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SHP-2通过ERK和JNK通路调节PC12细胞应对NGF的细胞生存和凋亡

中国病理生理杂志 2009年第7期25卷 1348-1354页

作者：祝晓春张力司云凤孙东升齐琦王果元董红岩王秀丽李弘王丽娜赵雅君李全凤徐长庆田野哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江哈尔滨150081

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-... 详细信息

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF5h后分别用Westernblotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)表达变化。结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡。Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染pIRES-SHP-2野生型组p-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组p-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和pIRES-GFP组p-ERK表达明显低于pIRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组p-JNK表达高于NGF去除对照组;pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,pIRES-GFP-SHP-2野生型组低于pIRES-GFP空载体组。结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用。

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶 PC12细胞细胞凋亡神经生长因子 ERK通路 JNK通路

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缺氧后适应中蛋白激酶C_ε与钙敏感受体相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用

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中国病理生理杂志 2009年第8期25卷 1457-1462页

作者：王艳丽孙智睿杜丽娟于雪王景晓赵雅君徐长庆张伟华哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江哈尔滨150086

目的:研究缺氧后适应中蛋白激酶Cε(PKCε)与钙敏感受体(CaR)相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用。方法:Wistar乳鼠(出生后3-7d)心肌细胞培养3-5d,随机分为7组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),缺氧后适应组(HPC组),GdCl3组(GdCl3,N... 详细信息

目的:研究缺氧后适应中蛋白激酶Cε(PKCε)与钙敏感受体(CaR)相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用。方法:Wistar乳鼠(出生后3-7d)心肌细胞培养3-5d,随机分为7组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),缺氧后适应组(HPC组),GdCl3组(GdCl3,NiCl2,CdCl2组),caffeine组(caffeine,GdCl3,NiCl2,CdCl2组),PKCε抑制剂组(PKCI组)和PKCI+GdCl3组(PKCI,GdCl3,NiCl2,CdCl2组)。采用饱和氮气pH6.8的D-Hanks液和含20%新生牛血清的DMEM液复制心肌缺氧/复氧模型。检测各组细胞存活率及各组乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量变化,Westernblotting检测心肌细胞膜CaR和PKCε蛋白表达水平,免疫共沉淀检测细胞膜上CaR和PKCε的相互作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化,TUNEL染色观察细胞凋亡。结果:H/Re、GdCl3和PKCI组的细胞存活率低于对照组和HPC组;反之,LDH活力和MDA含量高于对照组和HPC组。同时,在GdCl3、caffeine和PKCI+GdCl3组CaR的蛋白表达水平较HPC和PKCI组增高,且[Ca2+]i和细胞凋亡率也高于后2组;而PKCI和PKCI+GdCl3组PKCε蛋白表达水平低于H/Re、HPC、GdCl3和caffeine组。免疫共沉淀检测到CaR和PKCε在细胞膜上发生相互作用。结论:在乳鼠心肌细胞缺氧后适应中,PKCε已转位到细胞膜和CaR相互作用,此相互作用能减少[Ca2+]i,对缺氧的乳鼠心肌细胞在进行复氧时产生保护作用。

关键词：缺氧后适应蛋白激酶C 受体钙敏感心肌细胞

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SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用

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中国药理学通报 2009年第8期25卷 1086-1089页

作者：司云凤祝晓春孙东升齐琦王果元金成艳王丽娜徐长庆田野张力哈尔滨医科大学病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。

关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2 三氧化二砷细胞凋亡 ERK JNK HEK293T细胞细胞信号转导

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哈茨木霉Cu-ZnSOD的克隆表达及活性鉴定

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哈尔滨工业大学学报 2009年第3期41卷 102-107页

作者：杨力明杨谦李森孙克宁田野哈尔滨工业大学生命科学与工程系哈尔滨150001 哈尔滨医科大学病理生理学教研室哈尔滨150081 哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨150001

为研究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的生物防治机制并获得与生物防治相关基因,通过构建哈茨木霉菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)基因的全长cDNA... 详细信息

为研究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的生物防治机制并获得与生物防治相关基因,通过构建哈茨木霉菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)基因的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为465 bp,编码154个氨基酸,理论分子量为15.7 ku.将该基因构建到表达载体pET28上,转化到大肠杆菌BL21菌株中,通过诱导表达条件的优化后,经裂解菌体取上清进行酶活鉴定,确定在蛋白水平上得到了表达.蛋白质表达的最佳条件为:IPTG浓度为0.125 mmol/L,OD600为0.600,培养温度37℃,诱导时间为4 h.目的蛋白SOD的粗酶活为26.69 U/mL.该研究结果为进一步研究哈茨木霉的抗逆境胁迫分子生物学机制奠定基础.

