本文旨在探讨骨髓间充质干细胞来源的外泌体(exosomes derived from bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs-EXO)对大鼠肺缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusioninjury,IRI)的影响及miR-335在其中的作用及机制。通过左肺夹闭60min、...
详细信息
本文旨在探讨骨髓间充质干细胞来源的外泌体(exosomes derived from bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs-EXO)对大鼠肺缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusioninjury,IRI)的影响及miR-335在其中的作用及机制。通过左肺夹闭60min、开放180 min建立大鼠肺IRI模型。Sprague-Dawley大鼠40只随机分为假手术组(sham)、IRI组、IRI+PBS组、IRI+EXO组和IRI+inhibitor-EXO组(n=8)。Sham组大鼠仅开胸,但不建立肺IRI模型;IRI组建立肺IRI模型,无其他任何处理;其它3组建立肺IRI模型后,于再灌注前分别给予PBS、无任何处理的BMSCs-EXO和经miR-335抑制剂处理的BMSCs-EXO。实验中进行血气分析;再灌注结束后检测肺组织湿/干重比(wet/dry ratio,W/D),以及白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;电镜下观察线粒体并记录Flameng评分;光镜下观察肺组织病理学,记录肺损伤评分(lung injury score,LIS);TUNEL法检测细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);RT-qPCR检测miR-335表达,Westernblot检测caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9、NF-κB蛋白表达。结果显示,再灌注后,与sham组相比,IRI组和IRI+PBS组氧合指数、pH、碱剩余(base excess,BE)显著降低,而与IRI+PBS组相比,IRI+EXO组氧合指数、pH、BE显著升高,与IRI+EXO组相比,IRI+inhibitor-EXO组氧合指数、pH、BE显著降低(P<0.05)。与sham组相比,IRI组W/D、IL-1β、TNF-α、MPO、MDA、LIS、AI、Flameng评分及caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleavedcaspase-9蛋白表达显著升高,NF-κB蛋白表达降低,SOD和miR-335表达显著降低(P<0.05),但IRI组和IRI+PBS组相比无显著差异。与IRI+PBS组相比,IRI+EXO组W/D、IL-1β、TNF-α、MPO、MDA、LIS、AI、Flameng评分以及caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9蛋白表达显著降低,NF-κB蛋白表达升高,SOD和miR-335表达显著升高(P<0.05)。与IRI+EXO组相比,IRI+inhibitor-EXO组中上述指标的变化均反转,但仍优于IRI+PBS组(P<0.05)。上述结果表明,BMSCs-EXO能够上调miR-335,维持线粒体结构稳定,激活NF-κB通路并减轻大鼠肺IRI。
暂无评论