院对外协作科黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医学院机能实验学教研室黑龙江齐齐哈尔161000 哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨建立猪多能性细胞(iPPCs)的优化方案,并探求其向神经谱系细胞特异性分化的方法。方法利用经典的Yamanaka方法,联合应用组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)、甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-AZA)及Oct4病毒的重复感染,优... 详细信息

目的探讨建立猪多能性细胞(iPPCs)的优化方案,并探求其向神经谱系细胞特异性分化的方法。方法利用经典的Yamanaka方法,联合应用组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)、甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-AZA)及Oct4病毒的重复感染,优化重编程方案,诱导巴马小型猪胚胎成纤维细胞为诱导的iPPCs。通过Real-time PCR检测重编程过程中多能性基因的分子表达。通过维甲酸(RA)及细胞外基质(ECM)的联合培养,诱导iPPCs向神经谱系细胞特异性分化,免疫荧光细胞化学方法检测神经特异性标记物表达。结果应用优化方案,将猪胚胎成纤维细胞重编程为iPPCs。Real-time PCR显示,VPA和Oct4病毒的重复感染可显著促进重编程过程中多潜能基因的表达。5-AZA未显著提高多潜能基因的表达。RA及ECM的联合培养可诱导iPPCs向神经谱系细胞分化,并表达神经特异性标志基因神经元类型Ⅲβ-微管蛋白(Tuj1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论在利用优化方案建立猪多能性细胞的基础上,将其向神经谱系细胞特异性分化,对人类神经性疾病的细胞替代治疗具有重要意义。

关键词：胚胎成纤维细胞重编程诱导多能性细胞神经分化维甲酸免疫荧光猪

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NPS 2390对氧化型低密度脂蛋白诱导的A7r5细胞增殖的影响

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哈尔滨医科大学学报 2019年第3期53卷 226-229页

作者：李宏霞王彦彦张丽敏李忠哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨市儿童医院新生儿重症监护室黑龙江哈尔滨150000 哈尔滨医科大学附属第一医院肾内科黑龙江哈尔滨150001

目的研究钙敏感受体(CaSR)拮抗剂NPS 2390对氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的大鼠主动脉平滑肌(A7r5)细胞增殖能力的影响。方法用OxLDL处理A7r5细胞24 h诱导增殖,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Western blot法检测CaSR的表达以及PI3K/... 详细信息

目的研究钙敏感受体(CaSR)拮抗剂NPS 2390对氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的大鼠主动脉平滑肌(A7r5)细胞增殖能力的影响。方法用OxLDL处理A7r5细胞24 h诱导增殖,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Western blot法检测CaSR的表达以及PI3K/Akt通路的活化情况。结果与对照组相比,OxLDL促进了A7r5细胞CaSR表达(P<0.05);MTT结果显示,OxLDL促进了A7r5细胞的增殖(P<0.05),而这一作用被CaSR拮抗剂NPS 2390所抑制(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,OxLDL组p-Akt蛋白表达增加(P<0.01),而NPS 2390预处理细胞抑制了OxLDL诱导的p-Akt蛋白表达(P<0.05);与OxLDL组相比,给予LY294002(PI3K抑制剂)抑制了OxLDL诱导的A7r5细胞的增殖(P<0.05)。结论 NPS 2390通过调控CaSR/PI3K/Akt通路抑制OxLDL诱导的A7r5细胞增殖。

关键词：氧化型低密度脂蛋白增殖钙敏感受体 NPS2390

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A族链球菌毒力因子的研究进展

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国际免疫学杂志 2018年第1期41卷 54-59页

作者：肇源蔡明辉宋英莉朱辉哈尔滨医科大学生理学教研室 150081

A族链球菌（Group A Streptococcus，GAS）是能引起人类显著发病率和致死率的一类细菌。GAS的致病性与它产生的多种毒力因子有关，目前已发现的毒力因子可分为菌体成分和分泌成分两类。其中菌体成分一般与加强病原体对宿主细胞的黏附能... 详细信息

A族链球菌（Group A Streptococcus，GAS）是能引起人类显著发病率和致死率的一类细菌。GAS的致病性与它产生的多种毒力因子有关，目前已发现的毒力因子可分为菌体成分和分泌成分两类。其中菌体成分一般与加强病原体对宿主细胞的黏附能力和形成生物被膜有关，包括M蛋白、透明质酸荚膜、菌毛等，而分泌成分则多与细菌破坏宿主细胞、扰乱免疫反应有关，包括链激酶、半胱氨酸蛋白酶、胞壁蛋白酶、分泌性脂酶、链球菌溶血素等有关。因而毒力因子的研究对于GAS的防治是十分重要的。

关键词： A族链球菌毒力因子

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多元化教学模式在生理学大班授课中的实践探索

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高校医学教学研究（电子版） 2018年第3期8卷 29-32页

作者：闫彦刘国艺温海霞张颖朱辉哈尔滨医科大学生理学教研室哈尔滨150081

生理学是研究生物体及其各组成部分功能活动和规律的科学,是一门重要的基础医学理论学科。大班授课目前仍然是大多数高校临床医学、药学等专业生理学授课的主要形式。生理学大班授课多采用以教师讲授为主的传统教学,课堂气氛沉闷,教学... 详细信息

生理学是研究生物体及其各组成部分功能活动和规律的科学,是一门重要的基础医学理论学科。大班授课目前仍然是大多数高校临床医学、药学等专业生理学授课的主要形式。生理学大班授课多采用以教师讲授为主的传统教学,课堂气氛沉闷,教学效果不理想。而在传统教学的基础上融入案例式、情景式等多元化教学模式,将事半功倍地提高生理学大班授课的教学效果。

关键词：多元化教学模式生理学大班授课

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细菌酯酶研究进展

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微生物学杂志 2018年第1期38卷 110-117页

作者：韦德琴张晓兰宋英莉朱辉哈尔滨医科大学生理学教研室黑龙江哈尔滨150081

酯酶(esterase)是一类催化酯键水解和合成的酶的总称,水解时催化酯键产生甘油和脂肪酸,合成时把酸的羧基与醇的羟基脱水缩合,产物为酯类及其他芳香类物质。酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中。微生物酯酶在细菌中分布最多,广泛存在于... 详细信息

酯酶(esterase)是一类催化酯键水解和合成的酶的总称,水解时催化酯键产生甘油和脂肪酸,合成时把酸的羧基与醇的羟基脱水缩合,产物为酯类及其他芳香类物质。酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中。微生物酯酶在细菌中分布最多,广泛存在于包括链球菌、金黄色葡萄球菌、新型隐球菌、绿脓杆菌、结核杆菌等多种细菌中。目前关于酯酶和细菌毒力作用的相关性研究正处于起始阶段。本文对酯酶的结构、分类、作用机制、基因调控,以及一些代表性细菌酯酶的具体研究进展进行综述。

关键词：细菌酯酶毒力基因调控

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