关键词：哈茨木霉超氧化物歧化酶表达活性鉴定

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SHP-2^(C459/S)突变体在三氧化二砷诱导的HEK293T细胞凋亡中的作用

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哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 313-315页

作者：董红岩司云凤孙东升祝晓春齐琦王果元金成艳王丽娜李全凤赵雅君田野徐长庆张力哈尔滨医科大学病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用。方法显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染入HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光... 详细信息

目的观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用。方法显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染入HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光度法检测细胞增殖。结果SHP-2C459/S突变体能增强细胞凋亡和减轻增殖抑制。结论SHP-2可能参与到As2O3诱导的细胞凋亡和增殖抑制的信号转导通路中。

关键词： SHP-2 三氧化二砷凋亡增殖

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异丙肾性心肌梗死大鼠钙敏感受体的表达和凋亡通路的变化

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中国病理生理杂志 2009年第1期25卷 48-53页

作者：郭津徐长庆李鸿珠裴天仙王丽娜张力张伟华徐曼林岩田野哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江生物医药工程重点实验室黑龙江哈尔滨150086

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在异丙肾性心肌梗死大鼠的表达和凋亡通路的变化。方法:采用连续2 d大剂量异丙肾上腺素(200 mg/kg)皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(control);异丙肾上腺素1 d组(ISO/1d);异... 详细信息

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在异丙肾性心肌梗死大鼠的表达和凋亡通路的变化。方法:采用连续2 d大剂量异丙肾上腺素(200 mg/kg)皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(control);异丙肾上腺素1 d组(ISO/1d);异丙肾上腺素2 d组(ISO/2d)。采用RT-PCR和Western blotting分别观察CaSR、bax、bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜和电镜分别观察心肌形态学和超微结构变化;紫外分光法检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白(cTnT)水平。结果:与正常组比较,ISO/1d组:LDH和CK活性、cTnT水平和MDA含量、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时SOD活性降低,Bcl-2表达减少,心肌细胞超微结构损伤严重;ISO/2d的心肌损伤指标较ISO/1d组有所减轻。结论:CaSR表达增多可能参与了异丙肾性大鼠心肌梗死的发生,其机制与氧化应激和细胞凋亡有关。

关键词：受体,钙敏感大鼠心肌梗死细胞凋亡异丙肾上腺素

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PPAR-γ激动剂减轻缺氧性大鼠神经细胞损伤的作用机制

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中国病理生理杂志 2009年第1期25卷 89-92页

作者：张婧媛张艳桥张一娜裴丽春徐长庆杨微哈尔滨医科大学附属第二临床医学院老年病科黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第三临床医学院内科黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药学院黑龙江哈尔滨150086

目的:观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧再复氧损伤中的作用以及PPAR-γ与环加氧酶-2(COX-2)的关系。方法:原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组、缺氧再复氧组、PPAR-γ激动剂(ciglitazon... 详细信息

目的:观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧再复氧损伤中的作用以及PPAR-γ与环加氧酶-2(COX-2)的关系。方法:原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组、缺氧再复氧组、PPAR-γ激动剂(ciglitazone)+缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定神经细胞生存率,用Western印迹法检测COX-2蛋白表达情况。结果:大鼠原代皮质神经细胞经ciglitazone预处理的缺氧再复氧组神经细胞生存率明显高于单独缺氧再复氧组(P<0.05);并且其COX-2蛋白表达水平也明显低于缺氧再复氧组(P<0.05)。结论:PPAR-γ激动剂(ciglitazone)能够减轻缺氧再复氧后神经细胞的损伤。保护作用可能是通过降低COX-2蛋白表达水平而实现的。

关键词：大鼠缺氧神经元环加氧酶-2 过氧化物酶增殖物激活受体γ

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中药益坤宁对围绝经期大鼠海马芳香化酶表达的影响

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哈尔滨医科大学学报 2009年第6期43卷 532-535页

作者：樊蓉田艳君崔清志张国栋韩蕊娜温海霞张广美刘国艺哈尔滨医科大学生理学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第一临床医学院妇产科黑龙江哈尔滨150001

目的观察中药益坤宁对围绝经期大鼠海马芳香化酶表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机制。方法采用自然老化法建立围绝经期大鼠模型。选择处于围绝经期的雌性Wistar大鼠(12～14月龄)30只,随机分为围绝经期对照组、西药对照... 详细信息

目的观察中药益坤宁对围绝经期大鼠海马芳香化酶表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机制。方法采用自然老化法建立围绝经期大鼠模型。选择处于围绝经期的雌性Wistar大鼠(12～14月龄)30只,随机分为围绝经期对照组、西药对照组和中药益坤宁组,分别以生理盐水、利维爱和益坤宁连续灌胃4周;另取5月龄大鼠10只作为青年对照组,生理盐水连续灌胃4周。通过HE染色法观察大鼠海马神经元形态学变化,免疫组化法检测大鼠海马芳香化酶蛋白的表达,RT-PCR检测各组大鼠海马芳香化酶mRNA的表达。结果HE染色显示中药益坤宁组大鼠海马神经元胞体和胞核较围绝经期对照组显著增大,神经元密度增加(P<0.01)。免疫组化结果显示,芳香化酶蛋白表达于各组大鼠海马的神经元内,中药益坤宁组大鼠芳香化酶蛋白的表达明显高于围绝经期对照组(P<0.01);RT-PCR结果显示,青年对照组、中药益坤宁组和西药对照组芳香化酶mRNA的表达均高于围绝经期对照组(P<0.01),且mRNA表达的结果与蛋白表达的结果一致。结论益坤宁能够促进海马神经元的生长,上调围绝经期大鼠海马芳香化酶蛋白和mRNA的表达,可能是其治疗围绝经期综合征的机制之一。

关键词：益坤宁大鼠围绝经期海马芳香化酶

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鸟氨酸脱羧酶/多胺系统在大鼠缺血预适应心肌保护中的作用

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中国病理生理杂志 2009年第12期25卷 2295-2301页

作者：赵雅君张伟华王艳丽李红珠王丽娜李弘韩丽平林岩吴博李宏霞徐曼徐长庆哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江哈尔滨150086 温州医学院生理教研室浙江温州325035 齐齐哈尔医学院病理生理教研室黑龙江齐齐哈尔161006

目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)/多胺系统在缺血预适应(IPC)心肌保护中的作用。方法:应用离体灌流大鼠心脏复制模拟心肌缺血/再灌注模型。心脏随机分为6组:对照组(control)、缺血/再灌注组(IR)、弱缺血预适应组(IPCw)、强缺血预适应组(IPCs... 详细信息

目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)/多胺系统在缺血预适应(IPC)心肌保护中的作用。方法:应用离体灌流大鼠心脏复制模拟心肌缺血/再灌注模型。心脏随机分为6组:对照组(control)、缺血/再灌注组(IR)、弱缺血预适应组(IPCw)、强缺血预适应组(IPCs)、IPCw+多胺抑制剂组(DF-EG-IPCw)和IPCs+多胺抑制剂组(DF-EG-IPCs)。免疫印迹法定量分析多胺合成限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)的表达;高效液相色谱测定心肌组织中的多胺(腐胺、精脒、精胺)含量;Powerlab多导生理记录系统记录心脏功能;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;TUNEL方法检测细胞凋亡率,比较其中的差异性。结果:(1)与对照组比,IR组ODC表达下调,腐胺含量增加,精胺含量减少,总多胺池减少(P<0.05),此时心功能下降(LVDP、HR、CF均低于对照组,P<0.05),心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率增加(P<0.05);(2)与IR组比,弱及强缺血预处理组(IPCw、IPCs)心肌ODC表达上调,腐胺含量减少,精胺含量增加,总多胺池增加(P<0.05或P<0.01),此时大鼠心功能有明显改善(LVDP、HR、CF与IR组比,P<0.05),心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率均明显降低(P<0.01);(3)给予多胺抑制剂后,心肌ODC表达,腐胺、精脒、精胺及总多胺池含量均明显降低(DF-EG-IPCw组vsIPCw组;DF-EG-IPCs组vsIPCs组,P<0.05或P<0.01),心功能明显下降(P<0.05),心肌梗死面积及细胞凋亡率均明显增加(P<0.05)。结论:缺血预适应能明显上调大鼠心肌ODC/多胺系统,减轻缺血/再灌注心肌损伤;多胺合成代谢抑制剂取消了预适应介导的心功能改善、缩小心肌梗死面积及减少心肌细胞凋亡的作用,提示ODC/多胺系统可能参与了缺血预适应介导的心肌保护作用。

关键词：心脏缺血预处理鸟氨酸脱羧酶多胺大鼠

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维生素E对老年雌性大鼠雌激素及海马芳香化酶表达的影响

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中国老年学杂志 2009年第9期29卷 1058-1060页

作者：孔亚坤耿秀琴尹俊杰姚兰春周艳红郭献山河南省新乡市中心医院河南新乡453000 哈尔滨医科大学生理学教研室

目的探讨维生素E用于防治绝经后女性中枢神经系统退行性疾病的作用及机制。方法采用自然衰老雌性大鼠为动物模型,实验组每日注射维生素E5mg/kg(小剂量组)、15mg/kg(中剂量组)、60mg/kg(大剂量组)(n=8)。采用放免法检测血清雌激素含量,... 详细信息

目的探讨维生素E用于防治绝经后女性中枢神经系统退行性疾病的作用及机制。方法采用自然衰老雌性大鼠为动物模型,实验组每日注射维生素E5mg/kg(小剂量组)、15mg/kg(中剂量组)、60mg/kg(大剂量组)(n=8)。采用放免法检测血清雌激素含量,用免疫组化法观察维生素E对海马芳香化酶表达的影响,并与成年大鼠(对照组)对比观察。结果老年对照组较成年对照组雌激素水平下降,中、大剂量组血清雌激素水平回升(P<0.05),海马芳香化酶表达阳性细胞数目多、表达强,大剂量组呈强阳性。结论一定剂量维生素E不仅可以提高血中雌激素水平,而且可以通过增强海马芳香化酶的表达使局部雌激素浓度增加而发挥其神经保护作用。

关键词：维生素E 自然衰老大鼠雌激素芳香化酶神经保护

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